胡宗文，黃新球，苗春輝，楊 娟，王艷輝

（云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所，云南 蒙自661101）

花粉是蜜蜂主要的蛋白質(zhì)來(lái)源，是促進(jìn)蜜蜂機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育和維持體內(nèi)生理功能的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)?；ǚ蹫槊鄯涮峁┝说鞍踪|(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)元素，在外界缺乏花粉或花粉單一時(shí)補(bǔ)充飼喂花粉對(duì)提高蜜蜂生理機(jī)能具有重要意義。Garance等2013年指出花粉的多樣性及質(zhì)量可以決定蜜蜂的生理，尤其是當(dāng)前在土地利用日益密集和農(nóng)業(yè)集約化下對(duì)蜜蜂的影響更為明顯[1]。很多養(yǎng)蜂者認(rèn)為饑餓和營(yíng)養(yǎng)不良是導(dǎo)致蜂群下滑的重要因素[2]，這也間接說(shuō)明了研究營(yíng)養(yǎng)可利用性與蜂群健康間的關(guān)系[3]或許是目前世界范圍內(nèi)蜂群消失（colony loss）現(xiàn)象的一個(gè)原因。幼蜂在取食花粉后分泌蜂王漿以飼喂幼蟲(chóng)、蜂王、雄蜂、工蜂[4]，因此在增長(zhǎng)的群勢(shì)中有著極大的營(yíng)養(yǎng)需求，并且不同顯花植物泌粉量、時(shí)空易變、花粉質(zhì)量有很大的不確定性[5]，導(dǎo)致了補(bǔ)充飼喂花粉對(duì)蜂群具有重要性。Garance等2016年再次指出花粉源的多樣性可以有效提高蜜蜂的健康[6]。

國(guó)內(nèi)學(xué)者也指出，花粉多樣性對(duì)蜂群群體水平和個(gè)體水平上有著顯著的意義。在缺少粉源的橡膠流蜜期間，補(bǔ)充花粉能夠提高西方蜜蜂群18%的采蜜量[7]。春繁期補(bǔ)充飼喂花粉和橡膠蜂蜜對(duì)中囊病有一定的防控效果，能提高蜂群的抗病力[8]，能提升西方蜜蜂成年工蜂體蛋白和幼蜂的形態(tài)體征[9]。然而，補(bǔ)飼花粉對(duì)東方蜜蜂初生重及體蛋白的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。初生重是評(píng)價(jià)蜜蜂質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，體蛋白體是蜜蜂發(fā)育狀況的重要體現(xiàn)，通過(guò)本次的研究能夠完善補(bǔ)飼花粉（增加花粉多樣性）對(duì)東方蜜蜂發(fā)育影響中的空白，為指導(dǎo)養(yǎng)蜂提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)蜂群：飼養(yǎng)于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所蜂場(chǎng)內(nèi)的6群東方蜜蜂，蜂群群勢(shì)相同，蜂王健康，蜜充足。試驗(yàn)于2016年12月至2017年2月進(jìn)行，該時(shí)段蜂場(chǎng)2 km半徑范圍內(nèi)沒(méi)有充足花粉源供給蜂群。花粉為2015年秋季收集的雜花粉，貯存于冷藏室。

藥品與器材：75%乙醇、尿素、CHAPS、Destreak、BCA工作液（Reagent A和B）、50 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)蛋白、ddH2O；各規(guī)格離心管、各量程移液槍、電子天平等。

1.2 試驗(yàn)方法

花粉飼喂：將群勢(shì)相同的6群中蜂隨機(jī)分為2組，一組飼喂花粉，另一組飼喂60%蔗糖液作空白對(duì)照。飼喂時(shí)將花粉用60%蔗糖液調(diào)制為條狀，放置于蜂群上框梁，濕度以剛好能把花粉捏成型為宜。2016年12月開(kāi)始每隔7 d喂1次，每次500 g，在下次飼喂前檢查蜂群，清理出未吃完的花粉。2017年3月采集剛出房工蜂進(jìn)行檢測(cè)，樣品貯存于-80℃冰箱。

初生重測(cè)定：采集到剛出房的工蜂立即送往實(shí)驗(yàn)室，置于-20℃冰箱5 min，當(dāng)蜜蜂麻痹后進(jìn)行稱重，電子天平量程為0.000 1。

體蛋白測(cè)定：以BCA蛋白測(cè)定法測(cè)定，首先配制BCA工作液，根據(jù)樣品和樣品數(shù)量，將Reagent A和B按50∶1的比例配制，充分混勻，在室溫下24 h穩(wěn)定。其次是標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，取適量50 mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)10μL，加入990μL的稀釋液即可配制為0.5 mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)。然后按表1操作。

表1 BCA法測(cè)定蜜蜂體蛋白

混勻，在37℃放置30 min，冷卻至室溫，測(cè)定A562的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品蛋白濃度。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用軟件Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，用軟件SPSS 17.0進(jìn)行方差分析和獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)?！蔼?dú)立樣本T檢驗(yàn)”主要用于兩個(gè)樣本是否來(lái)自具有相同均值的總體，其檢驗(yàn)概率P＞0.05則確定兩樣本是來(lái)自具有相同均值的總體，兩者間差異不顯著，反之則差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)飼花粉對(duì)工蜂初生重的影響

圖1補(bǔ)飼花粉對(duì)工蜂初生重的影響

飼喂花粉對(duì)東方蜜蜂工蜂初生重有顯著 影 響 （FLevene=0.443，t=2.228，df=60，P=0.03＜0.05），飼喂花粉組的工蜂初生重（0.078 1±0.000 9）g顯著高于對(duì)照組（0.075 0±0.001 0）g。通過(guò)飼喂花粉能夠有效的提高工蜂的初生重，從而為今后蜜蜂處理復(fù)雜環(huán)境打下基礎(chǔ)。

2.2 對(duì)工蜂體蛋白的影響

表2補(bǔ)飼花粉對(duì)蜜蜂體蛋白的影響

通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白確定標(biāo)準(zhǔn)曲線，方程為y=0.635 2x+0.131 3，R2=0.996 5，再以樣品吸光度OD值確定各工蜂樣品的體蛋白量，結(jié)果表明飼喂花粉對(duì)東方蜜蜂工蜂的體蛋白有顯著影響，從表2可知，飼喂花粉組的工蜂體蛋白平均為（0.576 3±0.163 1）mg，顯著高于對(duì)照組（0.475 8±0.096 9 mg，P=0.013＜0.05）。

3 討論

花粉多樣性及質(zhì)量能夠改善蜜蜂生理狀況，我們的結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，通過(guò)補(bǔ)充高質(zhì)量的花粉，更進(jìn)一步提高了蜂群中存儲(chǔ)花粉的豐富度，在長(zhǎng)期的取食后可以提高東方蜜蜂工蜂的初生重和體蛋白。這也更加證實(shí)了在自然環(huán)境中，花粉源豐富度及可利用性能夠很大程度地提升蜜蜂的健康[1]。

幼蜂，是剛出房1～4日齡的工蜂，王漿腺發(fā)達(dá)，營(yíng)養(yǎng)豐富的花粉是影響這些個(gè)體蜜蜂的重要因子。Standifer在蜜蜂的膳食結(jié)構(gòu)中添加蛋白質(zhì)的水平可以激發(fā)蜜蜂咽下腺的發(fā)育[10]。Garance補(bǔ)飼營(yíng)養(yǎng)豐富的懸鉤子花粉與差的歐石楠花粉，結(jié)果表明取食蛋白質(zhì)豐富的花粉的工蜂能促進(jìn)組織中腺泡發(fā)育和較高的卵黃原蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白基因的表達(dá)，并有顯著的抗螨性[1]。確實(shí)，在取食花粉的研究中已表明對(duì)西方蜜蜂的新陳代謝、免疫[11]、抵抗病原體能力如細(xì)菌、病毒、微孢子和降低寄生蟲(chóng)的易感性[12]。中蜂（東方蜜蜂）是我國(guó)的土著種，補(bǔ)飼花粉對(duì)提升中蜂的質(zhì)量，如初生重和體蛋白，能加強(qiáng)蜜蜂個(gè)體在日后面臨復(fù)雜環(huán)境的應(yīng)對(duì)能力均具有重要意義。