劉軍 李文靜 柳茜 劉本臣 董亞楠 張麗媛

【摘?要】?目的：優(yōu)選滴陰炎婦科洗液制備工藝并建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用單因素考察法，以溶液澄清度及3 種增溶劑[Tween-80、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407]對(duì)CHG溶解度影響程度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選最佳增溶劑;采用高效液相色譜法對(duì)滴陰炎婦科洗液中CHG的含量進(jìn)行測(cè)定并采用濾紙片法進(jìn)行抑菌效果評(píng)估。結(jié)果：增溶效果：吐溫-80>泊洛沙姆407>泊洛沙姆188;葡萄糖酸氯己定在0.0172～0.1548mg/mL與峰面積分值呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999）;滴陰炎婦科洗液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念球菌的抑菌環(huán)直徑均值分別為14.56mm、11.10mm、7.72mm。結(jié)論：滴陰炎婦科洗液制備工藝簡(jiǎn)單，建立的CHG含量測(cè)定法專屬性良好，抑菌效果良好，可用于質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】?滴陰炎婦科洗液;增溶劑;葡萄糖酸氯己定;高效液相;抑菌試驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R944.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）17-0022-05

Abstract：Objective To screen the preparation technology optimizationand to establish the quality standard of Diyinyan Gynecological Lotion. Methods Using the single factor investigation to select the best solvent based on clarifing degree of solution and three kinds of solubilizer [Tween-80， Poloxamer 188， Poloxamer407] to CHG solubility influence degree as evaluation index; To determinate the content of Chlorhexidine Gluconate in Diyinyan antibacterial agent by HPLC method， and asses the inhibitory effect through bacteriostatic test based on the disinfection technical specifications. Results Solubilization effect： Tween-80>Poloxamer 407>Poloxamer 188. the line range of Chlorhexidine Gluconate was 0.0109～0.0872mg/mL， respectively， with good linear relationship with the peak area integral value （r=0.9999）; The diameter of Bacteriostatic ring for Staphylococcus aureus， e.coli， white read aureus was 14.56mm，11.10mm，7.72mm. Conclusion the preparation technology of Diyinyan gynecological lotion with a good bacteriostatic action is simple and reasonable， The established HPLC method has good selectivity and stability for the determination of Chlorhexidine Gluconate. It can be used for the quality control of Diyinyan gynecological lotion.

Keywords：Diyinyan Gynecological lotion， Solubilizer; Chlorhexidine Gluconate; HPLC; Bacteriostatic Test

滴蟲性陰道炎是婦科領(lǐng)域常見病，其病情纏綿，不易速愈，且常并發(fā)月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、不孕等疾病。滴陰炎婦科洗液的中藥成分（由苦參、蛇床子、白鮮皮、仙鶴草等）具有清熱燥濕、殺蟲的功效，用于治療白帶增多、外陰瘙癢等癥，療效顯著[1]。筆者前期采用高速離心及無機(jī)陶瓷膜超濾技術(shù)對(duì)我院使用30余年，組方精當(dāng)?shù)脑簝?nèi)制劑“滴陰炎熏洗液”進(jìn)行工藝改進(jìn)，改善了原制劑澄清度不高的問題[1]。氯己定屬于雙胍類化合物，有較強(qiáng)廣譜抑菌、殺菌作用且毒性小，性質(zhì)穩(wěn)定，常被作為消毒有效成分廣泛應(yīng)用于消毒產(chǎn)品中，一般用于手、皮膚和黏膜的消毒[2-6]。

本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上將葡萄糖酸氯己定（CHG）與原中藥制劑復(fù)配二次開發(fā)為“消準(zhǔn)字號(hào)”產(chǎn)品并建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，擴(kuò)大其殺菌范圍，達(dá)到較高效能消毒劑水平，達(dá)到服務(wù)更廣泛人群及產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化目標(biāo)。

1?材料

1.1?儀器?JW-T-1.OB-316陶瓷膜設(shè)備（江蘇久吾高科技股份有限公司，膜材料Al2O3，膜面積0.5m2;離心泵，Q=5.8 m3/h）、XU12WZT-1C 型光電濁度儀（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司），立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）， 電子天平（METTLER TOLEDO*S205）、磁力攪拌器IKARCT digital（德國(guó)IKA），DHG-6050 型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），臥式冷藏冷凍轉(zhuǎn)換器（Haier ）BC/BD-100HEGW、BPC-150F生化培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）、MJ-1500-II霉菌培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）、定性濾紙片（5 mm圓形）、無菌棉拭子、游標(biāo)卡尺、微量移液器（10～100 μL，艾本德上海國(guó)際貿(mào)易有限公司）;

1.2?試藥?試驗(yàn)菌種為大腸埃希菌（CMCC（B）44102，批號(hào)3a28-1）、金黃色葡萄球菌 （CMCC（B）26003，批號(hào)：5a31-2）、白色念珠菌（CMCC（F）98001，批號(hào)2a17-2）;營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（190328）、沙堡瓊脂培養(yǎng)基（161219）、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（190414）;水為超純水。

2?方法與結(jié)果

2.1?處方工藝優(yōu)選

2.1.1?原液除雜工藝優(yōu)選?相比于傳統(tǒng)的醇沉工藝，超濾技術(shù)是精制滴陰炎熏洗液的一種有效方法，超濾技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于有效成分轉(zhuǎn)移率高，生產(chǎn)周期短，省去大量乙醇溶劑。本文前期以蛇床子素、氧化苦參堿的轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，采用1∶8生藥濃度滴陰炎提取液以孔徑為500 nm的Al2O3無機(jī)陶瓷膜進(jìn)行滴陰炎熏洗超濾液制備[1，4]。

2.1.2?增溶劑優(yōu)選?氯己定難溶于水，多采用溶解度好的胍鹽，如醋酸氯己定、鹽酸氯己定和葡萄糖酸氯己定。預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在滴陰炎超濾液中直接加入0.2%CHG后溶液立即變渾濁，故需添加增溶劑來改善溶解度。聚山梨酯毒性小、無刺激性，對(duì)許多有機(jī)藥物都有較好的增溶效果，且對(duì)藥物在皮膚和黏膜的吸收具有一定的促進(jìn)作用[7-8]，泊洛沙姆對(duì)皮膚黏膜無刺激性和過敏性，能增強(qiáng)難溶性藥物的溶解度，可供肌肉、皮下、靜脈注射應(yīng)用。精密稱取20 mL超濾液，分別用吐溫-80、泊洛沙姆108、泊洛沙姆407作為增溶劑，45 ℃、500 r/min攪拌至溶解，加入一定濃度CHG，攪拌均勻靜置。同一濃度下，12 h后觀察溶液物理變化（如顏色變化、澄清度變化），發(fā)現(xiàn)吐溫80的增溶澄清效果優(yōu)于泊洛沙姆系列，故選擇吐溫80為增溶劑。采用單因素考察，加入1%、2%、3%、4%吐溫-80，以CHG含量為指標(biāo)，按照“2.2.1”測(cè)定，優(yōu)選吐溫-80最佳比例。結(jié)果見討論。

2.2?含量測(cè)定

2.2.1?液相條件：色譜柱： Agilent -C18色譜柱（ 250 mm ×4.6 mm，5 μm） ; 流速： 1.0 mL /min; 柱溫：28 ℃; 進(jìn)樣量： 10 μL;流動(dòng)相： 0.02 moL /L磷酸二氫鉀水溶液（磷酸調(diào)pH至2.5） -乙腈（65∶35）; 波長(zhǎng)：254 nm。

2.2.2?對(duì)照品母液制備：精密稱取醋酸氯己定對(duì)照品適量，加80%乙醇制成1.721mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.3?供試品溶液的制備：精密量取滴陰炎超濾水液（生藥比1∶8）20mL，加入吐溫-80、CHG適量，完全溶解后，加入適量保濕劑β-葡聚糖，攪拌均勻后，用乳酸調(diào)至pH值3.7～4.5，定容至25 mL量瓶，待用。

2.2.4?陰性溶液的制備： 精密量取20 mL水溶液代替滴陰炎超濾液，按”2.2.3”項(xiàng)下的方法操作制備得陰性對(duì)照溶液。

2.2.5?標(biāo)準(zhǔn)曲線制定：取“2.2.2”對(duì)照品母液0.1、0.25、0.5、0.6、0.8、0.9 mL，用80%乙醇定容至10 mL量瓶，按“2.2.1”液相條件測(cè)定得線性回歸方程 Y=23.129X+2.9009，r2=0.9999（線性范圍在17.21～154.8 μg/mL）;

2.2.6?專屬性實(shí)驗(yàn)：分別取對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件分析。結(jié)果表明：供試品與對(duì)照品在相同的保留時(shí)間有相同色譜峰，且分離度良好為6.03（大于1.5），其理論塔板數(shù)為8535。陰性無干擾。結(jié)果如圖1所示。

2.2.7?樣品制備與測(cè)定?樣品前處理優(yōu)化：精密吸取洗液1 mL，加入0 mL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、5 mL的1 moL/L H2SO4后再用純水定容至25 mL，結(jié)果顯示當(dāng)加入1 moL/L H2SO4≤2 mL時(shí)，隨著加入量的增加，測(cè)得CHG有所增加;當(dāng)加入1 moL/L H2SO4>2 mL之后，CHG的峰面積無明顯變化;故選在滴陰炎婦科洗液樣品前處理時(shí)先加入2 mL的1 moL/L H2SO4。結(jié)果如圖2所示。

樣品制備與測(cè)定：精密吸取 1 mL滴陰炎婦科洗液于25 mL 量瓶，加入2.0 mL 的1 moL /L H2SO4溶液，搖勻，加80%乙醇稀釋至刻度，超聲（40HZ）15 min，0.22 μm 濾膜濾過后，照“2.2.1”項(xiàng)法進(jìn)行液相測(cè)定。計(jì)算公式：C樣=（C對(duì)×A樣/A對(duì)）×稀釋定容倍數(shù)×1.43。三樣品中葡萄糖酸氯己定含量為0.199% g/mL。

2.3?抑菌試驗(yàn)?參照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版中“2.1.8.2”[13]，以抑菌圈的大小為指標(biāo)，采用濾紙片法考察“2.2.”滴陰炎抑菌制劑對(duì)易引起陰道炎的3種致病菌（白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌）的抑菌能力。結(jié)果見圖3及表1。

3?討論

3.1?增溶劑的選擇?葡萄糖酸氯己定為陽(yáng)離子表面活性劑，在皮膚的消毒上具有持續(xù)抗菌活性[5]。堿性物質(zhì)如肥皂、陰離子表面活性劑、某些銀離子藥物能降低其殺菌效果[6]。吐溫-80 是帶有雙官能團(tuán)陰-非離子復(fù)合型表面活性劑，具有陰離子和非離子型表面活性劑的雙重特點(diǎn)，在水中有良好的溶解性，同時(shí)有較好的起泡能力，抗硬水、無機(jī)鹽能力，且對(duì)人體無刺激性反應(yīng)，對(duì)CHG有良好的促溶作用，是較理想的增溶劑[8]。本研究以CHG含量及溶液澄清度為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)吐溫-80、泊洛沙姆407加入量（1%、2%、3%、4%）進(jìn)行考察，結(jié)果顯示：吐溫-80不同比例對(duì)應(yīng)的CHG峰面積分別為（865.9、944.2、1277.8、1527.8），表明加入吐溫-80的滴陰炎婦科洗液中2%～3%之間溶解度明顯增加，而3%～4%溶解度增加不明顯。而泊洛沙姆407不同比例對(duì)應(yīng)的CHG峰面積分別為（1326.8、1310.2、1350.7、1387.0），12 h后觀察溶液物理變化（如顏色變化、澄清度變化），發(fā)現(xiàn)吐溫80的增溶澄清效果優(yōu)于泊洛沙姆系列。綜合考慮澄清度和性狀，選擇加入3%吐溫80。

3.2?CHG含量測(cè)定及抑菌試驗(yàn)?本研究對(duì)比了紫外分光光度測(cè)定與高效液相測(cè)定方法，結(jié)果表明紫外分光光度計(jì)測(cè)定結(jié)果偏高，且可能由于中藥成分在同一波長(zhǎng)對(duì)其有吸收，測(cè)定不穩(wěn)定且偏高。而HPLC測(cè)定靈敏度及專屬性高，較為穩(wěn)定，更適合滴陰炎婦科洗液的含量測(cè)定，故選用HPLC測(cè)定方法對(duì)CHG進(jìn)行跟蹤并作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)顯示滴陰炎婦科洗液對(duì)3種致病菌均有抑菌作用，但對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌抑菌效果優(yōu)于白色念珠菌。

滴陰炎婦科洗液適用于婦科疾病預(yù)防及治療，本研究創(chuàng)新性地將傳統(tǒng)滴陰炎熏洗液經(jīng)超濾處理后二次開發(fā)婦科洗液，具有良好的市場(chǎng)應(yīng)用和開發(fā)價(jià)值。后期將進(jìn)一步對(duì)該洗液進(jìn)行陰道黏膜刺激等研究，以期將其開發(fā)為消毒產(chǎn)品，擴(kuò)大其使用范圍。

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（收稿日期：2020-05-13?編輯：程鵬飛）