李香霖

新疆伊犁川寧生物技術有限公司 新疆伊寧 835800

現臨床上抗生素常作為預防用藥及治療用藥使用，起到抑菌或殺菌作用，但濫用抗生素會導致體內菌群紊亂、免疫系統(tǒng)遭到破壞、細菌的耐藥性增強，甚至出現內臟損傷、嚴重感染等不良反應[1]。本研究在對《規(guī)范》中測定6種抗生素和甲硝唑的HPLC方法流動相系統(tǒng)等方面進行了合并優(yōu)化，采用甲醇和0.1mol/L鹽酸（體積比1：1）提取樣品，使用乙腈-甲酸梯度洗脫系統(tǒng)，在C18色譜柱上對祛痘類化妝品中6種抗生素和甲硝唑進行分離檢測，并進行方法學驗證。所建立的方法簡便可行，科學準確；經173批次樣品檢測證明，此方法具有較強的適用性和耐用性。

1 高效液相色譜法簡介

HPLC本身是色譜法諸多技術之一，也是代表性的技術。HPLC也是藥品檢驗中的關鍵方法。主要的運作，就是以高壓輸液泵為主要的運行設備，將諸多成分比例不同的混合溶液或者單溶液，形成的流動相，借助設備將其壓進固定相的專有色譜柱，注入到樣品里，從而借助流動相就會流入到色譜柱里，在色譜柱里，各種成本就會得到充分地分離，然后逐漸進入到檢測設備中。對成本展開檢測，對樣品展開全方位的化學分析。HPLC最開始在藥品檢驗中發(fā)揮出作用，可以追溯到二十世紀的七十年代，因此從現階段HPLC的應用水平上看，還是積累了非常豐富的使用實踐經驗，可以在應對各種工作狀況時采取豐富的經驗措施。HPLC相比于傳統(tǒng)的色譜檢驗方法來看，可以實現更加固定地藥品檢驗，在檢驗過程中，能夠更好地實現對檢測物細化。

2 試驗部分

2.1 儀器與試劑

島津LC-20A高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器，日本島津公司；電子天平BSA224S-CW型與BT125D型，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；渦旋混合器，東京理化器械株式會社；高速離心機MultifugeX1R，ThermoFisherScientific；超純水機，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；KQ-500DE超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。鹽酸美滿霉素（批號1-QL-98-1，w=97%）、二水土霉素（批號19-ANR-82-1，w=98%），TRC；甲硝唑（批號100191-201507，w=100%）、鹽酸四環(huán)素（批號130488-201604，w=98.4%）、鹽酸金霉素（批號130489-201403，w=94.1%）、鹽酸多西環(huán)素（批號130485-201202，w=85.2%）、氯霉素（批號130555-201203，w=99.8%），中國食品藥品檢定研究院；甲醇，色譜純，德國Merck公司；磷酸，分析純，天津市百世化工有限公司。

2.2 色譜條件

色 譜 柱：PhenomenonLunaC18(4.6mm×250mm×5μm)；流動相：A相為乙腈，B相為質量分數0.1%甲酸，梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1；進樣量10μL；檢測波長268nm；柱溫30℃；流速1min/mL。

2.3 標準溶液的配制

分別準確稱取上述6種抗生素和甲硝唑標準物質約10mg于棕色容量瓶中，加入適量的0.1mol/L鹽酸溶液溶解后，用甲醇溶解并定容，得各抗生素單標儲備液；精密移取各標準儲備液1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，配制成混合標準溶液；用甲醇逐級稀釋配制成系列混合標準溶液。

3 結果與討論

3.1 流動相選擇

按照《規(guī)范》中檢測鹽酸美滿霉素等7種組分的方法，采用草酸+甲醇+乙腈作為流動相進行檢測，圖1列出了空白溶劑色譜圖。從中可以發(fā)現，在保留時間3min處，出現較高的溶劑峰：正峰和負峰；因草酸中含有C=O鍵，在紫外光波長210nm處有吸收。同等條件下測定鹽酸美滿霉素等7種組分的色譜圖，在相應保留時間處溶劑正峰與鹽酸美滿霉素峰部分重疊；雖然調整流動相比例可將溶劑峰與鹽酸美滿霉素峰稍分開，但分離度未達到1.0，在樣品測定中易產生假陽性判定。

3.2 色譜柱選擇

采用本研究中的系統(tǒng)條件，考察不同色譜柱對6種抗生素及甲硝唑的分離情況在3種不同色譜柱上鹽酸美滿霉素等7種組分均分離度良好。其中，鹽酸美滿霉素等7種組分保留時間稍有變化，但出峰順序一致，分離度良好；在色譜柱色譜圖中鹽酸美滿霉素和甲硝唑出峰順序不同，分離度良好；此方法較穩(wěn)定，重現性好，可用于鹽酸美滿霉素等7種組分的檢驗檢測[2-3]。

3.3 回收率與精密度

選擇不含6種抗生素和甲硝唑的水、乳、膏、霜四種不同基質化妝品各一種，每種取9份，分別加入低（60%）、中（100%）、高（140%）三個梯度的對照品，每個濃度梯度樣品做3份平行樣，作為加標回收樣，依本研究建立的方法進行樣品處理和測定，計算回收率及相對標準偏差（RSD）。不同基質中各組分的加樣回收率范圍為96.5%～110.8%，RSD范圍為0.32%～1.85%，表明方法準確性良好，所選擇的提取方法能較為完全地提取水、乳、膏和霜四種基質化妝品中的目標組分。