張洋

β-受體激動(dòng)劑，俗稱瘦肉精，不是某一種特定的藥物，而是一類藥物，能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制肥肉生長(zhǎng)。當(dāng)它們以超過(guò)治療劑量5-10倍的用量用于家畜飼養(yǎng)時(shí)，即有顯著的營(yíng)養(yǎng)“再分配效應(yīng)”，促進(jìn)動(dòng)物體蛋白質(zhì)沉積、促進(jìn)脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此曾被用作牛、羊、禽、豬等畜禽的促生長(zhǎng)劑、飼料添加劑。[1-3]

但瘦肉精用量大、作用的時(shí)間長(zhǎng)、代謝慢，所以在屠宰前到上市，在動(dòng)物體內(nèi)的殘留量都很大。這個(gè)殘留量通過(guò)食物進(jìn)入人體，就使人體漸漸地中毒，如果一次攝入量過(guò)大，就會(huì)出現(xiàn)異常的生理反應(yīng)，因此而被禁用。人若食用含瘦肉精的肉類后會(huì)出現(xiàn)頭暈、惡心、手腳顫抖、心跳加速甚至心臟驟停致昏迷死亡，特別對(duì)心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病和甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)等患者有極大危害。[4-7]

在中國(guó)，通常所說(shuō)的“瘦肉精”則是指鹽酸克倫特羅。它曾經(jīng)作為藥物用于治療支氣管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用。其它類似藥物還有沙丁胺醇和特布他林等，都因?yàn)閷?duì)人體健康危害過(guò)大，造成安全隱患，而在全球遭到禁用。在2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，農(nóng)業(yè)部分別下發(fā)文件禁止食品動(dòng)物使用β-受體激動(dòng)劑類藥物作為飼料添加劑（農(nóng)業(yè)部176號(hào)、193號(hào)公告、1519號(hào)條例）[8-12]。

因?yàn)槟軌虼龠M(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制動(dòng)物脂肪生長(zhǎng)，瘦肉精讓豬、牛、羊等牲畜的瘦肉率提高，帶來(lái)更多經(jīng)濟(jì)價(jià)值，國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖戶不顧農(nóng)業(yè)部的規(guī)定，在飼料中摻入過(guò)量瘦肉精，給市場(chǎng)上的肉類食品帶來(lái)了嚴(yán)重的安全隱患，所以研究出科學(xué)、高效、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法十分必要。

目前常用的β-受體激動(dòng)劑檢測(cè)方法有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（GC/MS）、酶聯(lián)免疫法（ELISA）和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS/MS）。其中HPLC法靈敏度較低，不能滿足痕量檢測(cè)要求[13-15];GC/MS法除了需要大量的前處理步驟，還要求進(jìn)行衍生化操作，較為繁瑣;ELISA法雖然操作簡(jiǎn)單，但極容易出現(xiàn)假陽(yáng)性情況，定性結(jié)果的準(zhǔn)確性較差;只有LC/MS/MS法具有高效的分離能力和準(zhǔn)確的定性定量能力，被廣泛使用，但此法也因?yàn)閺?fù)雜耗時(shí)的前處理而被詬病[16]。因此建立一種科學(xué)、高效、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法十分必要。

材料與方法

儀器與試劑

儀器名稱：NexeraX2超高效液相色譜和8045電噴霧三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（日本島津）、ULPHW-I超純水機(jī)（上海優(yōu)普）、MTN-2800W氮吹濃縮儀（德國(guó)AUTO Science公司）、超聲波清洗機(jī)（昆山潔力美）、H1850R冷凍離心機(jī)（湘儀儀器）、TG16-WS高速離心機(jī)（湘儀儀器）、VM-D渦旋混合器（上海皓莊儀器）、JY2002百分之一電子天平（舜守恒平儀器）、肉類絞碎機(jī)（嘉廚食品機(jī)械）、ATX224萬(wàn)分之一電子天平（日本島津）;儀器經(jīng)校準(zhǔn)檢定合格后方可使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱：實(shí)驗(yàn)所用β-受體激動(dòng)劑類標(biāo)準(zhǔn)品：鹽酸克倫特羅（Clenbuterol）、萊克多巴胺 （ Racto pamine）、沙丁胺醇（Salbutamol）、特布他林（Terbutaline）、西馬特羅（Cimaterol）、氯丙那林（Clorprenaline）、溴布特羅（Brombuterol）、齊帕特羅 （Zilpaterol）、噴布特羅（Penbutolol）、馬布特羅（Mabuterol）、妥布特羅（Tulobuterol）、非諾特羅（Fenoterol）采購(gòu)于曼哈格公司。

同位素內(nèi)標(biāo)克倫特羅-D9 （Clenbuterol-D9）、萊克多巴胺-D3 （Ractopamine-D3）、沙丁胺醇-D3（Salbutero1-D3），購(gòu)于Dr .Ehrenstorfer公司。

實(shí)驗(yàn)試劑與耗材：乙腈（上海安譜公司，色譜純）、甲醇（上海安譜，色譜純）、乙酸（山東西亞，色譜純）、甲酸（山東西亞，色譜純）、無(wú)水硫酸鎂（國(guó)藥集團(tuán)，分析純）、無(wú)水硫酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)，分析純）、乙酸銨（國(guó)藥集團(tuán)，分析純）、乙二胺四乙酸二鈉（國(guó)藥集團(tuán)，分析純）、C18填料（天津博納艾杰爾）， 粒徑40-60μm、PSA填料（天津博納艾杰爾）， 粒徑40-60μm、GCB填料（天津博納艾杰爾），粒徑40-60μm;

方法

實(shí)驗(yàn)色譜和質(zhì)譜條件

色譜條件為：色譜柱： C18色譜柱， 規(guī)格2.1×100mm，粒徑1.9μm;柱溫：32℃;進(jìn)樣體積：2μL;流速：0.3mL/min;流動(dòng)相A是體積濃度為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為0.1%甲酸水溶液[17]，洗脫梯度，洗脫條件見(jiàn)表1;所述初始流動(dòng)相是體積比為9：1的0.1%甲酸水溶液和乙腈的混合液;

質(zhì)譜條件為：霧化氣流速：3.0L/min;干燥氣流速：10.0L/min;加熱氣流速：10.0L/min;DL管溫度250℃[18];加熱氣溫度：350℃;接口電壓：4000V;離子源類型：電噴正離子模式;掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描;氦氣作為碰撞氣，霧化氣和加熱氣均為氮?dú)?，干燥氣為潔凈空氣，各個(gè)物質(zhì)及內(nèi)標(biāo)物的主要質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2：

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別稱取10mg的鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、特布他林、西馬特羅、氯丙那林、溴布特羅、齊帕特羅、噴布特羅、馬布特羅、妥布特羅、非諾特羅12種β-受體激動(dòng)劑，用甲醇溶解并定容至100mL，此貯備液濃度為100mg/L，得到混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用0.1%甲酸水-乙腈（9：1）來(lái)稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度梯度為0.1ng/mL，0.2ng/mL，0.5ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，且每個(gè)濃度梯度中均加入有6ng的同位素內(nèi)標(biāo)物， 同位素內(nèi)標(biāo)物由質(zhì)量比為1：1：1的克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D3和沙丁胺醇-D3組成。