□ 彭冬 烏海市檢驗(yàn)檢測中心

真菌毒素廣泛存在于自然界，常見的真菌毒素包括黃曲霉毒素、脫氧學(xué)府鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、伏馬毒素等，其對人體健康的主要危害包括致癌、致畸等。通常而言，真菌毒素在食品中的含量較低，通常只有ppm或ppb級別（ppm級別相當(dāng)于32公斤糧食中的一顆），且真菌毒素分布不均—分布位置比較集中、單一，高污染區(qū)域和低污染區(qū)域的濃度相差數(shù)千倍。因此，如何取樣是檢測真菌毒素的關(guān)鍵，要做到取樣位置恰當(dāng)、取樣量合適。

1 取樣

一般而言，取樣原則包括數(shù)量保證、隨機(jī)抽取、機(jī)會(huì)均等、沒有傾向性等方面。同時(shí)，較為理想的采樣量一般需要大于1kg，總樣品數(shù)量達(dá)到4kg，縮分樣品量達(dá)到2kg，實(shí)驗(yàn)室樣品量達(dá)到500g。此外，抽取點(diǎn)位要均勻分布，位置合理，隨機(jī)但不能隨意，即科學(xué)布點(diǎn)、選取中央位置，還應(yīng)在易發(fā)生霉變的位置適當(dāng)增加點(diǎn)位。

2 制樣

制樣順序是先磨后分，還是先分后磨？真菌毒素的分布位置較為集中，可能一批糧食中的某一個(gè)點(diǎn)位才會(huì)存在真菌毒素，如果采取先分后磨的原則，很可能會(huì)將受污染的點(diǎn)位劃分出去，從而造成檢測結(jié)果出現(xiàn)“未檢出”的尷尬局面。例如，10顆玉米中1顆含有真菌毒素，那么檢出的可能性只有10%，而未檢出的可能性有90%。所以，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取先研磨后分樣的方法，進(jìn)而保證制樣的均一性，讓樣品更加均一，檢出值更加可靠。

粒度大小為多少才最合適？粒度太大易導(dǎo)致混合不均勻，存在取樣誤差，提取難度大，導(dǎo)致檢測結(jié)果誤差較大；粒度太小又會(huì)增大雜質(zhì)的提取度。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，20目是檢測真菌毒素的最優(yōu)粒度大小，可使樣品混合更為均勻，提取也更充分，檢測誤差最小。

科學(xué)分樣是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的前提條件之一。本實(shí)驗(yàn)采用四分法分樣，即將樣品混勻后平均分成4份，然后將對角2份混勻后再分成4份……一直執(zhí)行此操作直至完全混勻；或采取分樣器進(jìn)行分樣，然后將樣品混合均勻即可。

3 真菌毒素檢測方法的選擇

真菌毒素的檢測有以下3種方法：色譜方法、ELISA及試紙條，其各自的優(yōu)缺點(diǎn)見表1。

當(dāng)前，實(shí)驗(yàn)室常用的檢測方法為液相色譜法，也可根據(jù)各自需求選用適合自身的方法。例如，現(xiàn)場檢測通常只需判斷樣品有無定性測定，可選用試紙條，方便快捷的同時(shí)降低成本；企業(yè)自檢往往批次多、數(shù)量大，時(shí)間緊，但只需一個(gè)大致范圍—在合格區(qū)間內(nèi)即可，故可選用ELISA進(jìn)行多通量同時(shí)檢測，該方法成本較低、檢測快捷且對人員要求不高。如果需要對樣品精確定量并出具具有法律效力的報(bào)告，則要選用儀器法，常用儀器有高效液相色譜儀和高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用儀，其檢測精度高、檢測限較低，相對而言檢測結(jié)果更為精準(zhǔn)。

儀器法檢測的簡單檢測過程為：碾磨分樣、萃取、凈化、上機(jī)分析，其中，風(fēng)險(xiǎn)控制點(diǎn)包括如下幾項(xiàng)。①免疫親和柱必須在5～6℃儲(chǔ)存，不得在室溫下放置，也不得冷凍保存，使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫。②樣品過柱流速十分關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w與毒素反應(yīng)需要時(shí)間，過快過柱會(huì)影響回收率，故自然狀態(tài)過柱是最優(yōu)方法；淋洗可加快過柱速度，洗脫時(shí)需穩(wěn)定流速把真菌毒素全部洗脫下來。③凈化完試樣采用氮吹吹干，用流動(dòng)相復(fù)溶，取樣體積必須精確為1mL，因?yàn)樵擉w積要參與最終的結(jié)果計(jì)算。

4 真菌毒素檢測的質(zhì)量控制

質(zhì)量控制一般分為兩部分，即內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量控制。內(nèi)部質(zhì)量控制的簡單方法就是隨樣品做空白試樣和質(zhì)控樣進(jìn)行質(zhì)量控制，但質(zhì)控樣的價(jià)格相對昂貴，故可采取有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行高、中、低3個(gè)濃度的加標(biāo)回收以進(jìn)行內(nèi)部評估。外部質(zhì)量控制的常用方法就是參加能力驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室間比對，通常選用前者，方便快捷，評估更加準(zhǔn)確。

5 結(jié)語

只有合理的取樣、正確的制樣、選對合適的方法、做好質(zhì)量控制，才能更好地檢測真菌毒素，從而減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高檢測的可靠性。