呂玲玲 謝松 張凱媛 鄭嵐

摘要?目的：為建立厚樸飲片標準湯劑的制備方法，并進行質量標準研究。方法：采用標準化工藝制備標準湯劑，制備15批次不同產(chǎn)地的厚樸飲片標準湯劑，以厚樸酚和和厚樸酚作為定量檢測指標，并進行轉移率、出膏率計算及指紋圖譜研究，并建立其分析方法。結果：15批次厚樸樣品制成的標準湯劑中，厚樸飲片的標準湯劑的出膏率在7.13%～12.60%之間，平均值為10.65%;厚樸酚的轉移率在2.75%～4.44%之間，平均值為3.47%;和厚樸酚的轉移率在6.09%～9.62%之間，平均值為7.25%。采用軟件《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》進行厚樸樣品的特征圖譜進行分析，對15批厚樸飲片及標準湯劑進行相似度評價，其相似度均大于0.9。結論：本研究中的樣品處理方法簡單易行、重復性好，可用于厚樸標準湯劑的制備及質量標準研究。

關鍵詞?厚樸飲片;標準湯劑;質量標準;制備工藝;厚樸酚

Abstract?Objective：To establish the preparation method of standard decoction of Houpo Decoction pieces and to study the quality standard.Methods：Standard decoction was prepared by standardized process，and 15 batches of standard decoction of Houpo Decoction pieces from different regions were prepared.Magnolol and honokiol were used as quantitative detection indicators，and the transfer rate，paste rate calculation and fingerprint spectrum research were carried out，and the analysis method was established.Results：Among the standard decoctions made from 15 batches of Cortex Magnoliae Officinalis samples，the paste rate of the standard decoction of Cortex Magnoliae Officinalis was 7.13%～12.60%，with an average of 10.65%; the transfer rate of magnolol was 2.75%～4.44%，the average was 3.47%; the transfer rate of Cortex Magnoliae Officinalis was between 6.09%～9.62%，and the average was 7.25%.The software “Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System” was used to analyze the characteristic maps of Cortex Magnoliae Officinalis samples，and 15 batches of Houpo Decoction pieces and standard decoctions were evaluated for similarity.The similarities were all greater than 0.9.Conclusion：The sample treatment method in this study is simple，feasible，which can be used for preparation and quality standard study of Cortex Magnoliae Officinalis standard decoction.

Keywords?Houpo Decoction pieces; Standard decoction; Quality standard;Preparation process;Magnolol

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.008

厚樸中藥材為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的枝皮、干燥干皮及根皮，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效，在我國已經(jīng)有兩千多年的藥用歷史。本文重在開展厚樸標準湯劑的研究，以期建立合理的厚樸飲片標準湯劑質量標準。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?超高效液相色譜儀（Waters公司，美國，型號：Waters Acquity）;精密天平（梅特勒-托利多公司，瑞士，型號：PB1501-N）;數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-500DE）;冷凍干燥機（北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司，型號：FD-1A-50）;旋轉蒸發(fā)器（上海予華儀器有限公司，型號：DLSB）;色譜柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）（Agilent公司，美國，型號：Poroshell 120 EC-C18）;實驗室級超純水器（南京易普易達科技發(fā)展有限公司，型號：EPED-E2-10TF）;色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）（美國Agilent公司，型號：Eclipse plus C18）。

1.2?試劑?甲醇（AR，上海泰坦科技有限公司，批號：P1689731），甲醇（色譜級，美國ACS，批號：MA1292G），厚樸酚的對照品（純度98.8%，中國食品藥品檢定研究院，批號：110729-201511），和厚樸酚的對照品（純度99.3%，中國食品藥品檢定研究院，批號：110730-201614）。

1.3?樣品?本研究采用厚樸飲片共15批，分別產(chǎn)自湖北、福建、湖南、重慶、四川5個省份，所購15批厚樸飲片均為厚樸的干燥樹皮。見表1。

2?方法與結果

2.1?厚樸飲片的水分，灰分和酸不溶性灰分測定?按照《中華人民共和國藥典》（2015版）（以下簡稱《藥典》）通則0832第四法來測定15批厚樸飲片中的水分：含水量為8.31%～12.59%，平均含水量為10.05%，結果表明15批厚樸飲片含水量均小于15%，符合規(guī)定[1-2]。見表2。按照《藥典》通則2302來測定15批厚樸飲片中的總灰分：總灰分為4.15%～6.90%，平均總灰分為5.37%，結果表明15批厚樸飲片總灰分均小于7%，符合規(guī)定。見表2。按照《藥典》通則2302來測定15批厚樸飲片中的酸不溶性灰分，得酸不溶性灰分為0.94%～2.15%，平均酸不溶性灰分為1.42%，結果表明15批樣品酸不溶性灰分均小于3%，符合規(guī)定。見表2。

2.2?厚樸飲片中厚樸酚和和厚樸酚的含量測定?根據(jù)《藥典》含量測定的方法，采用Eclipse plus C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μ m）[3]，測定15批厚樸飲片中厚樸酚和和厚樸酚的含量，其中厚樸酚的含量為1.40%～2.43%，平均值為1.85%;和厚樸酚含量為1.50%～3.99%，平均值為2.37%;二者總含量為3.02%～6.01%，平均值為4.23%。結果表明15批樣品厚樸酚和和厚樸酚總含量均大于2%符合規(guī)定。見表3。

2.3?厚樸飲片標準湯劑的制備?取厚樸飲片120 g，加入10倍量的去離子水浸泡30 min后，加熱至微沸并保持30 min，趁熱過濾，再加入8倍量的去離子水，加熱并保持微沸20 min，趁熱過濾。合并2次濾液，50 ℃下減壓濃縮至300 mL左右后，預冷過夜，凍干既得厚樸飲片標準湯劑粉末，并計算各批次厚樸飲片出膏率。平行2次[4]。

2.4?厚樸飲片標準湯劑中厚樸酚和和厚樸酚的含量測定

2.4.1?色譜條件?按照《藥典》含量測定的色譜條件，色譜柱Eclipse plus C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為甲醇∶水=78∶22，柱溫為35 ℃，流速為0.8 mL/min，檢測波長294 nm，進樣量4 μL[5]。在此條件下，厚樸酚和和厚樸酚分離良好。見圖1。

2.4.2?供試品制備方法建立?由于厚樸酚和和厚樸酚極性較弱，冷卻過程會有所析出，影響測定結果的準確性，本文采用《藥典》含量測定所用溶劑——純甲醇對標準湯劑粉末進行復溶，以保證厚樸酚和和厚樸酚能夠完全溶解，保證結果的準確性。精密稱定厚樸飲片標準湯劑的粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸潰24 h，濾過，搖勻，即得。

2.4.3?對照品制備?分別適量取厚樸酚和和厚樸酚的對照品，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含厚樸酚500 μg、和厚樸酚500 μg的溶液。

2.4.4?線性關系考察?取“2.4.3”中對照品溶液，用純甲醇分別稀釋成每1 mL含對照品500、250、250、100、50、25、10、1 μg的溶液，按照“2.4.1”項下方法進樣，測定厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，繪制標準曲線，其中橫坐標為濃度，縱坐標為峰面積。厚樸酚Y=9.423 6X+3.809 9（R2=0.999 0），線性范圍為1～500 μg/mL;和厚樸酚Y=9.670 9X+18.684 9（R2=0.999 3），線性范圍為1～500 μg/mL[6]。

2.4.5?精密度實驗?取同一批厚樸飲片標準湯劑粉末（HP-01），供試品溶液制備方法按“2.4.2”，色譜條件方法按“2.4.1”，連續(xù)進樣6次。計算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，得到RSD分別為1.00%和1.12%，說明精密度良好[6-8]。

2.4.6?重復性實驗?采取步驟“2.4.5”方法，計算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，得到RSD分別為1.97%和1.23%，說明該方法的重復性良好。

2.4.7?穩(wěn)定性實驗?采取步驟“2.4.5”方法，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，計算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積RSD分別為2.20%和1.52%，說明供試品溶液24 h內穩(wěn)定[9-11]。

2.4.8?回收試驗?取已知含量的厚樸飲片標準湯劑的粉末（HP-01）0.1 g，按1∶1添加混合對照品（厚樸酚0.48 mg，和厚樸酚0.79 mg）制備供試品溶液，平行六次，色譜條件方法測定，得到供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的加樣回收率平均分別為101.25%和98.16%，RSD分別為0.26%和0.43%，說明該方法的準確度較好。

2.4.9?樣品測定及轉移率計算?取各批次厚樸飲片標準湯劑粉末，步驟方法同“2.4.5”，測定15個批次，每批次平行2份，外標一點法得到厚樸酚和和厚樸酚含量。厚樸飲片的標準湯劑的出膏率在7.13%～12.60%之間，平均值為10.65%;厚樸酚的轉移率在2.75%～4.44%之間，平均值為3.47%;和厚樸酚的轉移率在6.09%～9.62%之間，平均值為7.25%。見表4。

2.5?指紋圖譜的建立

2.5.1?色譜條件建立?對不同流動相、流速、柱溫和波長進行了考察，最終確定色譜條件如下：

Poroshell 120 EC-C18（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）色譜柱，流速0.5 mL/min，檢測波長265 nm，柱溫40 ℃，進樣量：4 μL;流動相為0.1%磷酸（A）-甲醇（B），梯度洗脫程序，B：0～20 min，14%～35%;20～25 min，35%～85%;25～32 min，85%。對照品和供試品譜圖如圖2[12-13]。

2.5.2?供試品制備方法建立?對標準湯劑粉末的提取溶劑（純水、20%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、純甲醇）進行了考察，綜合考慮峰的數(shù)目及峰形，最終確定為50%甲醇。

精密稱定厚樸飲片標準湯劑的粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸潰24 h，濾過，搖勻，即得。

2.5.3?精密度實驗?取厚樸飲片標準湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，色譜條件方法按“2.5.1”，連續(xù)進樣6次。以厚樸酚峰（8號峰）為參比，結果顯示各峰相對保留時間RSD<0.10%，相對峰面積RSD<1.78%，說明該指紋圖譜方法的精密度良好。

2.5.4?重復性實驗?取厚樸飲片標準湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，平行六次，按“2.5.1”下色譜條件方法進樣。以厚樸酚峰（8號峰）為參照峰，結果顯示各峰相對保留時間RSD<0.70%，相對峰面積RSD<2.56%，說明該指紋圖譜方法的重復性良好。

2.5.5?穩(wěn)定性實驗?取厚樸飲片標準湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，按“2.5.1”下色譜條件方法，分別在0，、2、4、8、12、24 h進樣。以厚樸酚峰為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD，結果表明各峰相對保留時間RSD<1.30%，相對峰面積RSD<3.01%，說明該方法性質穩(wěn)定。

2.5.6?樣品測定及分析?取各批次厚樸飲片標準湯劑粉末，步驟方法同上，記錄色譜圖，導入2012版《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》軟件，設置時間窗口為0.1 min，以中位數(shù)的方式生成對照指紋圖譜。見圖3。相似度結果見表5。結果表明，15批厚樸飲片來源于不同產(chǎn)地，其相似度有所差異，但相似度均大于0.9，說明各批次的厚樸飲片相似度良好。

3?討論

中藥飲片標準湯劑，可謂對傳統(tǒng)煎煮的中藥湯劑的傳承和創(chuàng)新，其標準參照體系主要從3個參數(shù)進行表征：出膏率、有效（或指標）成分的含量測定及轉移率、指紋或特征圖譜等分析[14]。本試驗以15批次厚樸飲片的標準湯劑為研究對象，通過測定其指標成分厚樸酚和和厚樸酚的含量、轉移率、及標準湯劑的出膏率，確定各參數(shù)的變化范圍，方法學考察均符合要求，表明本方法穩(wěn)定可行、重復性良好，為中藥配方顆粒質量控制提供了基礎數(shù)據(jù)，更好的完成中藥質量標準控制。

本試驗建立了厚樸飲片標準湯劑的含量測定方法及特征圖譜分析方法，能夠較全面地反映厚樸飲片的內在質量，可為厚樸配方顆粒的質控和評價提供參考[15]。

中藥飲片質量標準研究的研究系統(tǒng)深入，逐步推廣應用于臨床，可為中藥飲片制備標準規(guī)范化研究奠定基礎，并有效的提高中醫(yī)藥治療的臨床療效，具有重要意義。

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（2019-11-26收稿?責任編輯：王明）