孔瓊瓊 錢(qián)立勇 (舟山醫(yī)院病理科，浙江 舟山 312000)

胃癌發(fā)病率和死亡率呈不斷上升趨勢(shì)〔1〕。目前，手術(shù)切除是治療胃癌主要手段，且取得很大進(jìn)步。但由于大部分發(fā)病初期無(wú)明顯癥狀，就診時(shí)通常已進(jìn)入中晚期，從而錯(cuò)失了最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)，且很多患者在手術(shù)切除后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，影響預(yù)后，嚴(yán)重威脅患者生命健康〔2～4〕。胃癌發(fā)生發(fā)展是多個(gè)基因調(diào)節(jié)的多因素和多步驟的復(fù)雜過(guò)程，近年研究發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配修復(fù)蛋白(MLH)1、程序性死亡受體配體(PD-L)1、熱休克因子(HSF)1、沉默信息調(diào)節(jié)因子(SIRT)1在癌組織中異常表達(dá)，但在胃癌中研究甚少，缺乏可靠的參考價(jià)值〔5,6〕。本研究探討MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1在胃癌中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇舟山醫(yī)院于2014年1月至2018年12月143例胃癌患者癌組織標(biāo)本及癌旁正常組織作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)及組織病理學(xué)證實(shí)為胃癌；②病理分期Ⅰ～Ⅲ期；③行胃癌根治性手術(shù)切除腫瘤；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②術(shù)前采用放療、化療者；③無(wú)完整規(guī)范的術(shù)后病理報(bào)告及隨訪資料。納入的143例患者中，男85例，女58例；年齡41～79〔平均(62.74±7.18)〕歲；TNM分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期67例，Ⅲ期41例；分化程度：高分化32例，中分化76例，低分化35例；腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移34例。

1.2免疫組化法測(cè)定MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá) 取胃癌組織和癌旁組織標(biāo)本石蠟包埋切片，以免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá)。采用MLH1單克隆抗體、PD-L1單克隆抗體、HSF1單克隆抗體和SIRT1單克隆抗體工作濃度分別為1∶100、1∶100、1∶500和1∶500，由同一病理科人員嚴(yán)格依據(jù)北京中杉金橋生物公司免疫組織化學(xué)SP法試劑盒檢測(cè)，以已知抗體陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，并且以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定 每張切片選取連續(xù)5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，對(duì)其中所有陽(yáng)性染色分別計(jì)數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率。①按照陽(yáng)性細(xì)胞率進(jìn)行評(píng)分，0%～5%計(jì)為0分，6%～25%計(jì)為1分，26%～50%計(jì)為2分，>50%計(jì)為3分；②按照細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分，細(xì)胞未著色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，棕黃色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3分。將上述2種評(píng)分相乘，判定陽(yáng)性表達(dá)，其中0～1分為陰性，2～5分為弱陽(yáng)性，6～8分為陽(yáng)性，9分為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 癌組織MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較〔n=143,n(%)〕

2.2不同病理特征MLH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度MLH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者M(jìn)LH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3不同病理特征PD-L1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 不同性別、年齡和TNM分期PD-L1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；分化程度低和腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者PD-L1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于分化程度較高無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.4不同病理特征HSF1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度HSF1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者HSF1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.5不同病理特征SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度征SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病理特征MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較〔n(%),n=81〕

3 討 論

胃癌具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，認(rèn)為可能是多因素、多基因參與共同發(fā)病〔7，8〕。MLH1是錯(cuò)配修復(fù)酶，是遺傳易感基因，具有降低自發(fā)性突變、維持基因組穩(wěn)定、增強(qiáng)DNA復(fù)制的忠實(shí)性及修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配的功能〔9〕。臨床研究顯示，惡性腫瘤組織中MLH1異常表達(dá)〔10，11〕。本研究結(jié)果表明胃癌組織中MLH1表達(dá)升高，且與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)，故認(rèn)為MLH1可作為推測(cè)胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛能的敏感指標(biāo)之一。PD-L1是B7家族成員，并且是程序性死亡分子1的配體，其在T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中廣泛表達(dá)，在上述細(xì)胞中表達(dá)受干擾素-γ刺激后；提呈抗原細(xì)胞表面的PD-L1分子及T細(xì)胞表面的成形死亡分子-1結(jié)合發(fā)揮作用，在免疫耐受的維持和誘導(dǎo)方面具有重要作用〔12，13〕。在多種惡性腫瘤細(xì)胞中PD-L1異常表達(dá)，并且和惡性腫瘤細(xì)胞的預(yù)后及惡性程度有關(guān)，和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞密切相關(guān)；PD-L1和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞表達(dá)的程序性死亡分子1結(jié)合，抑制腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的功能，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸〔14，15〕。此外研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)存在PD-L1分子表達(dá)〔16〕。目前，臨床上關(guān)于PD-L1在胃癌中表達(dá)甚少，缺乏可靠的參考價(jià)值。本研究表明，胃癌組織中PD-L1表達(dá)升高，且與分化程度和腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)，故而認(rèn)為PD-L1可作為推測(cè)胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和分化程度潛能的敏感指標(biāo)之一。HSF1是真核細(xì)胞熱休克應(yīng)激反應(yīng)的一種主要轉(zhuǎn)錄因子，且可編程腫瘤間質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)惡性腫瘤形成。HSF1在應(yīng)激條件下可改變蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化及惡性增殖，從而促使腫瘤細(xì)胞的生存和增殖；HSF1作為一種轉(zhuǎn)錄因子，可使腫瘤間質(zhì)發(fā)生功能和結(jié)構(gòu)上的重塑。研究報(bào)道顯示，在食管鱗癌、前列腺癌、乳腺癌和肝癌等多種癌組織中HSF1表達(dá)上調(diào)〔17〕。本研究表明，胃癌組織中HSF1表達(dá)升高，且與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)，故而認(rèn)為HSF1可作為推測(cè)胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛能的敏感指標(biāo)之一。最新研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1可依賴尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，使多種蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基發(fā)生去乙?；?8〕。SIRT1屬SIRTUIN家族，可調(diào)節(jié)基因表達(dá)，參與調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞內(nèi)多種生物學(xué)事件，特別是細(xì)胞生存、凋亡及分化等代謝中具有重要作用。近期相關(guān)研究報(bào)道顯示，SIRT1在急性髓細(xì)胞性白血病、前列腺癌及肝癌中的表達(dá)顯著升高〔19，20〕。本研究表明，胃癌組織中SIRT1表達(dá)升高，且與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)，故而認(rèn)為SIRT1可作為推測(cè)胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛能的敏感指標(biāo)之一。