王晶晶

摘 ?要：回腸炎會影響保育豬和育肥豬的生產(chǎn)性能，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成較大的經(jīng)濟損失。本文介紹了保育豬和育肥豬回腸炎的診斷以及控制與預防，并利用實時定量PCR檢測了其病原體胞內(nèi)勞森菌在歐洲各國豬群中的流行情況。

關(guān)鍵詞：保育豬;育肥豬;回腸炎;胞內(nèi)勞森菌

腸道疾病會影響保育豬和育肥豬的福利，增加抗生素的使用量，并給世界各地的集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)系統(tǒng)造成重大的經(jīng)濟損失。據(jù)估測，在最常見的豬傳染病中，回腸炎（或豬增生性腸炎）可給每頭感染豬造成0.50～1.00歐元的經(jīng)濟損失。

患病豬無特異性臨床癥狀，常見腹瀉、生長速度放慢和飼料利用率下降，一旦發(fā)生亞臨床回腸炎甚至不會出現(xiàn)臨床癥狀。發(fā)現(xiàn)疾病以及快速且準確的診斷是確診亞臨床或臨床回腸炎的前提，以便采取有效的治療和預防措施，從而最大程度地減少損失。

1 ?診斷

除了非特異性臨床癥狀外，患病豬還可能會出現(xiàn)宏觀和/或微觀的典型組織學病變。若發(fā)生急性回腸炎，患病豬的回腸黏膜和腸壁可見卡他性炎癥或出血（圖1）。

慢性腸炎的癥狀特征是患病豬腸道絨毛和隱窩上皮細胞被未成熟的增生性上皮細胞替代，導致回腸和空腸壁明顯增厚（圖2）。

胞內(nèi)勞森菌是一種需要復雜營養(yǎng)才能培養(yǎng)的細菌——只能在細胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)和存活，豬感染后會引發(fā)回腸炎。因此，檢測時通常不進行胞內(nèi)勞森菌分離，而是直接對組織樣本進行非特異性染色，或用聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）檢測感染組織、食糜和糞便樣本。與其他診斷方法相比，PCR通過擴增特定核苷酸序列能夠產(chǎn)生更特異和更靈敏的結(jié)果。實時定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）檢測發(fā)現(xiàn)，患病豬回腸組織病變的嚴重程度與同一頭豬糞便中胞內(nèi)勞森菌基因組當量濃度之間存在正相關(guān)性（圖3）。

此外，研究表明，利用未免疫豬或免疫豬的平均日增重測得的臨床影響情況與用PCR檢測到的糞便中胞內(nèi)勞森菌的濃度相關(guān)，這使其成為診斷豬回腸炎的首選方法。在豬群水平上，通過酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）檢測血清中的特異性抗體有助于確定感染時間，但該方法不適用于該病的確診。

2 ?控制與預防

如果發(fā)生急性回腸炎，豬場需要給患病豬服用抗生素（如大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類）進行治療。但是，考慮到要謹慎使用抗生素和細菌會對抗生素產(chǎn)生耐藥性的威脅，控制和預防豬回腸炎的長期策略應基于豬場特有的免疫接種計劃、生物安全和降低風險因素措施。

3 ?田間試驗

目前尚不清楚胞內(nèi)勞森菌在歐洲豬場中的流行率及其影響，尚無數(shù)據(jù)說明由胞內(nèi)勞森菌感染引起的腸道疾病發(fā)病率，這表明有必要對歐盟各成員國進行調(diào)查研究以確定該病原體在豬場中的流行情況。

相關(guān)研究人員正在檢測丹麥、法國、德國、西班牙、荷蘭和英國的豬群以確定胞內(nèi)勞森菌的流行情況 （圖4）。

選擇這些國家是因為它們的生豬存欄量占歐洲生豬總存欄量的三分之二以上（67%）（丹麥、法國、德國、西班牙、荷蘭和英國的生豬存欄量分別為1 280萬頭、1 310萬頭、2 760萬頭、3 000萬頭、1 230萬頭和470萬頭，合計存欄1.005億頭，歐洲的生豬總存欄量為1.5億頭）。

在研究結(jié)束時，對來自6個歐洲國家的144個豬群（出生到育成豬群或僅有一個來源的育肥豬群）進行檢測，以確定是否存在胞內(nèi)勞森菌感染。從每個被檢豬群中選擇15頭保育豬（體重 ? 10 kg～25 kg）、15頭生長豬（體重25 kg～40 kg）和15頭育肥豬（體重40 kg～100 kg）采集糞便樣本。

利用診斷性測試法qPCR計算得出的樣本量足以在約300頭相同日齡的豬中以95%的置信度檢測出胞內(nèi)勞森菌，估計患病率為20%。

考慮到豬腸道疾病的發(fā)病史，從每個參試國家選擇24個豬群用于試驗。鑒于季節(jié)對豬回腸炎發(fā)病率的影響，從2017年10月開始采集糞便樣本，前后橫跨一年的時間。試驗豬隨機選擇，采樣時豬是否腹瀉并不影響其能否被選為試驗動物。從豬的直腸壺腹部人工采集糞便樣本，每頭豬采樣時均使用新的一次性手套，以避免交叉污染。

用qPCR檢測所有糞便樣本中的胞內(nèi)勞森菌特異基因組片段的濃度。

由于數(shù)據(jù)收集一直持續(xù)到2018年10月，本文將討論從丹麥的12個豬群、德國的11個豬群、西班牙的11個豬群、荷蘭的11個豬群、法國的8個豬群和英國的5個豬群上獲得的首批可用數(shù)據(jù)。本文所用的數(shù)據(jù)為自2017年10月2日至2018年3月30日所收集樣本的檢測結(jié)果。

來自參試豬群的糞便樣本100%進行了胞內(nèi)勞森菌的檢測。各豬群和各國家的糞便樣本的陽性率存在顯著的差異。在來自丹麥豬群的糞便樣本中，經(jīng)檢測約48%的樣本呈胞內(nèi)勞森菌基因組片段陽性;在采集自西班牙的豬群和法國的豬群的糞便樣本中，陽性率較低，分別為20%和18%?？傮w而言，所有被檢糞便樣本的陽性率為34%（表1）。英國和荷蘭各豬群的糞便樣本陽性率差異特別大（圖5）。

研究發(fā)現(xiàn)，在同一個國家的不同豬群之間以及不同國家的豬群之間，不同年齡段的豬群在糞便樣本陽性率上存在很大的差異（圖6）。平均而言，在30%的保育豬、42%的生長豬和33%的育肥豬的糞便中檢測到了胞內(nèi)勞森菌的基因組片段。

在各年齡段豬群糞便樣本陽性率上，丹麥的保育豬糞便陽性率最高（83%），英國、德國和西班牙的生長豬糞便陽性率最高（分別為60%、57%和33%），荷蘭和法國育肥豬的陽性率最高（分別為54%和29%）。

在獲得更多數(shù)據(jù)后，這些中間結(jié)果將會得到完善。

4 ?結(jié)論

由于在所有采樣的豬群中都檢測到了胞內(nèi)勞森菌的基因組片段，因此可以認為胞內(nèi)勞森菌是一種普遍存在的病原體，至少在發(fā)生腹瀉的豬群中是這樣。

因此，要確診胞內(nèi)勞森菌感染，檢測血清中的抗體至關(guān)重要，不過只有在數(shù)據(jù)收集完成后才能對該病原體的流行情況做出最終的結(jié)論。

胞內(nèi)勞森菌的感染需要利用qPCR檢測腹瀉豬糞便中的胞內(nèi)勞森菌或死后剖解的病理學病變才能確診。

最初的結(jié)果表明，不同國家、不同豬群和不同年齡段的豬在胞內(nèi)勞森菌的流行率上存在差異?？赡艿脑蚝陀绊懸蛩赜涗浽谡{(diào)查表中，一旦完成數(shù)據(jù)收集，便將進行分析和發(fā)布。

原題名：Ileitis in nursery and fattening pigs – an underestimated disease （英文）

原作者：Mirjam Arnold和Heiko Nathues