蔣珍藕 梁冰 黃島平

【摘 要】

目的：對壯藥牛大力的外源性有害物質進行檢測分析。方法：采用現(xiàn)行版《中國藥典》方法對不同產地不同批次的牛大力中重金屬、有害元素、有機氯農藥進行檢測。結果：所檢測10批牛大力樣品的重金屬及有害元素含量均較低，有機氯農藥未檢出。結論：牛大力中重金屬等外源性有害物質均符合有關規(guī)定，但在今后生產中也應加強控制。

【關鍵詞】 牛大力;重金屬;有害元素：農藥殘留

【中圖分類號】R29?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2020）20-0039-05

Detection and Analysis of Exogenous Hazardous Substances on Guangxi Zhuang Medicine Millettia Speciosa Root

JIANG Zhenou1，2 LIANG Bing1* HUANG Daoping3

1.Guangxi Institute of Chinese Medicine and Pharmaceutical Science， Nanning 530022， China;

2.Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicaine Quality Stardands， Nanning 530022， China;

3.Guangxi Center for Analysis and Test Research， Nanning 530022， China

Abstract：Objective To detect and analyze the exogenous hazardous substances of zhuang medicine Millettia speciosa root.Methods By the methods of current edition of Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China， the detection of heavy metal and hazardous elements and organochlorine pesticide of different producing areas and different batches of Millettia speciosa root were carried out.Results In 10 batches of samples， the contents of heavy metal and hazardous elements were less content， and the organochlorine pesticide were not founded.Conclusion The exogenous hazardous substances of zhuang medicine Millettia speciosa root were in accordance with the rules， but they should be controlled strengthenly in the future production.

Keywords：Millettia speciosa Root; Heavy Metal; Hazardous Elements; Pesticide Residues

外源性有害物質是指中藥材在生長過程中從自然環(huán)境中吸附或蓄積導致的污染，或是種植、采收加工、儲運等環(huán)節(jié)不規(guī)范操作引入的污染，或是不法商販受利益驅使對中藥材（尤其是貴重藥、緊俏貨和飲片）采用造假、摻偽、增重、染色、漂白、熏硫磺等手段引入的污染。主要包括重金屬與有害元素、農藥殘留、真菌毒素殘留、二氧化硫殘留等[1]。

重金屬與有害元素（鉛、鎘、砷、汞、銅）進入體內后可與蛋白質、核酸等形成配合物或金屬螯合物，使酶活性減弱或者喪失，影響細胞生長，進而致畸或致癌[2-3]。有機氯類農藥為高殘留性農藥，性質穩(wěn)定，毒性強，代謝緩慢，體內蓄積明顯，造成慢性中毒[4-6]。黃曲霉毒素會降低機體免疫力、導致不孕、發(fā)生急性中毒等，其急性毒性甚至是氰化鉀的10 倍[7];二氧化硫對人體各臟器均有毒性，甚至致癌[8]?？梢?，中藥外源性有害物質嚴重影響中藥材質量和臨床用藥安全。

現(xiàn)行藥典[9]和行業(yè)標準[10]已初步建立了中藥外源性有害物質的控制標準體系，但與國外標準相比，檢測和檢查項目較少，限度要求較寬，限量標準制訂進程緩慢，大部分品種仍未要求和控制，總體理念保守和滯后，造成中藥外源性有害物質的控制仍處于落后水平[11]，嚴重阻礙中藥走向世界，成為制約中藥國際化的技術壁壘和瓶頸。

鑒于外源性有害物質嚴重影響中藥質量安全、成為制約中藥國際化的瓶頸，必須采取積極的措施嚴格控制。牛大力為廣西壯藥材[12-13]，既是兩廣地區(qū)廣泛應用的著名藥食兩用原料，也是壯腰健腎丸[14]等近二十種中成藥的主要原料;其原質量標準不完善，只有簡單的性狀描述，本課題組為了提高牛大力藥材的質量標準，之前已對牛大力藥材的顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物、含量測定等內容進行了較系統(tǒng)的研究[15]，但對嚴重影響臨床療效和用藥安全的外源性有害物質尚未進行考察，為此，本實驗對牛大力樣品中重金屬及有害元素、農藥殘留進行檢測分析，為提高完善牛大力質量標準提供實驗依據，并可用于指導牛大力無公害化種植生產。

1 儀器和材料

iCAP-Q型電感耦合等離子體質譜儀（美國賽默飛公司），Multiwave3000型微波消解儀（奧地利安東帕公司），DS-360型石墨消解儀（廣州格丹納公司）;SCION 456-GC/TQ型氣相色譜串聯(lián)質譜儀（德國布魯克公司）。

As、Cd、Cu、Pb、Hg單元素標準液均購于中國計量科學研究院，濃度為 1000 μg/mL;Li、Co、Y、Ce、Tl調諧液濃度為1 μg/L;內標為Ge、In、Bi、Li6、Sc、Tb、Y混合標準液的濃度為 10 μg/mL;有機氯對照品（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT ）含量均為100 μg/mL，中國藥品生物制品檢定所提供。

牛大力樣品的采集和購買信息見表1，均經廣西中醫(yī)藥研究院賴茂祥研究員鑒定為豆科崖豆藤屬植物美麗崖豆藤Millettia speciosa Champ.）的干燥根。

2 實驗方法和結果

2.1 重金屬總量 按照《中國藥典》2015年版四部通則0821重金屬檢查法測定。

2.1.1 標準鉛溶液的制備 準確稱取在105 ℃干燥至恒重的硝酸鉛0.1599 g，置1000 mL量瓶中，加硝酸5 mL與水50 mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每l mL相當于10 μg的Pb） 。

2.1.2 供試品溶液的制備 取供試品1.0 g，按熾灼殘渣檢查法進行熾灼處理，然后取遺留的殘渣，加硝酸0.5 mL蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，加鹽酸2.0 mL，置水浴上蒸干后加水25 mL，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0 mL，微熱溶解后，移置比色管中，加水稀釋成25 mL，即得。

2.1.3 樣品測定 取25 mL納氏比色管三支，甲管中加標準鉛溶液2 mL與醋酸鹽緩沖液（pH 3.5）2 mL后，加水稀釋成25 mL，乙管中加入供試品溶液25 mL，丙管中加入與乙管相同重量的供試品，加配制供試品溶液的溶劑適量使溶解，再加與甲管相同量的標準鉛溶液與醋酸鹽緩沖液（pH 3.5）2 mL后，用溶劑稀釋成25 mL;在甲、乙、丙三管中分別加硫代乙酰胺試液各2 mL，搖勻，放置2 min，同置白紙上，自上向下透視。10批牛大力樣品同法測定，丙管顯出的顏色不淺于甲管，10批牛大力供試液顯示的顏色均不比甲管深。表明10批牛大力樣品中重金屬總量均小于20 mg/kg。

2.2 有害元素 按照《中國藥典》2015年版四部通則2321 鉛、鎘、砷、汞、銅測定法中的電感耦合等離子體質譜法測定。

2.2.1 儀器條件 射頻功率1550 W，采樣深度8 mm，冷卻溫度2 ℃，載氣流量：1.03 L/min， 碰撞氣為He氣，積分時間：0.3 s，測定，數(shù)據采集重復次數(shù)3次。

2.2.2 微波消解條件 見表2。

2.2.3 溶液制備

2.2.3.1 調諧液的制備 直接吸取進樣調諧。

2.2.3.2 內標溶液的制備 精密量取Ge、In、Bi、Li6、Sc、Tb、Y混合標準液適量，用2%硝酸稀釋成200 ng/mL的混合溶液，既得。

2.2.3.3 標準曲線溶液的制備 精密量取上述標準溶液，用5%硝酸溶液稀釋制成每l mL含鉛2 ng、4 ng、10 ng、20 ng、40 ng、100 ng，每l mL含鎘0.1 ng、0.2 ng、0.5 ng、1 ng、2 ng、5 ng，每l mL含砷1 ng、2 ng、5 ng、10 ng、20 ng、50 ng，每1 mL含汞0.1 ng、0.2 ng、0.5 ng、1 ng、2 ng、5 ng，每l mL含銅10 ng、20 ng、50 ng、100 ng、200 ng、500 ng的系列標準曲線溶液。

2.2.3.4 供試品溶液的制備 取供試品粗粉于60℃干燥2h，取約0.5g，精密稱定，置耐壓耐高溫微波消解罐中，加硝酸10 mL。按上述消解條件進行消解。消解完全后，消解液冷卻至60 ℃以下，取出消解罐，放冷，將消解液轉入50 mL量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得，同法制備試劑空白溶液。

2.2.4 線性回歸方程 銅、砷以鍺作為內標，鎘以銦作為內標，鉛、汞以鉍作為內標，取標準系列混合溶液，進樣測定，以各元素與內標計數(shù)值的比值為縱坐標，各元素質量濃度（ng/mL） 為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程見表3。表明各元素線性關系良好。

2.2.5 檢出限 重復測定空白溶液11次，各元素信號響應的3倍標準偏差對應的元素的濃度值即為檢出限，見表3。

2.2.6 方法精密度 取牛大力藥材（編號1），用本法平行測定6次，結果各元素含量的RSD在2.3%～6.5%范圍內。

2.2.7 回收率試驗 取牛大力藥材（編號1）約0.5 g，6份，分別加入鉛500 ng、鎘40 ng、砷40 ng、汞5 ng、銅2000 ng，照2.2.3.4項下制得加樣回收溶液，進樣測定，計算回收率，結果見表4。

2.2.8 樣品測定 10批牛大力樣品依法測定，計算含量。結果見表5。

2.3 有機氯農藥 按照《中國藥典》2015年版四部通則2341 農藥殘留量測定法測定。

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 DB-1701 色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）。程序升溫：初始100℃，每分鐘10 ℃升至220 ℃，每分鐘8 ℃升至250 ℃，保持10 min。進樣口溫度為230 ℃。檢測器溫度為300 ℃。進樣量1 μL。載氣為高純He氣。不分流進樣。在上述色譜條件下，理論板數(shù)以α-BHC峰計算應不低于1×106，兩個相鄰色譜峰的分離度大于1.5。

2.3.2 混合對照品儲備液的制備 精密量取有機氯農藥對照品溶液（100 μg/mL）各1 mL于250 mL容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 混合對照品溶液的制備 精密量取上述混合對照品儲備液1 mL置10 mL容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 取牛大力樣品細粉約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理 30min，放冷，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置使分層，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于 40℃ 水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90 ℃）溶解并轉移至10 mL具塞刻度的離心管中，加石油醚（60～90 ℃）稀釋至5 mL，小心加入濃硫酸1 mL，振搖1分鐘，離心（3000轉/min）10 min，精密量取上清液2 mL，40 ℃下將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1 mL，即得。

2.3.5 線性關系和檢出限考察 分別精密量取混合對照品儲備液 0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL置10 mL容量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）分別制成系列濃度的混合對照品溶液;分別進樣 1.0 μL，以進樣量（ng）為橫坐標，以相應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，并根據信噪比3∶1的比例，計算各有機氯農藥的檢出限。結果見表6。

2.3.6 精密度實驗 取混合對照品溶液連續(xù)測定6次，結果9個有機氯農藥成分峰面積的RSD在1.9%～3.2%范圍內，說明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性實驗 取混合對照品溶液，在0 h、2 h、6 h、8 h、10 h、12 h時進樣測定，結果9個有機氯農藥成分峰面積的RSD在1.7%～3.4%范圍內，表明穩(wěn)定性良好。

2.3.8 重復性實驗 取同一批牛大力樣品6份，按擬訂的方法分別制備成供試品溶液，進樣測定，結果均未檢出9個有機氯農藥成分。

2.3.9 加樣回收實驗 取重復性試驗項下的牛大力樣品6份，每份約2 g，精密稱定，分別精密加入混合對照品貯備液2 mL，按擬訂的方法測定。結果9個有機氯農藥成分回收率在95.7%～106.4%范圍內，RSD在2.1%～3.6%之間（n=6）。

2.3.10 樣品測定 按擬訂的方法測定10批牛大力樣品中有機氯農藥殘留量，結果各批樣品均未檢出9個有機氯農藥成分。

3 分析和討論

10批牛大力樣品中重金屬總量均不超過20.0 mg/kg，符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》[10]中重金屬總量不超過20.0 mg/kg的限量規(guī)定。

10批牛大力樣品中鉛、鎘、砷、汞、銅測定結果見表5，均符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》[10]中鉛含量不超過5.0 mg/kg、鎘含量不超過0.3 mg/kg、砷含量不超過2.0 mg/kg、汞含量不超過0.2 mg/kg、銅含量不超過20.0 mg/kg的限量規(guī)定。

本實驗農藥的檢出限：六六六0.01 mg/kg、滴滴涕0.02 mg/kg、五氯硝基苯0.003 mg/kg，10批牛大力樣品均未檢出，說明含量低或幾乎不含，符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》[10]中農藥六六六殘留量不超過0.1 mg/kg、滴滴涕殘留量不超過0.1 mg/kg、五氯硝基苯殘留量不超過0.1 mg/kg的限量規(guī)定。

上述所檢測的牛大力樣品中重金屬、有害元素、有機氯農藥含量均較低并符合相關規(guī)定，但要制定嚴謹?shù)臉藴蔬€要不斷監(jiān)測和積累數(shù)據。中藥的外源性有害物質除了種植過程中農藥使用外，更多是從污染的土壤、灌溉水源及環(huán)境空氣中吸收，重金屬和農藥在土壤中的殘留時間長達數(shù)年甚至數(shù)十年。隨著人工栽培藥材的不斷增長、種植和加工技術不斷發(fā)展變化以及環(huán)境污染加重，中藥材外源性有害物質的種類將會增多或變化、程度加重，因此，對中藥材外源性有害物質的監(jiān)測和限定標準的制定應與時俱進。

嚴格控制外源性有害物質勢在必行。即將出版的《中國藥典》2020 年版擬對植物類藥材全面進行檢查重金屬及有害元素（鉛、鎘、砷、汞、銅）限度以及33種農藥殘留。國家中醫(yī)藥管理局近日發(fā)布“《中共中央國務院關于促進中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展的意見》重點任務分工方案”中強調：嚴格農藥、化肥、植物生長調節(jié)劑等使用管理，分區(qū)域、分品種完善中藥材農藥殘留、重金屬限量標準。因此，①首先應完善過程控制、推動源頭監(jiān)管，嚴格控制和杜絕外源性有害物質的污染途徑;②應強化技術儲備、提高檢測水平，提高檢測方法的靈敏度、專屬性、通用性、實用性及普及性;③應加強相關基礎研究，充分考慮中藥的使用特點、給藥途徑、實際監(jiān)測水平等因素，科學合理地制定中藥外源性污染物的限量標準。提升中藥質量控制技術和安全性保障技術水平，逐步完善中藥安全控制標準體系，保障中藥質量和臨床用藥安全，突破中藥國際化的瓶頸，使中藥真正走向世界。

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（收稿日期：2020-06-01 編輯：劉斌）

基金項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會中醫(yī)藥科技專項（GZBZ16-10）。

作者簡介：蔣珍藕（1964-），女，漢族，碩士，主任藥師，研究方向為中草藥開發(fā)研究及質量評價。E-mail：zhenoujiang@163.com

通信作者：梁冰（1981-），女，漢族，本科，副主任藥師，研究方向為中草藥質量標準研究。E-mail：462712902@qq.com