陳愛保,向 歡,趙紅萍

深圳恒生醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518102

人類亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因位于染色體的1p36.3，全長(zhǎng)1 980 bp,其第4外顯子上的第677個(gè)核苷酸堿基可發(fā)生胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的突變，可由677CC(正常野生型)突變?yōu)?77CT(雜合突變型)或677TT(純合突變型)。突變后的MTHFR活性下降，可致葉酸代謝障礙引起低葉酸，繼發(fā)同型半胱氨酸代謝障礙引起高同型半胱氨酸血癥，高同型半胱氨酸是引發(fā)高血壓等心腦血管疾病、新生兒出生缺陷的高風(fēng)險(xiǎn)因素[1]。只有早發(fā)現(xiàn)基因是否有突變，及時(shí)補(bǔ)充葉酸，防止高同型半胱氨酸血癥的產(chǎn)生，才是控制相關(guān)疾病發(fā)生的良策。鑒于此，本研究通過(guò)收集相關(guān)資料進(jìn)一步分析認(rèn)證MTHFR基因多態(tài)性與葉酸、同型半胱氨酸的代謝關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1-12月在本院同時(shí)做外周血細(xì)胞MTHFR 基因檢測(cè)、血清葉酸、血清同型半胱氨酸檢測(cè)的500例受試者臨床資料，其中男性270例、女性230例，年齡19～70歲，平均(35.5±5.0)歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本準(zhǔn)備 空腹采紫頭管抗凝血2 mL及橙管非抗凝血4 mL，采血前1周未服用葉酸。

1.2.2血細(xì)胞MTHFR基因檢測(cè)及判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用西安金磁納米生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PCR-金磁微粒層析法試劑盒，雅培LA480核酸擴(kuò)增儀。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行DNA提取、擴(kuò)增、產(chǎn)物分析。其原理是通過(guò)對(duì)等位基因MTHFR C677T基因突變位點(diǎn)的引物設(shè)計(jì)及標(biāo)記，利用等位基因特異性PCR方法擴(kuò)增獲得特定的擴(kuò)增片段，標(biāo)記有地高辛分子的PCR產(chǎn)物在與所構(gòu)筑的基因分型檢測(cè)體系中納米金磁微粒表面抗地高辛單抗相互作用，通過(guò)側(cè)向流層析技術(shù)實(shí)現(xiàn)其基因多態(tài)性檢測(cè)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)反應(yīng)板中M試劑T線處條帶顯示陰性而WT試劑T線處條帶顯示陽(yáng)性則其基因型為正常CC型；(2)反應(yīng)板中M試劑T線處條帶顯示陽(yáng)性，WT試劑T線處條帶陽(yáng)性則其基因型為雜合突變CT型；(3)反應(yīng)板中M試劑T線處條帶顯示陽(yáng)性而WT試劑顯示陰性則其基因型為TT純合突變型，詳細(xì)操作方法及結(jié)果判斷按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.3血清葉酸檢測(cè) 采用i200SR雅培化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)葉酸水平，正常參考范圍為7.0～45.4 nmol/L。

1.2.4血清同型半胱氨酸檢測(cè) 采用LST008AS日立全自動(dòng)生化儀檢測(cè)同型半胱氨酸水平，正常參考范圍為0～15 μmol/L。

2 結(jié) 果

2.1500例受試者中不同性別、年齡段各基因型構(gòu)成比比較 不同性別、年齡段受試者各基因型構(gòu)成比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同性別、年齡段受試者各基因型構(gòu)成比比較[n(%)]

2.2各基因型受試者血清葉酸和同型半胱氨酸檢測(cè)結(jié)果比較 220例CC型受試者血清葉酸水平為(27.5±5.0)nmol/L，有2例受試者低于正常參考范圍。145例CT型受試者血清葉酸水平為(9.5±1.4)nmol/L，有7例受試者低于正常參考范圍。135例TT型受試者血清葉酸水平為(6.5±0.5)nmol/L，有35例受試者低于正常參考范圍。220例CC型受試者血清同型半胱氨酸水平為(6.0±0.8)μmol/L，均在正常參考范圍。145例CT型受試者血清同型半胱氨酸水平為(11.5±1.0)μmol/L，有2例受試者高于正常參考范圍；135例TT型檢測(cè)者血清同型半胱氨酸水平為(13.5±1.5)μmol/L，有9例受試者高于正常參考范圍。TT型和CT型受試者血清葉酸水平低于正常參考范圍的人數(shù)及血清同型半胱氨酸水平高于正常參考范圍的人數(shù)明顯多于CC型受試者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

MTHFR是葉酸代謝的關(guān)鍵酶，其功能是將5,10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為5-甲基四氫葉酸，5-甲基四氫葉酸是同型半胱氨酸再次甲基化為蛋氨酸的甲基供體[3]。MTHFR對(duì)熱不耐受，易突變?yōu)镃T型和TT型[3]，突變后的CT型和TT型酶活力分別只有CC型的65%和30%[4]，特別是TT型人群，因葉酸代謝障礙致葉酸缺乏，可引起同型半胱氨酸再次甲基化受阻，體內(nèi)同型半胱氨酸不同程度堆積，可導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷、刺激血管平滑肌增生、破壞機(jī)體凝血和纖溶系統(tǒng)，使機(jī)體處于血栓狀態(tài)，是H型高血壓、冠心病的高風(fēng)險(xiǎn)因素，也可導(dǎo)致腦卒中發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高11～28倍[5]；葉酸代謝障礙是孕婦出現(xiàn)早產(chǎn)、出生低體質(zhì)量?jī)?、神?jīng)管畸形、唇腭裂的高風(fēng)險(xiǎn)因素[6]；也是突發(fā)性耳聾發(fā)生的高危險(xiǎn)因素[8]。葉酸是水溶性B族維生素，是合成核酸所需的輔酶，葉酸缺乏可導(dǎo)致細(xì)胞DNA合成減少，細(xì)胞成熟障礙，可致貧血[7]；有報(bào)道稱TT型男性精子的前運(yùn)動(dòng)率要明顯低于CC型[8]。

同型半胱氨酸是人體必需氨基酸——蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，其升高可能因不良的飲食結(jié)構(gòu)和習(xí)慣引起，也可因基因MTHFR活性下降引起，減少富含蛋氨酸食物的攝入，多食新鮮的蔬菜水果能有效降低同型半胱氨酸水平。人體自身不能合成葉酸，需從食物補(bǔ)充，天然的葉酸又極不穩(wěn)定，易受陽(yáng)光、加熱的影響而發(fā)生氧化，遺傳基因正常人群可從日常飲食中得到葉酸的滿足。而MTHFR基因突變后的CT型和TT人群不要等到已經(jīng)發(fā)生了H型高血壓或遺傳性耳聾等因葉酸、同型半胱氨酸代謝障礙引發(fā)的疾病，再來(lái)進(jìn)行基因、葉酸、同型半胱氨酸檢測(cè)，則為時(shí)已晚[10]。早檢測(cè)、早干預(yù)是預(yù)防相關(guān)疾病發(fā)生的良策[11]。