唐宇飛 劉星 侯風(fēng)剛

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是全球第三大常見癌癥，在癌癥相關(guān)死亡原因中排第二[1]。轉(zhuǎn)移是CRC 患者發(fā)生癌癥相關(guān)死亡的主要原因，據(jù)估計(jì)，有超過50%的患者會(huì)因轉(zhuǎn)移而死亡[2]。然而，CRC 轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的分子機(jī)制尚未清楚，因此，對(duì)CRC 轉(zhuǎn)移的分子學(xué)機(jī)制探究尤為迫切?；钚匝酰╮eactive oxygen species，ROS）與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，近年來逐漸成為腫瘤防治研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，過高的ROS 會(huì)引起細(xì)胞增殖抑制、細(xì)胞周期阻滯，甚至細(xì)胞凋亡，而低水平的ROS 能促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管新生[3-4]。正常情況下，當(dāng)ROS 水平持續(xù)升高，超過一定的閥值，則會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性反應(yīng)，進(jìn)而誘導(dǎo)凋亡途徑的激活或抑制抗癌治療的耐藥性[5]。腫瘤有高水平的抗氧化系統(tǒng)，其主要功能是防止積聚過多的ROS 和維持還原-氧化平衡。腫瘤細(xì)胞通過抗氧化能力清除過量的ROS，同時(shí)維持促腫瘤生成的ROS 水平。因此，通過過量表達(dá)ROS，能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，而對(duì)正常細(xì)胞并沒有影響，在治療過程中還能夠減少不良反應(yīng)的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)有些藥物能通過作用ROS 直接促進(jìn)癌細(xì)胞死亡[6]，或者通過ROS 抑制CRC 細(xì)胞遷移和血管生成[7]。因此，ROS 在腫瘤防治的臨床應(yīng)用中有重大前景。本文就ROS 參與調(diào)控CRC 轉(zhuǎn)移的信號(hào)通路以及轉(zhuǎn)錄因子作一綜述。

1 ROS 參與調(diào)控CRC 轉(zhuǎn)移的信號(hào)通路

1.1 NF-κB 通路 NF-κB 是一種普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)/核信號(hào)傳導(dǎo)途徑，并調(diào)節(jié)涉及炎癥和免疫反應(yīng)的各種細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體和黏附分子的基因表達(dá)[8]。此外，NF-κB 的活化與腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖、分化、遷移和血管生成的控制以及腫瘤細(xì)胞對(duì)化學(xué)、放射療法的耐藥性之間存在相關(guān)性[9]。NF-κB的重要作用已在包括CRC 在內(nèi)的多種癌癥中得到認(rèn)可[10]。

研究表明，線粒體轉(zhuǎn)錄因子B2 在肝癌中呈現(xiàn)異常的過表達(dá)，這種高表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞和線粒體內(nèi)ROS水平上升，從而激活了NF-κB 通路，進(jìn)而促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[11]。ROS 調(diào)節(jié)劑1（Romo1）能夠通過增強(qiáng)ROS 的表達(dá)，從而激活NF-κB，進(jìn)而釋放腫瘤侵襲潛能，并且這一過程能夠被NFκB 阻滯劑阻斷[12]。這說明了氧化應(yīng)激對(duì)腫瘤的促進(jìn)與NF-κB 信號(hào)通路有關(guān)。有研究表明IL-17A 可通過ROS/NF-κB/基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2/MMP-9 信號(hào)通路的激活，促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲和遷移[11]。然而，當(dāng)ROS 累積超過特定閾值時(shí)，ROS 會(huì)抑制NF-κB 激活[13]。Qiu 等[14]在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，高絲苷可以通過降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS 的水平來激活NF-κB 信號(hào)通路，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡。其通過觀察MCF-7 細(xì)胞和4T1 細(xì)胞中NF-κB 通路的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)高絲苷抑制了p65 和人核因子κB 抑制蛋白α（IKBα）的磷酸化，而過氧化氫的作用則相反。同時(shí)，ROS 的減少也可能通過激活半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）引起線粒體功能障礙并導(dǎo)致乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡。NF-κB 活性能夠被NADPH 氧化酶（NOX）（一種在ROS 產(chǎn)生中的重要酶）衍生的ROS 調(diào)節(jié)[15]，然而有研究表明，ROS 與NF-κB 存在另一種聯(lián)系，在CRC 中，ROS 的生成反而依賴于CRC 細(xì)胞中的NF-κB[16]。進(jìn)一步探索這一可能的雙向調(diào)節(jié)作用，或許能夠成為通過ROS 治療腫瘤的新靶點(diǎn)。5-氨基水楊酸（5-ASA）和二甲雙胍的組合顯示出能夠誘導(dǎo)CRC 細(xì)胞凋亡，并且同樣能夠抑制CRC 的轉(zhuǎn)移，這些藥物抗CRC 的機(jī)制之一是誘導(dǎo)ROS 的積累，從而進(jìn)一步促進(jìn)凋亡機(jī)制的激活[17]。研究表明二甲雙胍通過抑制NOX 和HCT116 CRC 細(xì)胞中的NF-κB 活性來抑制石膽酸（LCA）誘導(dǎo)的IL-8上調(diào)，并減少了腫瘤微環(huán)境中內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和管狀結(jié)構(gòu)的形成[18]。

1.2 磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）通路PI3K 是一類胞內(nèi)脂質(zhì)激酶，它通過磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2） 轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）來磷酸化磷酸肌醇肽[19]。PIP3 是通過磷酸化激活A(yù)kt 的重要第二信使。PI3K 被受體和非受體絡(luò)氨酸激酶活化后，形成PIP3。PIP3 與胞內(nèi)的磷酸肌醇蛋白激酶1（PDK-1）和信號(hào)蛋白分子Akt 結(jié)合，進(jìn)而活化Akt。Akt 作為PI3K 主要的下游效應(yīng)分子，能直接磷酸化NF-κB 等轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而調(diào)控腫瘤的轉(zhuǎn)移[20]。Qiao 等[21]研究發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞中c-ros 肉瘤致癌因子-受體酪氨酸激酶（ROS1）低表達(dá)會(huì)抑制細(xì)胞遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition,EMT）。Hu 等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌細(xì)胞中，缺氧能夠誘導(dǎo)ROS 的產(chǎn)生，進(jìn)而激活PI3K/Akt/缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）信號(hào)通路調(diào)控下游Mxi1-0 的表達(dá)，Mxi1-0 進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表達(dá)從而調(diào)控血管新生。Yang 等[23]研究發(fā)現(xiàn)低劑量的辣椒素能激發(fā)氧化應(yīng)激使ROS 表達(dá)升高，進(jìn)而激活A(yù)kt/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）信號(hào)通路以及MMP-2、MMP-9 的高表達(dá)，MMPs 的增多誘導(dǎo)EMT，進(jìn)而促進(jìn)CRC 細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。說明PI3K/Akt 信號(hào)通路在氧化應(yīng)激情況下可能會(huì)被激活，進(jìn)而調(diào)控下游轉(zhuǎn)錄因子和效應(yīng)分子促使腫瘤的轉(zhuǎn)移。而在CRC 中，Yao 等[24]研究表明地卡黃酮能夠誘導(dǎo)ROS 介導(dǎo)的凋亡并抑制CRC 中PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路，這一研究結(jié)果能夠支持黃酮類抗癌劑（DLF）作為抗CRC 的潛在藥物。

2 參與ROS 調(diào)控CRC 轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)錄因子

2.1 HIF-1α HIF-1α 被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生、發(fā)展中最重要的基因之一。研究表明HIF-1α 水平升高與腫瘤轉(zhuǎn)移、血管生成、患者預(yù)后差及腫瘤耐藥性有很強(qiáng)的關(guān)系[25]。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)到一定程度，超過其血液供應(yīng)能力，就會(huì)形成缺氧微環(huán)境。缺氧條件下HIF-1α 能調(diào)控VEGF、MMPs 等效應(yīng)分子，促進(jìn)腫瘤血管新生，使得腫瘤能快速適應(yīng)缺氧微環(huán)境[26-27]。有研究表明，在胰腺癌中，缺氧微環(huán)境會(huì)導(dǎo)致EGFR/MEK/ERK 通路的激活，從而導(dǎo)致HIF-1α 的表達(dá)升高，而HIF-1α 通過抑制ROS 的表達(dá)，進(jìn)一步激活EGFR，最終導(dǎo)致胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力的升高[28]。Shimojo 等[29]研究發(fā)現(xiàn)，缺氧能促進(jìn)HIF-1α、NF-κB 表達(dá)增多，并且抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）能通過抑制ROS 的表達(dá)來消除HIF-1α 和NF-κB 的激活，進(jìn)而抑制胰腺癌細(xì)胞缺氧區(qū)域EMT 和轉(zhuǎn)移。而有研究表明，在大腸癌中，SLC34A2-ROS-HIF-1 能通過誘導(dǎo)同源物增強(qiáng)子2（EZH2）過表達(dá)從而促進(jìn)CRC 細(xì)胞增殖和凋亡的化學(xué)耐藥性，因此SLC34A2-ROS-HIF-1-EZH2 通路有望成為新的CRC 治療方法[30]。HIF-1α 能夠抑制ROS 的生成和NOX2 的表達(dá)，而齊墩果酸（OA）能夠通過抑制HIF-1α 來抑制該途徑，從而抑制大腸癌細(xì)胞的增殖能力，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡[31]。該研究表明NOX2-ROS-HIF-1α 軸有望作為治療大腸癌的新型治療靶標(biāo)。

2.2 STAT3 STAT3 是一種包漿蛋白，作為JAKSTATs 途徑中重要的JAK 激酶的底物，其既具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能又具有轉(zhuǎn)錄活化功能。最初發(fā)現(xiàn)STAT3 在炎癥反應(yīng)IL-6 的釋放反應(yīng)中發(fā)揮誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄的作用，后期研究發(fā)現(xiàn)，其可以被許多細(xì)胞或生長(zhǎng)因子激活，誘導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。目前研究發(fā)現(xiàn)，其調(diào)控的靶基因有：B 淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-x1、Mcl-1、細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、Myc、VEGF、HIF-1α 等。白三烯受體2（BLT2）是白三烯B4（LTB4）的低親和力受體，在卵巢癌細(xì)胞株OVCAR3 和SKOV-3 細(xì)胞株中高表達(dá)，其激活NOX4 進(jìn)而誘導(dǎo)ROS 的產(chǎn)生，ROS 激活STAT3-MMP-2 通路，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[32]。在惡性膠質(zhì)瘤內(nèi)，缺氧能促進(jìn)ROS 的產(chǎn)生和激活STAT3 轉(zhuǎn)錄因子，而采用ROS抑制劑和抗氧化劑NAC 處理后，能夠抑制STAT3 轉(zhuǎn)錄因子激活，進(jìn)而阻斷其介導(dǎo)的血管新生途徑[33]。Cho等[34]在前列腺癌研究中發(fā)現(xiàn)，表皮生長(zhǎng)因子（EGF）通過促進(jìn)ROS 產(chǎn)生，進(jìn)而促使STAT3 磷酸化，調(diào)控HIF-1α/TWIST1/N-鈣黏蛋白（N-cadherin）信號(hào)通路促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。因此，STAT3 可能是ROS 調(diào)控腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵靶點(diǎn)。Meng 等[35]研究表明在CRC 中，隨著ROS 的積累，喹茜素通過調(diào)節(jié)STAT3 信號(hào)通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。蛋白脯氨酰-4-羥化酶（P4HB） 的下調(diào)也可能通過ROS 的產(chǎn)生和STAT3 信號(hào)通路的失活誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HT29 細(xì)胞的凋亡[36]。而在人結(jié)腸癌HCT116 細(xì)胞中，鼠草酸通過產(chǎn)生ROS，從而抑制STAT3 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[37]。

3 小結(jié)

綜上所述，ROS 的異常增高與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，然而CRC 細(xì)胞內(nèi)ROS 水平的增高與腫瘤轉(zhuǎn)移方面的研究尚少。目前研究存在的難點(diǎn)：（1）異常增多的ROS，因其水平的高低對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控作用也不一樣。研究表明，較低水平的ROS 能夠促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，而高水平的ROS 則會(huì)引起細(xì)胞凋亡[38-39]，但具體的閾值仍未明確；（2）刺激ROS 產(chǎn)生的因素有待進(jìn)一步探索。前期研究發(fā)現(xiàn)，食物中辣椒素、藥物以及缺氧微環(huán)境都會(huì)引起ROS 的增高[23]，可能還存在其他因素，值得進(jìn)一步驗(yàn)證。

因此，ROS 對(duì)結(jié)直腸癌的調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究，以期在臨床用藥時(shí)，能提前檢測(cè)瘤內(nèi)的ROS水平，根據(jù)閾值合理調(diào)整ROS 水平，進(jìn)而提高臨床療效。