高粉梅 于博 潘新波 王信 趙麗娟 吳晶 賈忠

【摘 要】 目的：建立疏乳消結(jié)顆粒的最佳制備工藝。方法：基于Box-Behnken實(shí)驗(yàn)，以提取時間（A）、加水倍數(shù)（B）及提取次數(shù)（C）為因素，以芍藥苷、迷迭香酸含量及浸膏得率的綜合評分為指標(biāo)，優(yōu)選疏乳消結(jié)顆粒的最佳提取工藝;采用正交實(shí)驗(yàn)考察輔料的最佳配比，以可溶性淀粉（A）、乳糖（B）及糊精（C）與浸膏的配比為考察因素，以一次成型率、休止角、堆密度的綜合評分為指標(biāo)，優(yōu)選輔料的最佳配比。結(jié)果：最佳水提取參數(shù)為加8倍量的水，提取3次，每次70min;最佳輔料配比為浸膏∶可溶性淀粉∶乳糖∶糊精=1∶0.75∶0.25∶0.75。結(jié)論：該顆粒劑成型工藝簡便可行，所選輔料合理。為疏乳消結(jié)顆粒的制備工藝提供了可靠的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 疏乳消結(jié)顆粒;Box-Behnken實(shí)驗(yàn);正交實(shí)驗(yàn);提取工藝

【中圖分類號】R248.2?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）21-0049-06

Forming Technology of Shu Ru Xiao Jie Granule

GAO Fenmei1 YU Bo2 PAN Xinbo2 WANG Xin2 ZHAO Lijuan2 WUJin3 JIA Zhong1，2*

1.Gansu Agriculturai Univeristy，Lanzhou 734000，China;2.Lanzhou Second People，s Hospitial，Lanzhou 730046，China;

3.Lanzhou Chinese Medicine Hospital，Lanzhou 730050，China

Abstract：Objective To establish the best preparation technology of Shu Ru Xiao Jie granules.Methods Based on the Box-Behnken experiment， the factors of extraction time （a） ， water-adding multiple （b） and extraction times （C） ， taking the content of Paeoniflorin， rosmarinic acid and the extraction rate of the extract as the indexes， the optimum extraction process of Shuruxiaojie granules was optimized， and the optimum proportion of excipients was determined by Orthogonal test， taking the ratio of Soluble Starch （a） ， lactose （b） and Siojing （c） to the extract as the factors， the best ratio of the excipients was optimized by the one-step molding rate， the angle of repose and the Comprehensive Score of pile density Results the optimum extraction parameters were as follows： 8 Times Water， 3 times， 70 min each time， the optimum proportion of excipients was as follows： Extract∶Soluble Starch∶ LACTOSE∶refined=1∶0.75∶0.25∶0.75.Conclusion The molding process of the granule is simple and feasible， and the excipients are reasonable. It provides a reliable basis for the preparation of shu-ru-xiao-jie granules. 1

Key words：Shu Ru Xiao Jie Granule; Box-Behnken Experiment; Orthogonal Experiment; Extraction Process

乳腺增生屬于中醫(yī)學(xué)“乳癖”范疇，是中年婦女的一種常見的非炎癥性疾病，以乳房腫塊和乳房脹痛為主要臨床表現(xiàn)，其發(fā)病率占乳腺疾病的首位，有癌變之潛能[1]。隨著生活水平的提高，工作節(jié)奏的加快，自然環(huán)境和社會環(huán)境的變化，競爭意識的增強(qiáng)以及飲食結(jié)構(gòu)的改變，其發(fā)病率有逐年升高的趨勢 [2]。因此提高本病的藥物治療療效，對預(yù)防乳腺癌的發(fā)生有重要意義。

疏乳消結(jié)顆粒是蘭州市第二人民醫(yī)院的經(jīng)驗(yàn)方，是以乳核內(nèi)消方為基礎(chǔ)的加減方，由柴胡、茜草、夏枯草、赤芍、青皮、甘草、絲瓜絡(luò)、郁金、香附、橘核、當(dāng)歸、山慈菇12味藥材配伍而成，具有疏肝活血、疏肝散結(jié)的功效[3]。臨床應(yīng)用于治療乳腺小葉增生病，癥見乳房腫脹，有腫塊，月經(jīng)前癥狀明顯，經(jīng)至又見好轉(zhuǎn)。臨床應(yīng)用中除了治療乳腺小葉增生病外，對治療痛經(jīng)及黃褐斑有明顯的功效[4]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-10AVP高效液相色說譜儀（包括SPD-10AVP二極管陣列檢測器，LC-10AT二元泵，C-R10A色譜工作站）;FA2004N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）;HX-12型電熱真空干燥箱（重慶市大足醫(yī)用設(shè)備廠）;CQX25-12超聲波提取器（上海必能信超有限公司）;PDA紫外檢測器（日本島津公司）;HH-8恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市環(huán)宇可約儀器廠）。

1.2 材料 芍藥苷（批號：110736-201136）、迷迭香酸（批號：R0200-50MG）均購自中國食品藥品檢定研究所;實(shí)驗(yàn)藥材均購自蘭州安泰堂中藥飲片有限公司，由蘭州大學(xué)馬志剛教授鑒定;甲醇、乙腈為色譜純;β-環(huán)糊精、可溶性淀粉、乳糖、糊精、蔗糖、微晶纖維素均購自甘肅恒鏈業(yè)生物有限公司。水為蒸餾水，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 疏乳消結(jié)顆粒的制備 本研究通過分析組方中各藥材有效成分的理化性質(zhì)，采用Box-Behnken實(shí)驗(yàn)進(jìn)行水煎煮提取。12味藥材進(jìn)行水煎煮提取。將所得干膏浸粉加入相應(yīng)輔料，輔料比為浸膏∶可溶性淀粉∶乳糖∶糊精=1∶0.75∶0.25∶0.75。干膏浸粉，輔料，混合均勻加入60%乙醇制成手捏成團(tuán)，壓之即化的軟材，于105 ℃下烘干1 h，過篩，收集能過1號篩不能過5號篩的顆粒[5]。

2.2 制備工藝研究

2.2.1 制劑工藝指標(biāo) 疏乳消結(jié)顆粒在前期研究中發(fā)現(xiàn)，芍藥苷、迷迭香酸的含量在整個研究過程中較穩(wěn)定，因此在本實(shí)驗(yàn)中將疏乳消結(jié)顆粒的浸膏得率，芍藥苷含量以及迷迭香酸含量的綜合指標(biāo)作為提取工藝的指標(biāo)[6]。將每個指標(biāo)均標(biāo)準(zhǔn)化為 0～1之間的歸一值，采用 Hassan 法對指標(biāo)分別進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，計(jì)算歸一值（di）=（Yi-Ymin） /（Ymax-Ymin） 。式中，Yi 為實(shí)測值， Ymin和 Ymax為每一指標(biāo)在不同次試驗(yàn)中測得的所有值中的最小值和最大值。對各指標(biāo)的 di 按“OD = （ d1 × d2 … × dn） 1 /n”求得幾何平均數(shù)[7]，即得總評歸一值（OD） 。

2.2.2 色譜條件 色譜柱：Diamonsil 5 μm C18（2）250×4.6 mm;流動相：以乙腈為流動相 A，以 0.1%磷酸溶液為流動相 B;梯度洗脫：0～10 min，A-B（10∶90），10～30 min，A-B（90∶10），30～45 min，A-B（10∶90）;流速1.0 mL/min;柱溫室溫[8];進(jìn)樣量20 μL;檢測波長：253 nm;理論塔板數(shù)按對照品芍藥苷、迷迭香酸計(jì)算分別不低于3000。

2.2.3 溶液的配制 精密稱定疏乳消結(jié)顆粒1 g，置250 mL容量瓶中，加入50%乙醇溶液約100 mL，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）30min，放冷，再稱定重量，用30%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液再經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，即得[9]。

精密稱取五氧化二磷真空干燥12 h的芍藥苷，迷迭香酸對照品，加甲醇制成濃度分別為210、208 μg/mL的混合溶液。精密吸取上述制備的溶液各20 μL，按照色譜條件注入色譜儀。結(jié)果如圖1所示。

2.2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.3條件下的混合對照品溶液2、4、6、10、20 μL，按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程：芍藥苷Y=3468.7X+3609.1（R=0.9996）;迷迭香酸Y=995.11X+1379（R=0.9991）。結(jié)果表明，芍藥苷，迷迭香酸含量分別在10.5～210、10.4～208 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取“2.2.3”條件下的混合對照品溶液各20 μL連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果芍藥苷，迷迭香酸含量RSD分別為0.89%，1.57%。結(jié)果表明機(jī)器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取同一批號（20200703）疏乳消結(jié)顆粒6份，按“2.1”方法制備，在“2.2.2”條件下進(jìn)樣測定。結(jié)果顯示，6份疏乳消結(jié)顆粒中芍藥苷，迷迭香酸RSD 分別為0.87%，1.63%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，符合分析測試要求。

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，室溫下分別于0、2、4、8、15、24 h進(jìn)行測定，結(jié)果芍藥苷，迷迭香酸含量RSD分別為2.13%，0.87%。

2.2.8 加樣回收率 實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批樣品（批號：20200703）0.2 g，加入芍藥苷（0.058 mg/mL）1 mL，迷迭香酸（0.22 mg/mL）1mL，制成供試品溶液，精密吸取6份供試品溶液，注入高效液相色譜儀。芍藥苷平均加樣回收率為99.54%，RSD=0.47%，迷迭香酸平均加樣回收率為99.81%，RSD=1.14% （n=6）。

2.2.9 Box-Behnken優(yōu)化設(shè)計(jì) 采用Design-Expert8.0.6軟件中的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，選取提取時間（A），加水量（B），提取次數(shù)（C） 作為影響因素[10]，以芍藥苷、迷迭香酸含量及浸膏得率的綜合指標(biāo)為觀察指標(biāo)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。因素水平及結(jié)果見表1、表2。

2.2.10 模型擬合與方差分析 采用Design Expert8.0.6軟件處理數(shù)據(jù)，以浸膏得率為評價指標(biāo)進(jìn)行二項(xiàng)式擬合，得到回歸方程R=18.04+0.46A-0.16B+4.72C-0.13AB+020AC-1.21BC-0.81A2+0.49B2-0.61C2（R=0.9737）。結(jié)果表明，多元二次方程相關(guān)系數(shù)較高，擬合效果較好。采用ANOVA分析回歸參數(shù)，由表3可知，二項(xiàng)回歸方程失擬項(xiàng)沒有顯著差異，擬合項(xiàng)差異極顯著，說明該回歸方程可以對任何條件下的提取工藝進(jìn)行預(yù)測。三維響應(yīng)曲面圖如圖2所示。

利用Design Expert8.6.1軟件擬合結(jié)果顯示最優(yōu)工藝為加8倍量水，煎煮3次，每次60.52min，考慮到實(shí)際情況，將提取工藝條件定為加8倍量水，煎煮3次，每次70min。

2.2.11 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)選出的最佳制備工藝參數(shù)生產(chǎn) 3 批疏乳消結(jié)顆粒顆粒（批號：202004，202005，202006），進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，與預(yù)測值的偏差為 0.0031%，偏差較小，表明所選工藝穩(wěn)定性好，可信度高。結(jié)果見表4。

2.3 輔料選擇

2.3.1 輔料種類的篩選 以顆粒制劑常用的輔料可溶性淀粉，乳糖，糊精，蔗糖，微晶纖維素為考察對象。分別于已制得的浸膏按1∶1的比例混勻，干法制粒，并測定吸濕率，優(yōu)選出防潮效果好、經(jīng)濟(jì)且實(shí)惠的輔料[11]。5種輔料吸濕結(jié)果見表5。

從上表中可以看出，五種輔料的吸濕率：可溶性粉淀粉>乳糖>糊精>蔗糖>微晶纖維素?？紤]到經(jīng)濟(jì)與口感等問題，研究中選用乳糖，可溶性淀粉，糊精3種輔料聯(lián)合配用作為本實(shí)驗(yàn)中顆粒劑的輔料。

2.3.2 輔料配比的選擇 按照上述實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)選出防潮效果較優(yōu)的輔料，考慮3種輔料連用以降低制劑成本與輔料用量。實(shí)驗(yàn)以吸濕率，成型率，休止角為考察對象，篩選適宜的輔料用量比。

綜合得分計(jì)算方法如下：①一次成型率分值=實(shí)驗(yàn)一次成型率/最大一次成型率;吸濕率=（吸濕后浸膏粉質(zhì)量-吸濕前浸膏粉質(zhì)量）/吸濕前浸膏粉質(zhì)量×100%;休止角分值=1/（實(shí)驗(yàn)休止角/最大休止角）。②綜合得分=一次成型率分值×40+吸濕分值×30+休止角分值×30[12]。

2.3.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表8方差分析結(jié)果可以看出，糊精，乳糖，可溶性淀粉與浸膏的比值均沒有顯著影響，得到最佳工藝條件為糊精∶浸膏=0.75∶1，乳糖：浸膏=0.25∶1，可溶性淀粉∶浸膏=0.75∶1。

2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 按優(yōu)選的最佳條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，糊精∶浸膏=0.75∶1，乳糖∶浸膏=0.25∶1，可溶性淀粉∶浸膏=0.75∶1。結(jié)果見表9。表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

疏乳消結(jié)顆粒遵循“肝欲散，急食辛以散之”之要，以疏肝理氣為主，活血散結(jié)為輔，使肝郁得疏，血瘀得化，結(jié)癖得散;補(bǔ)肝體，助肝用，體用同治[13];理氣養(yǎng)血活血，氣血兼顧;疏通乳絡(luò)，軟堅(jiān)散結(jié)。前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)疏乳消結(jié)顆粒適合用水提取。因此選取提取時間，加水倍數(shù)，提取次數(shù)3個影響因素，基于Box-Behnken試驗(yàn)，以綜合測評法優(yōu)選出疏乳消結(jié)顆粒的最佳提取工藝。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳提取工藝為加8倍量水，提取3次，每次70min。在前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，加水倍數(shù)并不能影響提取率、芍藥苷及迷迭香酸的含量，而隨著提取時間與次數(shù)的增加，浸膏得率、芍藥苷及迷迭香酸的含量也隨著增加。在后面的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)了這一點(diǎn)。因此，選擇加8倍量水，提取3次，每次提取時間為70min的最佳提取工藝。

疏乳消結(jié)顆粒浸膏粉吸濕性較強(qiáng)，直接制粒有很大的困難。選擇臨床常用的幾種輔料，選出適合疏乳消結(jié)顆粒的輔料。經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)可溶性淀粉，乳糖，糊精3種輔料與疏乳消結(jié)顆粒浸膏粉合用能夠大大提高疏乳消結(jié)顆粒的抗潮效果?？紤]到經(jīng)濟(jì)等各種因素，選擇這3種輔料連用。采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選輔料的最佳配比，以成型率、休止角及堆密度的綜合評分為考察指標(biāo)，優(yōu)選出最佳配比為浸膏∶可溶性淀粉∶乳糖∶糊精=1∶0.75∶0.25∶0.75。

研究采用多指標(biāo)綜合測評法為保證疏乳消結(jié)顆粒提取與輔料添加的客觀準(zhǔn)確性。浸膏得率、芍藥苷及迷迭香酸含量考察了疏乳消結(jié)顆粒的提取工藝。以成型率、休止角及堆密度為指標(biāo)考察了輔料配比的最優(yōu)工藝，全面考察了輔料種類及用量對顆粒成型的影響。本研究中疏乳消結(jié)顆粒的成型工藝研究較為全面，可以為疏乳消結(jié)顆粒的制備工藝提供參考。

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（收稿日期：2021-03-15 編輯：陶希睿）