史秀玲

（河南省飼草飼料站，河南 鄭州 450008）

據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前已有400多種獸藥用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病以及提高飼料的利用效率，但濫用、非法使用獸藥，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物源性食品中及環(huán)境中的獸藥殘留量超標(biāo)，進(jìn)一步導(dǎo)致消費(fèi)者面臨致敏、致癌、致畸、致突變等風(fēng)險(xiǎn)，從而威脅公共衛(wèi)生安全。因此，建立能夠快速、準(zhǔn)確地檢測多種獸藥殘留的處理方法，對(duì)保障公共衛(wèi)生安全有著重要意義。樣品前處理作為獸藥殘留檢測必不可少且至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，其隨著各項(xiàng)相關(guān)技術(shù)的不斷進(jìn)步也逐漸向更高效、經(jīng)濟(jì)、簡便的方向發(fā)展。

1 固相萃取技術(shù)

1.1 固相萃取法（Solidphaseextraction，SPE）

固相萃取法是20世紀(jì)70年代后期興起的一種樣品前處理技術(shù)，它是利用分析物在不同介質(zhì)中被吸附能力大小的差別將目標(biāo)物提純，使其得到理想的分離。有回收效率高、富集倍數(shù)大、操作過程便捷等優(yōu)點(diǎn)，成為目前殘留分析方法中使用頻率最高的樣品前處理方式。其一般操作過程是選擇填充不同類型固體吸附劑的針筒狀柱子并對(duì)吸附劑進(jìn)行活化，再使提取得到的樣品溶液通過柱子，目標(biāo)物和部分雜質(zhì)保留在吸附劑上，用適當(dāng)溶液淋洗去除雜質(zhì)后加入適當(dāng)?shù)娜芤簩⒛繕?biāo)物洗脫下來，完成目標(biāo)物的分離和富集。

Azzouz等利用SPE建立了一種靈敏度高、選擇性好、回收率高的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，用于同時(shí)測定雞蛋和蜂蜜中的22種獸藥的殘留。樣品的前處理包括用離心和連續(xù)固相萃取進(jìn)行凈化和預(yù)濃縮。該方法的檢測限為0.4～3.3ng/kg，在15～2000ng/kg的添加水平之間，蜂蜜和雞蛋樣品中的分析物回收率在87%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～7.0%，有著較高的回收率和精密度。

1.2 分散固相萃取法（Dispersivesolidphaseextraction，DSPE）

分散固相萃取法是自1989年發(fā)展起來的一種快速樣品處理技術(shù)。為了從樣品基質(zhì)中提取分析物使分析結(jié)果更加精確，如何盡量完全地去除基質(zhì)中的雜質(zhì)一直是亟須解決的問題。DSPE是利用固體吸附劑如無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺（PSA）等混合在樣品提取液中，以去除樣品中的極性雜質(zhì)，如有機(jī)酸、極性染料和糖類等。DSPE在萃取過程中可實(shí)現(xiàn)不同化合物分離和凈化的過程。相比于傳統(tǒng)的SPE，基于DSPE的技術(shù)減少了沉淀、淋洗、洗脫等操作步驟，使前處理過程簡單快速、成本低廉。

QuEChERs法是DSPE的發(fā)展，是快速（quick），簡單（easy），經(jīng)濟(jì)（cheap），高效（effective），可靠（rugged），安全（safe）的簡寫法，在21世紀(jì)初由Anastassiades等初次建立，其過程一般有三步。首先，樣品經(jīng)過甲醇、乙腈、丙酮等有機(jī)溶劑提取，加入硫酸鎂、氯化鈉等進(jìn)行鹽析分離有機(jī)相。其次，加入C18、PSA、GCB等吸附劑去除基質(zhì)中的干擾物質(zhì)，以達(dá)到凈化的目的，最后，將混合液離心得到的上清液直接進(jìn)行檢測。但QuEChERs法也存在著凈化不完全，易受基質(zhì)干擾的缺點(diǎn)。在對(duì)其進(jìn)行提取液種類、吸附劑種類、pH選擇等方式的優(yōu)化后，逐漸形成了一些成熟的QuEChERs試劑盒，在實(shí)際應(yīng)用中對(duì)復(fù)雜基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行提取、凈化效果均較為理想。

羅泰輝等建立了畜禽肉中β-內(nèi)酰胺類、磺胺類增效劑和抗寄生蟲類等63種獸藥殘留的檢測方法。用DSPE法處理畜禽肉類樣品，C18柱凈化豬肉、牛肉、雞肉三種不同基質(zhì)的樣品提取液，結(jié)合HPLC-MS/MS法，結(jié)果顯示樣品前處理方法簡便，靈敏度高。LOD為0.1～3.0μg/kg，LOQ為0.5～10.0μg/kg，回收率為62.2%～112.0%，RSD為3.1%～16.3%，回收性能和穩(wěn)定性良好。

1.3 基質(zhì)固相分散萃取法（Matrixsolidphasedispersion，MSPD）

基質(zhì)固相分散萃取是由Baker等在20世紀(jì)80年代末提出的一種樣品前處理方法。MSPD是將固相萃取吸附劑與固體、半固體或黏性狀態(tài)的樣品研磨至半干狀態(tài)，然后填料裝柱，再用不同的溶液淋洗去除雜質(zhì)，再洗脫目標(biāo)化合物。具有樣品和溶劑用量少、分析時(shí)間短及提取和凈化過程一步完成等優(yōu)點(diǎn)。

尹怡等運(yùn)用基質(zhì)固相分散技術(shù)、固相分散技術(shù)分別和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用建立檢測己烯雌酚（DES）殘留量的分析方法。MSPD法中的固相分散劑是弗羅里硅土（Florisil），目標(biāo)物經(jīng)乙酸乙酯提取，F(xiàn)lorisil柱子凈化，GC-MS法測定。結(jié)果表明兩種檢測方法均能滿足要求，但MSPD法萃取水產(chǎn)品中DES的殘留更簡便、省時(shí)、節(jié)省溶劑。

2 免疫親和色譜（Immunoaffinitychromatography，IAC）

IAC是基于抗原-抗體反應(yīng)具有親合性和特異性的免疫分析技術(shù)。根據(jù)抗原抗體間有選擇性的、可逆性的相互作用的原理，將目標(biāo)物質(zhì)特異性地從復(fù)雜基質(zhì)中分離出來，該方法使傳統(tǒng)復(fù)雜的前處理過程得到了極大的簡化。

Yao等制作了一種免疫親和攪拌棒，其上固定了一個(gè)具有廣泛特異性的單克隆抗體，將攪拌棒置于牛奶樣品中并渦旋震蕩處理，結(jié)合液相色譜熒光檢測法（LC-FLD）檢測了牛奶中的11種喹諾酮類藥物，該方法靈敏度高，LOD為0.05～0.1ng/g，批內(nèi)變異系數(shù)為3.2%～11.9%，批間變異系數(shù)為5.2%～12.5%，具有良好的穩(wěn)定性。該方法為首創(chuàng)，其優(yōu)點(diǎn)為顯著簡化了樣品制備的過程，且免疫親和攪拌棒可重復(fù)利用，更加經(jīng)濟(jì)環(huán)保。

3 液-液萃?。↙iquid-liquidextraction，LLE）

液-液萃取又稱為溶劑萃取，其原理是利用化合物在兩種互不相溶的溶液中的溶解度不同，使目標(biāo)化合物得到有效分離的傳統(tǒng)處理方式。隨著萃取方式的綠色化發(fā)展，傳統(tǒng)液-液萃取因所需溶劑較多且毒性較大，如使用含氯試劑等，已經(jīng)不能滿足要求。因此，在LLE基礎(chǔ)之上發(fā)展起來的微萃取技術(shù)，利用離子液體、表面活性劑等作為新型的萃取溶劑，可大大降低傳統(tǒng)萃取劑的毒性，適應(yīng)綠色萃取的發(fā)展趨勢。

Song等利用離子液體萃取，與HPLC法相結(jié)合建立了一種檢測雞蛋中四環(huán)素類藥物的方法。其研究并優(yōu)化了影響萃取效率的參數(shù)，包括離子液體種類及其體積，分散劑溶劑及其體積，離心和萃取時(shí)長，提取液pH大小和鹽添加量。在最優(yōu)條件下該方法對(duì)四環(huán)素藥物的富集倍數(shù)高達(dá)12～44倍，LOD在2.0～12ng/g之間，雞蛋樣品的添加回收率為58.6%～95.3%，RSD<6.2%。

4 快速溶劑萃取（Acceleratedsolventextraction，ASE）

快速溶劑萃取技術(shù)是基于1996年美國Dionex公司研制出的快速溶劑萃取儀發(fā)展起來的前處理方法。利用高壓（10.3～20.6Mpa）、高溫（50～200℃）的條件，采用不同的萃取溶劑對(duì)不同基質(zhì)進(jìn)行萃取。高溫高壓能夠改變萃取溶劑的特性，減少溶劑的使用量，縮短萃取時(shí)間。該技術(shù)還能實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)控制，具有較好的安全性，但是快速溶劑萃取儀高昂的價(jià)格限制了其應(yīng)用。

于輝等通過優(yōu)化ASE萃取參數(shù)，建立了檢測雞肉中5種磺胺類獸藥殘留量的ASE－HPLC法，其選擇乙腈作為萃取溶劑，在10.0MPa，120°C的條件下靜止萃取10min完成萃取，其建立的方法加標(biāo)回收率在86.0%～101.7%之間，檢出限在3～9μg/kg，可滿足磺胺類藥物的檢測分析要求。

5 超臨界流體萃取（Supercriticalfluidextraction，SFE）

超臨界流體萃取技術(shù)將有機(jī)溶劑萃取與蒸餾技術(shù)結(jié)合起來，利用超臨界流體實(shí)現(xiàn)萃取物與基質(zhì)的分離、純化。超臨界流體同時(shí)具有液體的溶解能力和氣體的滲透能力，在處理過程中通過改變溫度和壓力來控制流體的密度，進(jìn)而改變?nèi)芙饽芰?，使得待分離組分依次按照沸點(diǎn)高低、分子量大小和溶解能力的差別被分離攜帶出來。該方法提取效率高、無溶劑殘留，尤其適合熱敏性成分的分離純化，但是不適用于含有強(qiáng)極性或大分子量的物質(zhì)。

Danaher等利用SFE技術(shù)檢測動(dòng)物肝臟中的多種獸藥，樣品與堿性氧化鋁混合后，用CO2萃取，在100℃，300bar的條件下，成功分離出了伊維菌素、阿維霉素等多種藥物。

6 小結(jié)

本文對(duì)目前獸藥殘留檢測過程中常用的前處理方法進(jìn)行了綜述，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)與適用性，需要根據(jù)被分析藥物的性質(zhì)、基質(zhì)的種類以及后續(xù)采用的分析儀器類型進(jìn)行匹配與選擇，以便達(dá)到更高的回收效率，更好的處理效果，更準(zhǔn)確精密的處理結(jié)果?！?/p>