李 亮 樊福好

（廣東省畜牧技術(shù)推廣總站，廣東廣州 510000）

中國人民養(yǎng)豬的歷史十分悠久，留存的實(shí)物證據(jù)可追溯到9 000年前的新石器時(shí)期。經(jīng)過幾千年的發(fā)展，我國已成為養(yǎng)豬數(shù)量、豬肉產(chǎn)量和消費(fèi)量最大的國家，僅廣東一省2017年的豬肉產(chǎn)量就已超過全球排名第19的國家豬肉產(chǎn)量，養(yǎng)豬行業(yè)在我國國民經(jīng)濟(jì)中的地位可見一斑。

然而由于各種原因，我國養(yǎng)豬行業(yè)的發(fā)展長期受到“豬周期”的困擾。間歇性大幅波動的行情傷害了全產(chǎn)業(yè)鏈的從業(yè)者，對行業(yè)的健康發(fā)展造成了不良影響。與此同時(shí)，由于生產(chǎn)管理水平與產(chǎn)業(yè)高速發(fā)展不匹配，各種傳染性疾病間歇性的暴發(fā)又會導(dǎo)致生豬供應(yīng)減少，推動豬肉價(jià)格上漲，為“豬周期”推波助瀾，讓本就復(fù)雜的行情雪上加霜。2006年下半年，部分生豬主產(chǎn)省暴發(fā)豬藍(lán)耳病疫情，除生豬直接死亡損失外，還導(dǎo)致患病母豬流產(chǎn)或死胎。2010年冬季到2011年春季，一些省區(qū)發(fā)生仔豬流行性腹瀉，個別養(yǎng)殖場小豬死亡率高達(dá)50%。2018年非洲豬瘟侵入國內(nèi)，對我國養(yǎng)豬及相關(guān)行業(yè)更是造成了巨大的危害。

由于研究報(bào)道中的高死亡率，有些地區(qū)的養(yǎng)殖場甚至出現(xiàn)了“恐慌性”拋售，導(dǎo)致飼料、添加劑、獸藥、疫苗行業(yè)突然進(jìn)入了“休克”式“洗牌”。養(yǎng)豬場多種疾病“百花齊放”的場面一夜消失，豬場變得“只怕一種病”。在生產(chǎn)中，生物隔離（安全）開始受到格外的重視，進(jìn)一次豬場隔離幾天、洗幾次澡成為常態(tài)，各種環(huán)境的“消毒—檢測”也成為了一項(xiàng)日常工作。

實(shí)際上，只要根據(jù)科學(xué)規(guī)律辦事，完全沒有必要如此恐慌。傳染病流行的三個基本要素是：傳染源、傳播途徑和易感群體。一般而言，傳染源是能夠散播病原體的動物或攜帶者；傳播途徑是指病原體離開傳染源到達(dá)健康群體所經(jīng)過的途徑，如接觸傳播、飲食傳播、生物媒介傳播等；易感群體指的就是家豬了。對于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部針對重大動物疫情提出的“早、快、嚴(yán)、小”的處置原則[1]，各地的畜牧管理部門和多數(shù)企業(yè)都能嚴(yán)格執(zhí)行到位，大部分重大傳染病的傳染源都已經(jīng)得到了良好的控制；但由于自然環(huán)境和產(chǎn)業(yè)特點(diǎn)十分復(fù)雜，仍有少數(shù)“漏網(wǎng)之魚”引起偶發(fā)性傳播。因此，各養(yǎng)殖場在生產(chǎn)中都應(yīng)當(dāng)盡量做好生物隔離措施，切斷傳播途徑。然而在大規(guī)模的經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)活動中，要做到動物與外界環(huán)境完全隔離、內(nèi)外通道完全切斷，在目前的條件下即無必要、也不現(xiàn)實(shí)。在生產(chǎn)中，做好生物隔離措施之后，最重要的工作就是要做到“加強(qiáng)營養(yǎng)、早期預(yù)警、及時(shí)清除”，具體的措施就是“積極檢測早期預(yù)警、定點(diǎn)清除清理隱患、加強(qiáng)營養(yǎng)增進(jìn)健康”。

1 積極檢測，早期預(yù)警

1.1 技術(shù)原理

人們意識到發(fā)生重大傳染性疾病時(shí)，往往是豬群大規(guī)模暴發(fā)疾病的時(shí)候。以非洲豬瘟為例，人們之所以發(fā)現(xiàn)異常，是因?yàn)樨i只在短時(shí)間內(nèi)大量發(fā)病死亡，且有高度一致的解剖癥狀。根據(jù)流行病學(xué)原理，假如某病的流行曲線只有一個高峰，且所有病例都集中在該病的常見潛伏期內(nèi)，據(jù)此可判斷此次感染屬于同源性傳播。所以很容易推斷出：病原是在之前的某個時(shí)間點(diǎn)（暴露日期）進(jìn)入豬場，感染少量豬后，再逐漸擴(kuò)散，之后可能通過“發(fā)病—擴(kuò)散”的循環(huán)造成大面積的損失。

為了盡可能早地發(fā)現(xiàn)豬群暴露日期以便采取相應(yīng)措施，人們可采取普查或抽查的方式進(jìn)行現(xiàn)況調(diào)查（橫斷面調(diào)查），獲得豬群患病率、癥狀等信息。根據(jù)流行病學(xué)原理，通過一定規(guī)律的普查和抽查相結(jié)合，可以發(fā)現(xiàn)早期病例，了解豬群的健康水平和疾病的分布。

根據(jù)家豬的生活規(guī)律可知，如果外來病毒要感染活體，必須通過口、鼻、眼、皮膚、排泄器官、生殖器官等通道進(jìn)入豬的體內(nèi)。具體的方式除了共用針頭、配種接觸、母子子宮聯(lián)系、傷口接觸等途徑外，最大的可能就是通過口鼻感染豬的口鼻腺體，然后再進(jìn)入體液循環(huán)[2]。以非洲豬瘟為例，OIE研究資料表明：病毒進(jìn)入豬的口鼻之后，先在口鼻腔腺體內(nèi)定植，如果豬的抵抗能力弱，隨后病毒則會進(jìn)入血液，造成豬只發(fā)病死亡。見圖1。此外，美國專家研究表明：現(xiàn)有技術(shù)可以通過豬的唾液檢測藍(lán)耳病[3]、豬瘟[4]等多種病原的核酸及抗體。因此，要對傳染病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行早期監(jiān)測，動物的口腔和鼻腔是必要的采樣位點(diǎn)。

還有研究表明，動物感染疾病過程中，口鼻腔液、直腸液樣本要早于血液樣本發(fā)現(xiàn)病原，也就是說唾液中的病原比血液中的病原出現(xiàn)得早[5]。所以，在疾病傳播的窗口期，對動物唾液、環(huán)境樣本進(jìn)行核酸檢測對于掌握病毒傳播規(guī)律十分重要[6]。同時(shí)，一旦發(fā)現(xiàn)重大疾病風(fēng)險(xiǎn)，可以及時(shí)向有關(guān)部門報(bào)告，只要處理及時(shí)得當(dāng)，就可以控制大部分疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。

1.2 監(jiān)測對象

在生物隔離措施運(yùn)行良好的養(yǎng)豬場內(nèi)，最重要的監(jiān)測對象是豬只及其周邊的環(huán)境表面。

1.3 采樣方法

1.3.1 豬只采樣

對豬只采樣的目的是為了評估豬只的帶毒情況，一般可分為診斷采樣與監(jiān)測采樣。診斷采樣一般用于豬群發(fā)病之后的檢測確診，需要的樣本一般包括：血液、肛拭子、嘔吐物、流產(chǎn)胎兒、精液等。而監(jiān)測采樣的目標(biāo)是監(jiān)測豬群的無癥狀感染情況，以便獸醫(yī)較早發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)和進(jìn)行干預(yù)[7]。正確地采樣對于疾病監(jiān)測十分重要，監(jiān)測需要的樣本一般包括：唾液、口腔拭子、鼻腔拭子，其中又以唾液為最佳[8]。早期預(yù)警的監(jiān)測采樣，盡量不要采血，避免造成豬群應(yīng)激和疾病交叉感染。見圖2。

⑴口、鼻腔拭子采樣：預(yù)先在滅菌的旋蓋采樣管內(nèi)加入0.5～1 mL樣本保護(hù)液，保定豬只后，將滅菌醫(yī)用棉簽伸入豬的鼻腔或口腔，在腔壁來回刮動，棉簽粘取粘液之后，取出放入采樣管，做好標(biāo)記。

操作要點(diǎn)：最好2人協(xié)同進(jìn)行，一人負(fù)責(zé)保定豬只，另一人負(fù)責(zé)采樣。見圖3。優(yōu)點(diǎn)：可以采到任何想采的部位樣本。缺點(diǎn)：抓豬過程、在口鼻腔的采樣過程產(chǎn)生應(yīng)激較大，影響豬只健康；采樣人員需要進(jìn)入豬欄，人員的衣服、鞋子、手套、工具可能造成病原交叉污染。

⑵唾液采樣：預(yù)先在滅菌的旋蓋采樣管內(nèi)加入0.5～1 mL樣本保護(hù)液，站在豬欄外面，將唾液采集袋（繩）一端綁在待采的豬只欄位上，另一端垂到豬的口鼻高度，此時(shí)豬只會主動去咬唾液采集袋，靜靜等待2～3分鐘，提起濕潤的唾液采集袋，用自其帶的塑料包擠出唾液，根據(jù)需要倒出1～5 mL至采樣管，做好標(biāo)記。

操作要點(diǎn)：每擠完一頭豬的唾液之后，更換手套。見圖4、圖5。優(yōu)點(diǎn)：豬沒有應(yīng)激，還很主動；速度快；唾液量大，可同時(shí)用于多種用途；沒有交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。缺點(diǎn)：采樣之后的棉袋（繩）需要焚燒或以其他方式滅活處理。

1.3.2 環(huán)境采樣

環(huán)境采樣的目的是為了監(jiān)測環(huán)境中是否存在病原核酸，一般用于評估環(huán)境的安全性。采樣點(diǎn)一般包括：人體、車輛、隨身物品、下水道、料槽、地板、飼料、地面泥土、水樣等。采樣方式根據(jù)形態(tài)可分為以下幾種：

⑴干燥表面干法采樣：使用干燥的滅菌醫(yī)用棉簽輕輕觸碰采樣點(diǎn)，并重復(fù)進(jìn)行“Z”字形擦拭，棉簽充分粘取采樣點(diǎn)表面的浮塵之后，將棉簽放進(jìn)旋蓋的滅菌采樣管內(nèi)，做好標(biāo)記。

操作要求：保持棉簽及采樣管干燥。優(yōu)點(diǎn)：樣本無需做保護(hù)處理，自然條件下可保持較長時(shí)間。

表1 研究發(fā)現(xiàn)唾液中比血液中更早發(fā)現(xiàn)病毒核酸 [5]

⑵濕潤表面濕法采樣：預(yù)先在滅菌的旋蓋采樣管內(nèi)加入0.5～1 mL樣本保護(hù)液，在采樣現(xiàn)場使用干燥的滅菌醫(yī)用棉簽輕輕觸碰采樣點(diǎn)，并重復(fù)進(jìn)行“Z”字形擦拭，棉簽充分粘上采樣點(diǎn)的表面物質(zhì)之后，將棉簽放進(jìn)采樣管內(nèi)，做好標(biāo)記。

操作要求：采樣管內(nèi)加入樣本保護(hù)液。優(yōu)點(diǎn)：樣本受到保護(hù)，可以常溫保存及運(yùn)輸。

⑶液體濕法采樣：預(yù)先在滅菌的旋蓋采樣管內(nèi)加入0.5～1 mL樣本保護(hù)液，在采樣現(xiàn)場使用干燥的滅菌醫(yī)用棉簽輕輕攪動待采液體，棉簽充分粘上液體之后，將棉簽放進(jìn)采樣管內(nèi)，做好標(biāo)記。

操作要求：采樣管內(nèi)加入樣本保護(hù)液。優(yōu)點(diǎn)：樣本受到保護(hù)，可以常溫保存及運(yùn)輸。

1.4 檢測方法

1.4.1 核酸檢測

環(huán)境與唾液樣本中病毒載量少、干擾物質(zhì)多，尤其是唾液中還含有多種消化酶、抗體和其他生物活性物質(zhì)[9]，導(dǎo)致在風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測過程中，對唾液核酸提取和檢測的要求較高[7]。如果檢測環(huán)節(jié)過多或方法不當(dāng)，PCR極易出現(xiàn)假陰性或陰陽不定的結(jié)果，會極大地增加生產(chǎn)中的風(fēng)險(xiǎn)。假陰性的危害不僅是讓養(yǎng)豬場損失高昂的檢測費(fèi)用，更嚴(yán)重的是引起管理者的誤判。如果豬群存在無癥狀感染的陽性豬而沒有及時(shí)清除，則很可能會讓病毒悄無聲息地傳遍整個豬群，等到有豬只發(fā)病時(shí)再處理可能就損失慘重了。

要準(zhǔn)確開展PCR檢測核酸，樣本的核酸提取是重中之重的工作。目前市場上有2種核酸提取方式：柱提法與磁珠法。柱提法的原理是：利用硅膠膜制成過濾柱，在不同的鹽濃度和PH條件下，經(jīng)過3～4次清洗和過濾，將核酸提取出來供給后續(xù)的PCR操作。近年來美國科學(xué)家創(chuàng)新性地制造出一種納米級的磁珠微粒，并在它表面包裹一層二氧化硅基團(tuán)（SiO2），使之在不同條件下吸附并提取核酸。

柱提法耗時(shí)較長，提取一次核酸一般需要17～35分鐘不等；柱提法過濾柱的硅膠膜表面積大，對核酸的損耗較大，而且需要更換多個離心管，對環(huán)境相對不友好。相比而言，由于磁珠體積較小，磁珠法從原理上就決定了對樣本核酸的損耗較少，而且它耗時(shí)短，有的產(chǎn)品只需要2分鐘即可完成核酸提??；磁珠法所有操作只需在同一個離心管中進(jìn)行，還可以使用自動化機(jī)器大批量操作，更加高效環(huán)保。更重要的是，磁珠最后可以與核酸一同進(jìn)入PCR擴(kuò)增環(huán)節(jié)，可以大幅減少假陰性出現(xiàn)的概率。當(dāng)然它的缺點(diǎn)也十分明顯：磁珠是新興事物，制作工藝復(fù)雜，產(chǎn)品以進(jìn)口為主，國內(nèi)生產(chǎn)廠家較少，進(jìn)口依賴較大。

⑴核酸提?。航ㄗh采用磁珠法，市場上有多種產(chǎn)品，在成本相近的情況下，2～9分鐘即可完成核酸提取；還可以使用機(jī)器批量操作，10分鐘可以提取幾十份核酸，效率與準(zhǔn)確性均遠(yuǎn)超柱提法。

⑵核酸檢測：市場上所有核酸PCR檢測試劑盒的原理基本相同，只是各自的引物、探針、反應(yīng)體系的設(shè)計(jì)存在差異，導(dǎo)致各廠家產(chǎn)品準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性有所差異。豬場的實(shí)驗(yàn)室最好根據(jù)自身的需求，選擇幾個產(chǎn)品對比驗(yàn)證。

1.4.2 抗體檢測

一般認(rèn)為如果沒有接種疫苗，檢出抗體即表明當(dāng)前或過去存在感染。對于急性疾病的暴發(fā)，只有核酸檢測才有意義，因?yàn)榇蠖鄶?shù)豬在產(chǎn)生抗體前已經(jīng)死亡；但是如果存在幸存的豬只，特別是ASFV轉(zhuǎn)變?yōu)橹械榷玖蛘呷醵玖Χ局曛?，則可以通過抗體檢測研究豬的免疫反應(yīng)。見圖6。

許多疾病的抗體可以在唾液中檢出，市場上有多種產(chǎn)品可以選用。建議豬場管理者在傳染性疾病得到控制之前，不要采集血液樣本檢測，可避免無意間導(dǎo)致危險(xiǎn)疾病在群體內(nèi)傳播。

2 定點(diǎn)清除，清理隱患

2.1 實(shí)心圍墻

許多豬欄的食槽被設(shè)計(jì)成大通槽，豬圈之間的隔斷被設(shè)計(jì)成鏤空隔欄，這種設(shè)計(jì)不利于隔離疾病。在高度傳染性疾病面前，為避免接觸傳播，要對這種豬舍設(shè)計(jì)稍加修改。見圖7、圖8。

食槽要改成一欄一槽，豬欄之間的隔斷要改成實(shí)體墻，減少豬只交換口水的概率。

2.2 劃分單位格

“定點(diǎn)清除”要以單元格為單位進(jìn)行操作，以單個豬欄為單位劃分單元格。一個豬欄為基本單元格，直接與它接觸的是相鄰單元格，與它在同一棟豬舍及所有共用同一飼養(yǎng)員或有重要關(guān)聯(lián)的其他豬舍都稱為關(guān)聯(lián)單元格。如圖9。

如果在基本單元格內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒，要求把基本單元格與相鄰單元格的豬全部拔除，然后嚴(yán)格監(jiān)測關(guān)聯(lián)單元格的情況。

2.3 定點(diǎn)清除

“定點(diǎn)清除”操作時(shí)淘汰豬盡量從污物通道運(yùn)出，如果與凈物通道有重合或交叉路段，應(yīng)當(dāng)與凈物通道做好隔離，并在事后充分清洗消毒、采樣驗(yàn)證。如圖10。

3 加強(qiáng)營養(yǎng)，增進(jìn)健康

應(yīng)該意識到，養(yǎng)豬的最終目的是把豬養(yǎng)好，在做好生物隔離、疾病控制的同時(shí)，一定要保證豬群的營養(yǎng)充足與平衡。長期以來對于各種飼料配方的研究，一方面是為了解決與人爭糧的問題，另一方面也是為了降低飼養(yǎng)成本。在當(dāng)前市場行情下，養(yǎng)殖者可以適度加大飼料成本，盡量滿足豬的生長需要，保證豬群健康，增加豬的非特異性抵抗力，減少患病風(fēng)險(xiǎn)。在飼養(yǎng)管理方面也應(yīng)盡量通過優(yōu)化管理和升級器械工具的方式，改善動物福利和衛(wèi)生條件，減少豬群應(yīng)激和霉菌毒素的影響。

總之，養(yǎng)豬的疾病風(fēng)險(xiǎn)很多，但是只要根據(jù)科學(xué)規(guī)律辦事，沒有必要過分恐慌。當(dāng)前全國生豬和能繁母豬存欄量的不斷上升[10]，就是疾病蔓延得到控制的最好證明。

因此，各養(yǎng)殖場在日常工作中要做到“積極檢測早期預(yù)警、定點(diǎn)清除消除隱患、加強(qiáng)營養(yǎng)增進(jìn)健康”這3項(xiàng)工作；同時(shí)也應(yīng)當(dāng)盡量做好生物隔離措施，減少人員與豬的非必要接觸；盡量采取唾液、環(huán)境檢測，減少豬的應(yīng)激和感染風(fēng)險(xiǎn)。相信在良好的管理下，各種疾病的風(fēng)險(xiǎn)一定能夠得到有效控制，養(yǎng)豬行業(yè)的發(fā)展一定會越來越好。