石朝鵬 劉存輝 尹姍姍 孫作文*

〔1 山東省植物保護(hù)總站，山東濟(jì)南 250100；2 全國農(nóng)技推廣服務(wù)中心防治處，北京 100125；3 齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）生態(tài)研究所，山東濟(jì)南 250103；4 沂水縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，山東沂水 276400〕

韭菜灰霉病俗稱白點(diǎn)病、腐爛?。?，2015），由半知菌亞門葡萄孢屬蔥鱗葡萄孢菌引起（何忠全 等，2012）。韭菜灰霉病是韭菜上發(fā)生普遍且為害嚴(yán)重的重要病害，保護(hù)地低溫高濕的環(huán)境條件有利于該病的發(fā)生，輕則減產(chǎn)10%～30%，重則毀棚絕收（黃福奇，2003）。檢索中國農(nóng)藥信息網(wǎng)可知，我國防治韭菜灰霉病的合法登記農(nóng)藥主要有嘧霉胺和腐霉利，規(guī)定腐霉利的安全間隔期為30 d。但是保護(hù)地韭菜單茬生長(zhǎng)期一般為25～40 d，因此設(shè)施韭菜生產(chǎn)中一旦施用腐霉利，農(nóng)藥殘留超標(biāo)風(fēng)險(xiǎn)極高，如山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局通告的2019 年第18 期抽檢的21 批次食品不合格情況，因韭菜腐霉利殘留超標(biāo)的就有3 批次，占14.3%。

為了在生產(chǎn)源頭解決韭菜腐霉利殘留超標(biāo)問題，研究者探索減少化學(xué)農(nóng)藥的使用或者使用生物菌劑代替化學(xué)農(nóng)藥來防治韭菜灰霉病的綠色防控技術(shù)?？莶菅挎邨U菌是一種高效的生防菌劑（閆楊 等，2019），能產(chǎn)生抗生素（張桂英 等，2004；Stein，2005）、酶類（顧真榮 等，2001）、抗菌蛋白（謝棟和胡劍，1998；何紅 等，2003）等多種抗菌物質(zhì)，對(duì)茄子灰霉?。↙iu et al.，2011）、番茄灰霉?。▎炭∏?等，2017；李寶慶 等，2019）、葡萄灰霉病（伏波 等，2016）、黃瓜灰霉病（曹春娜 等，2009）等多種灰霉病有防治效果。木霉是世界公認(rèn)的高效生防菌株，在植物病害的防治中發(fā)揮了重要作用（顧少華，2010）。早在1932 年，Weinding 就發(fā)現(xiàn)木霉對(duì)多種植物病原菌存在寄生作用（郭潤芳 等，2001）。經(jīng)過幾十年的研究，前人已發(fā)現(xiàn)木霉作為生防菌對(duì)蔬菜（劉任和盧兆金，2003；楊春林 等，2008；畢文慧 等，2018）、水稻（李敏 等，2009）、棉花（Sivan，1989）、水果（張富榮 等，2018）及中藥材（李瓊芳 等，2007）等多種植物病害均有防治作用。木霉可通過抗生作用、競(jìng)爭(zhēng)作用和重寄生作用、誘導(dǎo)植物增強(qiáng)抵抗力等多種機(jī)制對(duì)植物病原真菌產(chǎn)生拮抗作用。木霉在代謝過程中會(huì)分泌一些抗菌物質(zhì)，如大分子的抗菌蛋白、酶類物質(zhì)和抗生素等小分子多糖物質(zhì)，在病原微生物的抑制作用中發(fā)揮主要作用（張衡宇，2011）。陳列忠等（2007）在1 株枸骨內(nèi)生真菌哈茨木霉中分離得到的單端孢霉烯化合物，對(duì)番茄早疫病和黃瓜立枯病病原菌具有體外抑制活性。哈茨木霉適應(yīng)性廣、生長(zhǎng)和繁殖速度快，可以迅速利用營養(yǎng)和占據(jù)空間，從而抑制病原真菌的生長(zhǎng)（惠有為 等，2003）。王莉衡等（2014）發(fā)現(xiàn)蘆薈內(nèi)生真菌哈茨木霉LH-7 能夠明顯抑制多種植物病原真菌生長(zhǎng)及孢子萌發(fā)。哈茨木霉還可以誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性，通過直接或間接產(chǎn)生某些化學(xué)物質(zhì)，激發(fā)植物的防衛(wèi)反應(yīng)（Ahraed et al.，2000）。馬佳等（2014）發(fā)現(xiàn)哈茨木霉SH2303 能夠防治玉米小斑病，該菌株處理的玉米葉片在接種玉米小斑病菌后36 h，體內(nèi)防御反應(yīng)酶系苯丙氨酸解氨酶（PAL）和超氧化物歧化酶（SOD）活性達(dá)到峰值。

目前國外已有商品化的木霉制劑，如美國的哈茨木霉T22（Topshield）（Harman，2000）和以色列的哈茨木霉T39（Trichodex）（Zimand & Elad，1996），可以防治由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病、白粉病等多種葉部病害。本試驗(yàn)選用枯草芽孢桿菌和木霉進(jìn)行試驗(yàn)，研究其對(duì)韭菜灰霉病的防治效果。鑒于木霉種類繁多，本試驗(yàn)先選擇了5 種木霉為試驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，篩選出對(duì)韭菜灰霉病防治效果最好的木霉株系，再與枯草芽孢桿菌進(jìn)行協(xié)同防治試驗(yàn)，調(diào)查防效，從而為使用綠色防控技術(shù)防治韭菜灰霉病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑

參試5 種木霉（Trichodermaspp.）：深綠木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990、深綠木霉23617（活體孢子≥2 億個(gè) ·g-1），為山東省科學(xué)院生態(tài)研究所環(huán)境微生物團(tuán)隊(duì)研制中試產(chǎn)品；枯草芽孢桿菌（可濕性粉劑，活芽孢1 000 億個(gè)·g-1），購于武漢科諾生物科技股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)基地基本情況

試驗(yàn)在山東省沂水縣天沐農(nóng)業(yè)專業(yè)合作社大棚內(nèi)進(jìn)行，篩選試驗(yàn)和協(xié)同防治試驗(yàn)韭菜品種均主要為漢中韭，養(yǎng)根平茬后第1 茬韭菜供應(yīng)春節(jié)市場(chǎng)，該茬韭菜灰霉病嚴(yán)重，故所有試驗(yàn)針對(duì)該茬韭菜進(jìn)行灰霉病防治。施肥、澆水及除草等農(nóng)事操作按當(dāng)?shù)厣a(chǎn)習(xí)慣進(jìn)行，且所有大棚均一致。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 木霉篩選試驗(yàn) 試驗(yàn)在簡(jiǎn)易式冬暖大棚內(nèi)進(jìn)行，共設(shè)置5 個(gè)木霉處理，每處理3 次重復(fù)，每小區(qū)面積為84 m2（12 m×7 m），采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，并設(shè)置空白對(duì)照（圖1）。5 種木霉制劑均采用300 倍液，用藥量為750 g·hm-2，用水量為450 L ·hm-2，木霉制劑和水混勻后，使用智能電動(dòng)噴霧器對(duì)植株和地面噴霧，盡量均勻全面。在韭菜剛出土?xí)r開始噴藥，每隔7 d 噴1 次，共噴2 次。第1 次噴藥時(shí)間為2019 年1 有3 日，第2 次噴藥時(shí)間為1 有10 日。

1.3.2 哈茨木霉21990 和枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗(yàn) 試驗(yàn)選用4 個(gè)拱棚（高2 m，寬7 m），前一年因韭菜灰霉病暴發(fā)毀棚絕產(chǎn)，其中3 個(gè)棚為試驗(yàn)棚，1 個(gè)棚為對(duì)照棚。2019 年12 有17 日韭菜扣棚當(dāng)日隨水沖施哈茨木霉21990，用量為45 kg ·hm-2，待韭菜長(zhǎng)至5 cm左右時(shí)（2019年12有27日），采用智能電動(dòng)噴粉機(jī)噴施枯草芽孢桿菌，用量為3 kg·hm-2；對(duì)照棚不做任何處理。

1.4 調(diào)查時(shí)間

1.4.1 調(diào)查時(shí)間和次數(shù) 木霉篩選試驗(yàn)：分別于2019 年1 有3 日、1 有10 日和1 有17 日進(jìn)行3 次病害調(diào)查。

哈茨木霉21990 和枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗(yàn)：2020 年1 有10 日進(jìn)行第1 次病害調(diào)查，1 有17 日進(jìn)行第2 次病害調(diào)查。

1.4.2 調(diào)查方法 采用5 點(diǎn)取樣法進(jìn)行取樣，每點(diǎn)隨機(jī)調(diào)查3～5 株，對(duì)每株韭菜全部葉片進(jìn)行調(diào)查。韭菜灰霉病病葉分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0 級(jí)，無病斑；1 級(jí)，單葉片有病斑1～3 個(gè)；3 級(jí)，單葉片有病斑4～6 個(gè)；5 級(jí)，單葉片有病斑7～10 個(gè)；7 級(jí)，單葉片有病斑11～20 個(gè)，部分密集成片；9 級(jí)，單葉片有病斑密集，占葉片面積1/4 以上。按《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則（一）殺菌劑防治蔬菜灰霉病》（農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，2000）計(jì)算病情指數(shù)和防效。

1.5 計(jì)算方法

先用Microsoft Office Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，再用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行LSD 方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 安全性

試驗(yàn)期間對(duì)各處理韭菜進(jìn)行系統(tǒng)觀察，與對(duì)照相比，各處理均未出現(xiàn)明顯藥害，說明試劑用量對(duì)供試韭菜安全，無不良反應(yīng)。

2.2 木霉篩選試驗(yàn)

第1 次和第2 次病害調(diào)查時(shí)，空白對(duì)照和各處理韭菜均未發(fā)生灰霉病；第3 次調(diào)查時(shí)部分韭菜發(fā)生灰霉病。調(diào)查結(jié)果如表1 所示：深綠木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990 和深綠木霉23617 對(duì)韭菜灰霉病的防效 分 別 為13.62%、68.93%、64.00%、91.72% 和87.23%。其中，哈茨木霉21990 的防效最高，因此選擇哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌進(jìn)行協(xié)同防治試驗(yàn)。

2.3 哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗(yàn)

第1 次調(diào)查時(shí)處理棚韭菜灰霉病病情指數(shù)為0，未發(fā)生明顯病害，對(duì)照棚的病情指數(shù)為13.77（表2）。第2 次調(diào)查時(shí)，處理棚發(fā)生灰霉病，病情指數(shù)為9.71，對(duì)照棚病情指數(shù)為37.44，哈茨木霉21990與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治，對(duì)韭菜灰霉病的防效為74.07%。

表1 木霉對(duì)韭菜灰霉病的田間防效

表2 哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

在木霉篩選試驗(yàn)中采用噴霧方法，在韭菜生產(chǎn)棚室低矮一側(cè)實(shí)施起來比較困難，所以在哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗(yàn)中，哈茨木霉施用方法為在韭菜扣棚當(dāng)日澆水時(shí)沖施，枯草芽孢桿菌采用智能電動(dòng)噴粉機(jī)噴施，能使藥劑均勻遍布整個(gè)棚室空間，方便快捷，省工省時(shí)。

協(xié)同防治試驗(yàn)棚為三膜栽培拱棚，空氣濕度極高，2019 年1 有按此栽培模式，韭菜灰霉病發(fā)生嚴(yán)重，全部毀棚絕收。2019 年12 有使用哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治，對(duì)韭菜灰霉病的防效為74.07%。防治韭菜灰霉病除了使用生物菌劑外，調(diào)控環(huán)境因素也很重要，通過改善栽培條件，提高棚內(nèi)溫度，降低棚內(nèi)濕度，從而降低灰霉病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)和發(fā)生程度，減輕防治壓力。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)篩選出了對(duì)韭菜灰霉病防治效果較高的哈茨木霉21990；探索出了防控韭菜灰霉病操作方便的實(shí)施方案，即“一沖一噴”，在韭菜扣棚前隨水沖施哈茨木霉21990，待韭菜長(zhǎng)到5 cm 左右時(shí)噴施枯草芽孢桿菌，大面積田間試驗(yàn)防效為74.07%。在韭菜棚室濕度較高，灰霉病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)極高的條件下，獲得較高的防效，有效保證了韭菜生產(chǎn)安全，同時(shí)從源頭上有效解決因使用腐霉利防治韭菜灰霉病造成的殘留超標(biāo)問題，確保韭菜質(zhì)量安全。