李 龍,李文鳳

(楊凌職業(yè)技術學院 動物工程分院，陜西 楊凌 712100)

益生菌作為一種微生態(tài)制劑已廣泛應用于動物生產中[1]。益生菌在宿主體內存活率的高低直接影響到使用效果，但很多益生菌菌株在宿主胃腸道中存活率很低[2]。微膠囊技術能夠在益生菌表面形成一個抵抗不利因素的表面屏障，從而能夠有效的將益生菌傳遞至特定位置[3]。受限于產量低和包埋顆粒過大等缺陷，目前微膠囊益生菌還不能廣泛的進行工業(yè)化生產[4]。

內源乳化法是利用凝膠(如海藻酸、果膠和卡拉膠等)將活的細胞進行包埋，其基礎是連續(xù)相(細胞聚合物懸浮)與分散相(油)之間的關系。這種方法包被的益生菌在不利環(huán)境下存活率高，包埋顆粒大小適中，易于大規(guī)模工業(yè)化生產[5]。唾液乳桿菌是乳酸桿菌屬中的一類，在人類和動物生產中都被作為益生菌來使用。李龍(2015)[6]研究發(fā)現給飼喂唾液乳酸桿菌LTC-55能夠存進肉雞消化酶分泌和腸道發(fā)育，并提高生產性能。本研究擬利用內源乳化法制備唾液乳酸桿菌LTC-55微膠囊，并進行飼養(yǎng)試驗研究其對肉雞生產性能、免疫機能和盲腸微生物組成的影響。

1 材料與方法

1.1 微膠囊制備

所用益生菌菌株唾液乳酸桿菌LTC-55為本實驗室從藏雞胃腸道中分離所得[6]。微膠囊制備參照Guan等(2011)[7]推薦的方法操作，并略作修改，將100 mL 1.8%(W/V)海藻酸鈉、5 mL 植物乳桿菌JM113懸菌液(1×108CFU·mL-1)和0.45 g 碳酸鈣混勻后，用滅菌水補足300 mL，將混合液加入石蠟油中(含0.2% Span80)，在磁力攪拌器上以400 rpm的速度乳化5 min，加入900 μL冰醋酸繼續(xù)乳化10 min，再加入100 mL滅菌水使制備好的微珠進入水相層，吸取水相層離心清洗三次后，冷凍干燥收集微膠囊包被的益生菌。以未進行微膠囊化的益生菌為對照，使用同樣的方法進行冷凍干燥。利用平板計數檢測活菌數為7.2×108CFU·g-1微膠囊。

1.2 飼養(yǎng)試驗

1.2.1 試驗設計 480只1日齡雄性AA肉仔雞被隨機分為至4個處理，每個處理6個重復，每個重復20只雞，進行為期42d的飼養(yǎng)試驗。對照組飼喂不含抗生素的基礎日糧(對照組)，益生菌組、空殼組和微膠囊組分別在基礎日糧中添加未包被的益生菌干粉(活菌數未1×108CFU·kg-1飼料)、0.14 g未包被益生菌的微膠囊空殼和微膠囊益生菌(活菌數未1×108CFU·kg-1飼料)。整個試驗期肉雞自由采食和飲水，按照AA肉雞常規(guī)免疫程序進行免疫。

1.2.2 指標檢測 主要有:

(1)生產性能。分別在第21天和第42天時稱取每個重復雞只的體重，并統(tǒng)計上述階段中該重復雞只的耗料量和增重，計算21 d和42 d每個重復肉雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和飼料轉化率(FCR)。

(2)免疫器官指數。分別在第21天和第42天每個重復隨機抽取2只雞，稱重后翅靜脈采血，分離血清-20℃保存?zhèn)溆?。斷頸處死后，立即分離脾臟和法氏囊，稱重后計算免疫器官指數(免疫器官重×1 000/雞只體重)。

(3)免疫球蛋白水平。血清免疫球蛋白水平(IgA, IgG和IgM)采用ELISA檢測試劑盒測定(南京建成)，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書規(guī)定程序進行。

(4)盲腸微生物。 斷頸處死雞只取盲腸，無菌收集盲腸內容物，置于冰上帶回實驗室。稱取1g盲腸內容物用無菌生理鹽水(0.85% NaCl)進行10倍梯度稀釋，分別取稀釋液100μL涂布于乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌選擇性固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h后進行菌落計數，結果以log10 CFU·g-1腸道內容物表示。

1.3 數據統(tǒng)計

試驗數據利用SPSS17.0軟件的單因素方差分析(one-way ANOVA)進行方差分析，LSD法進行多重比較。結果以"平均值±標準差"表示，以P<0.05認定結果為差異顯著。

2 結果

2.1 微膠囊益生菌對肉雞生產性能的影響

結果見表1，由表1可知在21 d和42 d時相比與對照組，微膠囊組顯著提高肉雞ADG(P<0.05)。而所有處理組在整個試驗期ADFI和FCR上并無顯著差異(P>0.05)。

表1 微膠囊益生菌對肉雞生產性能的影響

2.2 微膠囊益生菌對肉雞免疫器官指數和血清免疫球蛋白水平的影響

結果見表3，由表3可知在21d時相比于對照組，益生菌組和微膠囊組顯著提高了肉雞法氏囊指數、血清IgG和IgM水平(P<0.05)，同時微膠囊組肉雞血清IgG水平顯著高于益生菌組(P<0.05)。在42 d時相比于對照組，益生菌組和微膠囊組顯著提高了肉雞法氏囊指數、血清IgM水平(P<0.05)，同時微膠囊組顯著提高了肉雞脾臟指數和血清IgG水平(P<0.05)。

表2 微膠囊益生菌對肉雞免疫器官指數和血清免疫球蛋白水平的影響

2.3 微膠囊益生菌對肉雞盲腸微生物組成的影響

結果見表3，由表3可知在21 d時相比于對照組益生菌組和微膠囊組顯著提高肉雞盲腸乳酸桿菌數量(P<0.05)，同時微膠囊組還顯著降低肉雞盲腸沙門氏菌數量(P<0.05)。在42 d時相比于對照組，微膠囊組顯著提高肉雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌數量，降低大腸桿菌和沙門氏菌數量(P<0.05)。

表3 微膠囊益生菌對肉雞盲腸微生物組成的影響

3 討論

為了驗證內源乳化凝膠法制備嗜酸乳酸桿菌微膠囊的活體使用效果，本試驗研究了其對肉雞生產性能、免疫器官指數、免疫球蛋白水平和盲腸微生物的影響。結果發(fā)現微膠囊化的唾液乳桿菌能夠顯著提高肉雞生產性能。李龍等(2019)[8]研究發(fā)現用冷凍干燥法制備的微降囊化植物乳酸桿菌能夠提高肉雞生產性能，Zhang等(2015)[9]同樣發(fā)現用內源乳化法包埋的布拉酵母菌能夠顯著提高肉雞生產性能。但不同的微膠囊制備方法不同，包埋率、包埋顆粒大小等因素都會影響到微膠囊的使用效果，因此可能出現同樣的菌株利用不同的包埋方法產生不同的使用效果。

免疫器官指數和免疫球蛋白水平是評價肉雞免疫水平的一個重要指標[10]。本研究發(fā)現膠囊化和未膠囊化的益生菌均能提高肉雞的免疫器官指數和免疫球蛋白水平，但膠囊化益生菌效果更佳。這也就說明微膠囊化益生菌能夠進一步提高益生菌的免疫增強作用。

外源微生物在進入動物腸道后在酸性和多種酶的環(huán)境作用下可能失活[2]。筆者試驗結果顯示微膠囊益生菌能夠提高21 d和42 d肉盲腸中有益菌數量，而微膠囊化益生菌僅在21 d時能夠提高盲腸乳酸桿菌數量。這可能是有在肉雞飼養(yǎng)前期肉雞消化功能還不完善，益生菌更容易附著在腸道，而在生長后期隨著消化機能完善造成益生菌很難在腸道增殖和存活，而在這個期間微膠囊化益生菌的保護作用就更佳明顯，從而造成微膠囊化益生菌在42 d時在改善腸道微生態(tài)上仍然有良好的使用效果。