石 潔，李寶燕，欒炳輝，李凌云，田園園，王英姿,

（1 山東省煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，265500）（2 煙臺大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院）

葡萄炭疽病主要由膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）侵染引起[1]，以危害葡萄果實(shí)為主，近成熟或成熟期時(shí)表現(xiàn)癥狀明顯。果實(shí)受害后，先在果面產(chǎn)生針頭大小的褐色小圓斑，之后逐漸擴(kuò)大并凹陷，表面產(chǎn)生同心輪紋狀排列的暗黑色小顆粒，即病原菌的分生孢子盤，環(huán)境濕度大時(shí)發(fā)病部位出現(xiàn)粉紅色分生孢子團(tuán)[2-3]，嚴(yán)重時(shí)，病斑擴(kuò)展至全穗，病穗率50%～70%，對葡萄產(chǎn)業(yè)危害嚴(yán)重。目前，葡萄炭疽病仍以化學(xué)防治為主，因殺菌劑單一，連續(xù)、多次施用導(dǎo)致病原菌對其敏感性降低[4]，同時(shí)存在用藥量大、果園生態(tài)環(huán)境惡化、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等問題。為滿足現(xiàn)代葡萄產(chǎn)業(yè)農(nóng)藥減施增效發(fā)展要求，急需篩選出可與化學(xué)殺菌劑交替輪換使用的有效生物藥劑，以減少化學(xué)藥劑用量，保障葡萄產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。

生物殺菌劑具有安全、高效、無污染的優(yōu)點(diǎn)，對環(huán)境保護(hù)和食品安全具有重要作用。植物源殺菌劑丁子香酚對防治蘋果輪紋病[5]、櫻桃莖腐病[6]、葡萄霜霉病[7]及葡萄灰霉病[8]等有效；植物源生物堿類農(nóng)藥苦參堿是防治葡萄霜霉病的有效藥劑[7]；植物仿生農(nóng)藥乙蒜素可防治櫻桃莖腐病[6]、花生葉斑病[9]等；微生物源農(nóng)藥多抗霉素防治葡萄霜霉病[7]、黑痘病、穗軸褐枯病、灰霉病[10]和黃瓜白粉病[11]等效果較好；微生物源N-糖苷類抗生素中生菌素對番茄青枯病的防效較好[12]。但這5 種生物藥劑對葡萄炭疽病的防治效果尚未見報(bào)道。

本研究測定了丁子香酚等5 種生物藥劑對葡萄炭疽病菌的毒力，并選取4 種室內(nèi)抑菌活性較好的藥劑開展了田間試驗(yàn)，以期篩選出可以減少和替代化學(xué)農(nóng)藥防治葡萄炭疽病的生物藥劑，對降低果品農(nóng)藥殘留和延緩抗藥性具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

于煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院植保園采集葡萄炭疽病典型病果，經(jīng)組織分離與純化培養(yǎng)后獲得純系菌株。

1.2 供試藥劑

供試藥劑：3%多抗霉素可濕性粉劑，廣東省東莞市瑞德豐生物科技有限公司；0.3%丁子香酚可溶性液劑，山東省億嘉農(nóng)化有限公司；1.5%苦參堿水劑，成都新朝陽作物科學(xué)有限公司；80%乙蒜素乳油，天津市漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司；3%中生菌素可濕性粉劑，福建凱立生物制品有限公司。對照藥劑：80%代森錳鋅可濕性粉劑，陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技（中國）有限公司。

1.3 室內(nèi)毒力測定

1.3.1 含藥培養(yǎng)基的配制

將配制的藥劑母液稀釋后加入PDA 培養(yǎng)基，3%多抗霉素可濕性粉劑濃度梯度為15 000、7 500、3 750、1 875、937.5、468.75 mg/L，3%丁子香酚可溶性液劑濃度梯度為0.75、0.6、0.5、0.43、0.38、0.33 mg/L，1.5%苦參堿水劑濃度梯度為100、50、25、12.5、6.25 mg/L，80%乙蒜素乳油濃度梯度為160、80、40、20、10、5 mg/L，3%中生菌素可濕性粉劑濃度梯度為100、50、25、12.5、6.25 mg/L。

1.3.2 試驗(yàn)方法

采用菌絲生長速率法[13]測定藥劑對病原菌的抑制作用。以不加藥平板為對照，每個(gè)濃度重復(fù)4 次。于25 ℃下恒溫培養(yǎng)5 d 后，采用十字交叉法垂直測量平板菌落直徑，與對照相比計(jì)算試驗(yàn)藥劑對炭疽病菌菌絲生長的抑制率。利用SPSS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算各藥劑毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r和EC50。

抑制率（%）=［（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑］×100

1.4 田間試驗(yàn)

1.4.1 試驗(yàn)地概況

2018 年7—9 月于蓬萊潮水釀酒葡萄園進(jìn)行試驗(yàn)，栽植品種‘蛇龍珠’，樹齡10 年，籬架式栽培，行株距1.5 m×1.0 m，試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)樹勢一致，炭疽病常年發(fā)生，沙壤土，配有滴灌帶，肥水良好，管理水平較高。

1.4.2 試驗(yàn)藥劑選擇及濃度設(shè)置

選取對炭疽病菌抑制效果較好的丁子香酚、苦參堿、乙蒜素、中生菌素進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。供試藥劑處理：0.3%丁子香酚可溶性液劑1 000、1 250、1 500 倍液，1.5%苦參堿水劑500、600、700 倍液，80%乙蒜素乳油1 000、1 250、1 500 倍液，3%中生菌素可濕性粉劑600、800、1 000 倍液。選保護(hù)性殺菌劑80%代森錳鋅可濕性粉劑800 倍液作為藥劑對照，以噴灑等量清水作為空白對照。

1.4.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及調(diào)查方法

設(shè)置14 個(gè)處理，4 次重復(fù)，56 個(gè)試驗(yàn)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)10 株葡萄樹，小區(qū)面積10 m×1.5 m，隨機(jī)區(qū)組排列。在葡萄炭疽病發(fā)生前進(jìn)行試驗(yàn)，以MATABI Super Green 16 型背負(fù)式噴霧器噴霧，以植株均勻著藥為止。7 月28 日首次噴藥，藥前調(diào)查發(fā)病基數(shù)，每隔7 d 施藥1 次，連續(xù)施藥3 次。末次藥后10 d 調(diào)查發(fā)病情況。每個(gè)小區(qū)隨機(jī)選擇20 個(gè)果穗，記錄總果數(shù)及受害病果數(shù)，計(jì)算病果率及防效。利用DPS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對各小區(qū)的防治效果進(jìn)行方差分析，并用DMRT 法進(jìn)行多重比較。

病果率（%）=（病果數(shù)/總果數(shù)）×100

防治效果（%）=［（對照受害果率-處理受害果率）/對照受害果率］×100

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力測定結(jié)果

丁子香酚抑制葡萄炭疽病菌菌絲生長效果最好，EC50為0.50 mg/L；苦參堿、中生菌素、乙蒜素抑制效果次之，EC50分別為20.03、22.05、33.04 mg/L；多抗霉素抑制效果最差，EC50高達(dá)3 420.15 mg/L（表1）。對照藥劑代森錳鋅EC50為42.66 mg/L，除多抗霉素外，丁子香酚、苦參堿、乙蒜素、中生菌素EC50值均低于對照藥劑，抑菌效果較好，可進(jìn)一步開展田間藥效研究。

表1 不同殺菌劑對葡萄炭疽病菌菌絲的毒力測定結(jié)果

2.2 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

由表2 可知，0.3%丁子香酚可溶性液劑1 000～1 250 倍液防效最高，為91.41%～93.49%，顯著優(yōu)于其他藥劑；0.3%丁子香酚可溶性液劑1 500 倍液、80%乙蒜素乳油1 000～1 500 倍液防效次之，為80.21%～83.50%，顯著低于對照藥劑代森錳鋅，顯著高于中生菌素和苦參堿各處理，其中乙蒜素3 個(gè)處理間防效差異不顯著；1.5%苦參堿水劑500～700倍液防效最低，為67.75%～70.95%。

3 討論與結(jié)論

環(huán)渤海灣地區(qū)鮮食葡萄采用藥劑防控結(jié)合果實(shí)套袋技術(shù)，可有效控制炭疽病的發(fā)生，但釀酒葡萄炭疽病發(fā)生仍較重。由于長期使用化學(xué)殺菌劑，在藥劑的選擇壓力下，病原菌產(chǎn)生一定抗藥性而使防治效果下降甚至喪失。據(jù)報(bào)道，葡萄炭疽病菌已對多菌靈、甲基硫菌靈、乙霉威表現(xiàn)為高水平抗藥性[14-16]，對戊唑醇、烯唑醇、腈菌唑等麥角甾醇生物合成脫甲基抑制劑類（DMIs）殺菌劑敏感性也逐漸降低[15-18]。而篩選的供試生物藥劑與上述苯并咪唑類、DMIs 等殺菌劑作用機(jī)理不同[19-24]，生產(chǎn)中可輪流施用，以減緩抗藥性的發(fā)生與發(fā)展。

表2 不同殺菌劑防治葡萄炭疽病田間試驗(yàn)結(jié)果

毒力測定結(jié)果表明，丁子香酚、苦參堿、乙蒜素、中生菌素對葡萄炭疽病菌的抑制效果較好，均優(yōu)于常規(guī)化學(xué)藥劑代森錳鋅，多抗霉素抑菌效果較差，EC50高達(dá)3 420.15 mg/L。而楊敬輝等2014 年發(fā)現(xiàn)50%多抗霉素對采自江蘇省的葡萄炭疽病菌EC50為70.34 mg/L[25]。分析可能是藥劑有效成分含量及兩地菌株抗藥性不同，或經(jīng)過多年藥劑選擇，炭疽病菌對藥劑敏感性降低，造成抑菌效果產(chǎn)生差異。綜合室內(nèi)外試驗(yàn)結(jié)果得出，0.3%丁子香酚、80%乙蒜素對葡萄炭疽病的田間防效在80%以上，可作為防控葡萄炭疽病的有效替代藥劑與常規(guī)化學(xué)藥劑代森錳鋅輪換使用，推薦使用倍數(shù)均為1 000～1 500 倍。此外，丁子香酚對葡萄霜霉病菌及灰霉病菌抑制效果較好，且對2 種病害表現(xiàn)出較優(yōu)的田間防效[7-8]，生產(chǎn)中可作為兼防多種葡萄病害的有效藥劑使用，具有較好的推廣應(yīng)用前景。