王瀾

摘? 要：目的? 探討梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、甲苯胺紅不加熱血清學試驗（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）聯(lián)合檢測對梅毒的診斷價值。方法? 對2018年1月～2020年1月韶關市慢性病防治院收治的1 397例性病患者進行回顧性研究，均行TP-ELISA、TRUST和TPPA檢測，對比陽性檢出率和診斷效能（敏感性、特異性、準確性、陽性預測值和陰性預測值）。結果? TP-ELISA和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率和診斷效能對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩種方式陽性檢出率和診斷效能均高于TRUST，與單一診斷方式相比，三種方式聯(lián)合應用診斷價值更高，組間對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論? 聯(lián)合應用TP-ELISA、TRUST和TPPA，可對梅毒予以準確診斷，值得臨床應用。

關鍵詞：梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗;甲苯胺紅不加熱血清學試驗;梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗;梅毒;診斷效能

中圖分類號：R759.1? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1009-8011（2021）-18-0136-03

梅毒為慢性傳播性疾病，由蒼白密螺旋體所致，疾病發(fā)生早期，可對患者皮膚黏膜造成損傷。發(fā)展至晚期可對患者心血管、神經和骨骼等組織造成損傷，疾病表現(xiàn)個體差異明顯，典型性不足，誤診與漏診風險大[1-2]?，F(xiàn)階段，臨床探討出多種方式對梅毒進行血清學檢查，梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、甲苯胺紅不加熱血清學試驗（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）是常用的三種診斷方式，其診斷敏感性和特異性各有差異，應用原理也存在明顯差別[3-4]。為促進疾病診斷價值的提升，本文選取韶關市慢性病防治院收治的1 397例性病患者為研究對象，對三種方式聯(lián)合應用的診斷價值進行如下總結。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取2018年1月～2020年1月韶關市慢性病防治院收治的1 397例性病患者為研究對象，其中男721例，女676例;年齡22～70歲，平均年齡（50.12±2.24）歲。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，患者均自愿簽署知情同意書。

1.2? 納入與排除標準

納入標準：①年齡20～70歲者;②對文中所用檢查方式可耐受者。

排除標準：①采血后需行手術治療者;②需行輸血治療者;③存在免疫系統(tǒng)病變者;④存在其他類型性傳播疾病者。

1.3? 方法

1.3.1? 標本采集

在1 397例疑似患者晨起空腹狀態(tài)下抽取肘靜脈血5 mL，置于離心機處理，轉速為3 500 r/min，時長為10 min，取離心后清液待測。

1.3.2? 儀器與試劑

TP-ELIAS試劑盒（生產企業(yè)：廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，國藥準字S20000066），TRUST試劑盒（生產企業(yè)：上海榮盛生物科技有限公司，國藥準字S10940098），TPPA試劑盒（生產企業(yè)：日本富士瑞必歐株式會社珠海麗珠有限公司，國械注進20173406813）。

1.3.3? 試驗方法

TP-ELISA：以Nichol株為抗原，將高純度梅毒螺旋體特異抗原包被于微反應孔，加入酶標抗原和血清標本，形成梅毒螺旋體抗原-梅毒螺旋體抗體-酶標梅毒螺旋體抗原復合夾心物，顯色反應通過酶底物色原液反應，顯色越明顯表明抗體水平越高;酶標儀波長設為450 nm、空白孔調零，對光密度進行測量，光密度/被檢分析物量值<1即可判定為陰性，反之為陽性。

TRUST：以包被心磷脂的膽固醇為載體，經非特異性抗體反應形成膠體微粒;取甲苯膠紅溶液上懸浮抗原微粒，與血清抗體進行反應，經肉眼觀察到紅色凝集塊即可判定為陽性，反之為陰性。

TPPA：以致敏顆粒為抗體，由精致菌體主要成分制得，包被梅毒螺旋體Nichols株，顆粒與抗體結合后，可出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。陽性：凝集均一或為較大環(huán)狀;可疑：凝集較小、環(huán)狀分布，外緣光滑完整;陰性：顆粒呈紐扣狀分布，邊緣光滑。用稀釋溶液將血清標本于U形板上稀釋，往其中加入顆粒，靜置2 h后觀察，致敏粒子孔稀釋倍數≥1：80為陽性。

1.4? 觀察指標

1.4.1? 梅毒抗體檢測結果分布

分析TP-ELISA、TRUST和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率。

1.4.2? 梅毒抗體檢測結果對比

分析三種方式單獨使用與聯(lián)合應用檢出梅毒抗體的真陽、假陽、真陰與假陰例數。

1.4.3? 診斷效能對比

對比單一診斷與聯(lián)合診斷方式對梅毒抗體的診斷敏感性、特異性、準確性、陽性預測值和陰性預測值。計算公式：敏感性=真陽性例數/（真陽性+假陽性）例數×100%;特異性=真陰性例數/（假陰性+真陰性）例數×100%;準確度=（真陽性+真陰性）例數/總例數×100%;陽性預測值=真陽性例數/經該方案診斷為陽性例數×100%;陰性預測值=真陰性例數/經該方案診斷為陰性例數×100%。

1.5? 統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計學軟件SPSS 22.0進行數據處理，計數資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結果

2.1? 不同方式梅毒抗體檢測結果分布

TP-ELISA和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩種方式陽性檢出率均高于TRUST，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），三種方式陽性檢出率對有差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2? 不同方式診斷結果對比

1 397例疑似患者中，375例患者經《梅毒診斷標準》[5]確診，其中TP-ELISA檢出真陽例數為330例，真陰例數為940例，假陽例數為45例，真陰例數為82例;TRUST對應例數分別為280例、900例、95例和122例;TPPA對應例數分別為344例、950例、31例、72例。三種方式聯(lián)合診斷對應例數分別為362例、980例、13例、42例。見表2。

2.3? 不同方式診斷效能對比

TP-ELISA和TPPA各項診斷效能對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩種方式診斷效能均高于TRUST（P<0.001），三種方式聯(lián)合敏感性、特異性、準確性、陽性預測值和陰性預測值均高于單一診斷方式，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。見表3。

3? 討論

梅毒以梅毒螺旋體為病原體，可通過性接觸傳染，也可通過手術、輸血、接吻、哺乳等途徑傳播;孕婦感染梅毒后，可經胎盤傳染胎兒，增加早產、流產風險，影響新生人口素質。因此，需重視疾病檢測工作，盡早診斷疾病，控制梅毒傳播[6-7]。

目前臨床主要用梅毒血清學試驗對梅毒進行診斷，分為特異性和非特異性兩種。TPPA法是梅毒確認試驗，它使用Nochols株，所用檢測方法為雙抗體夾心法，所得檢測結果特異性高，可開展效價測定。人體感染梅毒后，抗體將終身存在于體內，不受疾病發(fā)展進程和干預措施的影響，結果較為穩(wěn)定，靈敏性和特異度都比較高，假陽性概率低，可用于各期梅毒的檢測[8]。但該方式難以自動化進行，需通過肉眼觀察，不能對原始數據進行儲存，檢測時需稀釋樣本，樣本數量過大時，無法批量篩查，具體操作時步驟繁瑣，反應時間長，無法進行快速檢測，使得該試驗方案無法被廣泛應用至梅毒鑒別診斷中。因此，應尋找一種更為簡便、靈敏的方式對疾病進行診斷，判定疾病嚴重程度。

TP-ELISA為基因工程檢測技術，通過使用純化基因工程包被微孔板，對梅毒螺旋體抗原示蹤物予以標記，通過對血清和血漿標本中的免疫球蛋白G和免疫球蛋白M檢測來對疾病進行準確診斷[9]。試驗過程中使用全自動酶免疫，可檢測大批量樣本，在獻血體檢和大樣本篩查中被廣泛應用，是診斷梅毒的首選方式。待血清內抗體含量較高時，可有前帶效應，導致檢查過程中出現(xiàn)假陰性結果，降低診斷準確性，單獨應用時診斷價值并不高，應與其他方式結合，以準確診斷疾病。

TRUST為非特異性試驗的一種，以脂質為抗原，對抗心磷脂抗體進行檢測，其滴度與病程相關，病毒感染或疾病再次發(fā)作，可增加其滴度，予以相應的干預措施后，可使得滴度下降。該試驗可反映抗體滴度變化，在此基礎上判定疾病發(fā)展情況[10]。但該方式陽性檢出率低，患者發(fā)病早期，癥狀不典型，有時出現(xiàn)陰性結果，存在誤診漏診情況。

TPPA、TP-ELISA和TRUST均是檢查梅毒螺旋體的血清學方法，各有其優(yōu)缺點：①TPPA有著較好的靈敏度和特異性，操作過程復雜，人為因素復雜，易出現(xiàn)誤差，成本高，無法進行快速檢測;②TP-ELISA結果簡潔，數據易保存，成本低，很少出現(xiàn)人為原因導致的誤差，但仍有假陰性結果出現(xiàn)，因此對于高度疑似而TP-ELISA檢測結果為陰性者，應對血清樣本行梯度稀釋處理后再檢測，以免稀釋倍數不足出現(xiàn)假陰性結果;③TRUST操作簡便，靈敏度和特異性都不高，易出現(xiàn)假陽性結果，主要被用在療效判定、復發(fā)預測和再感染評估中。上述方式均在梅毒螺旋體檢測中發(fā)揮作用，但都不能作為感染梅毒螺旋體的絕對依據，即便檢測結果為陰性，也不能排除感染的存在。因此應在條件允許的基礎上聯(lián)合運用三種檢測方式，既可獲得較高的靈敏度與特異性，也能減少其他疾病和待測樣本中其他物質導致的假陽性和假陰性結果，對疾病予以準確診斷。綜合分析各種檢查結果，追蹤弱陽性患者，以降低誤診與漏診風險。林明春等人[11]聯(lián)合應用三種檢測方式，結果顯示診斷靈敏度和特異度分別為98.28%和94.74%，診斷價值更高，考慮可在TP-ELISA篩查的基礎上，進行TRUST和TPPA篩查，以準確診斷梅毒。文中數據顯示，三種方式聯(lián)合應用診斷效能更高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。因此綜合運用多種檢驗方式，可互相補充，進一步提高對梅毒確診率。

綜上所述，TP-ELISA、TRUST和TPPA聯(lián)合診斷梅毒準確性和特異性都比較高，可準確預測疾病，進而提高疾病確診率。

參考文獻

[4]王毅，周萬明，樊靜，等.綿陽市2017年男男性行為者HIV、梅毒血清學檢測及HIV感染影響因素[J].中國病毒病雜志，2019，9（4）：274-280.

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[8]顏曉林，胡融融.明膠顆粒凝集試驗聯(lián)合ELISA法在梅毒檢測中的應用價值[J].中國微生態(tài)學雜志，2020，32（9）：1090-1093.

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[10]汪磊，張瑞生.ELISA法與TRUST法在梅毒檢測中的應用價值比較[J].國際免疫學雜志，2019，42（2）：157-161.

[11]林明春，肖禮紅，趙洪民，夏鳳瓊.探討TRUST和TPPA法聯(lián)合檢測梅毒螺旋體抗體的臨床價值[J].齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2019，40（6）：699-701.