張俊杰，美合日阿依·喀斯木

新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052

白斑狗魚（Esox lucius）為鮭形目（Salmoniformes）、狗魚科（Esocidae）、狗魚屬（Esox）的一種大型淡水魚類，兇猛貪食，是世界性著名的游釣魚類，分布于北美洲及歐亞大陸北方的74°N～36°N冷水淡水流域，在我國白斑狗魚僅分布于新疆北部額爾齊斯河流域，在烏倫古湖和博斯騰湖均有產(chǎn)量，是新疆重要的土著經(jīng)濟(jì)魚類之一。白斑狗魚的生長速度很快、味道鮮美、肉質(zhì)堅(jiān)韌少刺、營養(yǎng)很豐富，是人們喜愛的優(yōu)質(zhì)食用魚和重要的經(jīng)濟(jì)魚類。

2001年上海海洋大學(xué)與新疆額爾齊斯河特種魚類繁育場聯(lián)合攻關(guān)，率先在國內(nèi)實(shí)現(xiàn)了白斑狗魚的人工繁殖和苗種培育，各地養(yǎng)殖單位陸續(xù)引入并開展了人工養(yǎng)殖。但是白斑狗魚人工養(yǎng)殖過程養(yǎng)殖中，由于密度不斷加大，導(dǎo)致養(yǎng)殖水體水質(zhì)惡化、細(xì)菌大量繁殖，導(dǎo)致白斑狗魚病害的發(fā)生越來越嚴(yán)重。為減少白斑狗魚病害的發(fā)生和危害，需要采用相應(yīng)的藥物進(jìn)行預(yù)防和治療，除了參考其它魚類常用藥物使用方法外，還要考慮這些藥物對(duì)白斑狗魚的特殊毒性。

本試驗(yàn)通過進(jìn)行強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)，探討強(qiáng)氯精這一生產(chǎn)上最常用消毒藥物對(duì)白斑狗魚幼魚的半致死濃度和安全濃度，以期更好地為在白斑狗魚的疾病預(yù)防和治療時(shí)的安全用藥提供參考。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)用魚為來源于新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室人工孵化的25 d白斑狗魚幼魚。試驗(yàn)時(shí)選擇體態(tài)正常、體格健壯、活力較強(qiáng)的白斑狗魚幼魚，平均體長3.2±0.2 cm，平均體重是0.22±0.1 g，試驗(yàn)期間不喂食。

1.1.2 試驗(yàn)藥品

強(qiáng)氯精為南京萬福金安生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的萬福金安消毒片，有效氯含量為48%～58%，約500mg/片。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)條件

所有試驗(yàn)在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)用水為充分曝氣12 h以上的自來水，試驗(yàn)過程中，水溫為18～19℃，試驗(yàn)容器為10 L的塑料盆。

1.2.2 預(yù)備試驗(yàn)

本試驗(yàn)的預(yù)備試驗(yàn)和正式試驗(yàn)都采用常溫靜水試驗(yàn)進(jìn)行。先參考強(qiáng)氯精常用的潑灑濃度和對(duì)其它魚類的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，先設(shè)計(jì)5個(gè)間距較大濃度作為預(yù)備試驗(yàn)濃度，分別為50、10、2、0.4、0.08mg/L，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組，每個(gè)梯度在3個(gè)水盆設(shè)置為3個(gè)重復(fù)。白斑狗魚幼魚按照濃度梯度從低到高的順序逐個(gè)放入，每個(gè)重復(fù)放幼魚10尾。

試驗(yàn)開始后，前8 h連續(xù)觀察，觀察記錄試驗(yàn)幼魚的表現(xiàn)和存活情況，并于24 h后記錄幼魚的死亡數(shù)，找出引起白斑狗魚幼魚的24 h內(nèi)死亡率0～100%的強(qiáng)氯精濃度范圍。判斷幼魚死亡的標(biāo)準(zhǔn)是用小撈子撈出來看看幼魚的反應(yīng)，用玻璃棒輕輕刺激尾柄部位，5min內(nèi)無反應(yīng)即可確定為個(gè)體死亡，死亡的幼魚及時(shí)撈出。

1.2.3 正式試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)，得到引起白斑狗魚幼魚24 h內(nèi)死亡0～100%的強(qiáng)氯精濃度，按寇氏法(Karber)設(shè)計(jì)分組，設(shè)置5個(gè)等對(duì)數(shù)間距梯度，分別為0.4、0.6、0.89、1.34、2.0mg/L，作為正式試驗(yàn)時(shí)所需要的強(qiáng)氯精試驗(yàn)濃度，每個(gè)藥物濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放幼魚10尾，同時(shí)設(shè)一個(gè)不含藥物的空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)過程基本上跟預(yù)備實(shí)驗(yàn)的過程一樣，連續(xù)觀察8 h實(shí)驗(yàn)魚的反應(yīng)和中毒癥狀，記錄不同濃度下幼魚在24 h、48 h和96 h時(shí)的死亡情況。

1.2.4 半致死濃度和安全濃度的計(jì)算

根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分別用改進(jìn)寇氏法（karber）求出強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚24 h、48 h、96 h的半致死劑量(LD50)，計(jì)算公式如下:

式中：

Xm―為最大劑量的對(duì)數(shù)值；

i―為相鄰劑量比值的對(duì)數(shù)；

∑p―為各組死亡率的總和(以小數(shù)表示)；

Pm―最大劑量組的死亡率；

Pn―最小劑量組的死亡率。

并根據(jù)以下公式計(jì)算安全濃度。

SC=LD5048×0.3/(LD5024/LD5048)2

2 結(jié)果與分析

2.1 白斑狗魚幼魚在強(qiáng)氯精水體中的中毒及死亡癥狀

預(yù)備試驗(yàn)時(shí)，放入較高濃度強(qiáng)氯精水體（50、10、2.0mg/L）中的白斑狗魚幼魚一開始反應(yīng)劇烈，表現(xiàn)為狂躁不安，沿盆壁劇烈游動(dòng)，頭部不時(shí)浮出水面，持續(xù)一段時(shí)間后尾部擺動(dòng)幅度增加，但前行緩慢，幼魚身體逐漸失去平衡，出現(xiàn)側(cè)翻。瀕臨死亡時(shí)魚側(cè)浮于水面，呼吸急促，口、鰓蓋、鰭條張開幅度增大，偶爾急速翻轉(zhuǎn)數(shù)次，而后漂浮于水面，呈假死狀態(tài)，對(duì)刺激反應(yīng)不敏感，死亡后鰓蓋張開。其中在50mg/L強(qiáng)氯精濃度水體，5 min內(nèi)白斑狗魚幼魚全部死亡；在10mg/L強(qiáng)氯精濃度水體，白斑狗魚幼魚放入15 min后開始死亡，5 h內(nèi)全部死亡；在2 mg/L強(qiáng)氯精濃度水體，白斑狗魚幼魚17 h后開始死亡，24 h內(nèi)全部死亡。死亡幼魚顯微觀察，可看到鰓部發(fā)紅，體表黏液增多，體色變淺。而在0.4、0.08mg/L強(qiáng)氯精濃度水體中的白斑狗魚幼魚沒有出現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)。

正式試驗(yàn)時(shí)，在2.0mg/L強(qiáng)氯精水體中，白斑狗魚幼魚表現(xiàn)與預(yù)備試驗(yàn)基本上相同。在1.34mg/L強(qiáng)氯精水體中，白斑狗魚幼魚先狂游一陣，而后平靜下來，并不時(shí)亂動(dòng)，最后一動(dòng)不動(dòng)，逐漸死亡。在0.89mg/L強(qiáng)氯精水體中，白斑狗魚幼魚基本上比較平靜，只是死亡前偶爾出現(xiàn)亂游現(xiàn)象。在0.4和0.6mg/L強(qiáng)氯精水體中的白斑狗魚幼魚沒有表現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)，但是96 h內(nèi)也分別死亡1-2尾。

2.2 強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的半致死濃度和安全濃度

根據(jù)正式試驗(yàn)中不同濃度強(qiáng)氯精水體中白斑狗魚幼魚的死亡情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果，分別計(jì)算出強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的24 h、48 h和96 h的半致死濃度（LD50）為1.38、1.29、0.89mg/L（如表1所示）。并由此計(jì)算出強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的安全濃度（SC）為0.34mg/L。

表1 白斑狗魚幼魚在不同濃度強(qiáng)氯精水體中死亡率和半致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 強(qiáng)氯精的作用及其對(duì)魚類的毒性作用

強(qiáng)氯精，化學(xué)名稱為三氯異氰尿酸（trichloroisocyanuric acid），是漁業(yè)生產(chǎn)中用于防治細(xì)菌性魚病和改善水質(zhì)的常用藥物，是一種高效、廣譜、低毒的殺菌消毒劑。強(qiáng)氯精在水中產(chǎn)生次氯酸鈉，分解產(chǎn)生初生態(tài)氧將菌體的蛋白質(zhì)氧化或有效氯直接作用于菌體蛋白質(zhì)，殺菌力為漂白粉的100倍左右。但是強(qiáng)氯精在強(qiáng)力殺菌的同時(shí)，對(duì)魚類也具有比較強(qiáng)的毒性，在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，稍有不慎就會(huì)造成養(yǎng)殖魚類的死亡。草魚幼魚在濃度為3mg/L的強(qiáng)氯精水體中，在30min后開始分泌大量粘液，活動(dòng)由開始的活躍變得緩慢，沉于缸底，呼吸逐漸放慢，呼吸深度加大，5 h后開始死魚，72 h死亡率達(dá)100%。本試驗(yàn)中白斑狗魚幼魚在強(qiáng)氯精水體中的中毒癥狀與草魚幼魚的中毒癥狀基本相同。

3.2 強(qiáng)氯精對(duì)不同魚類的安全濃度與安全使用

強(qiáng)氯精水體對(duì)不同的魚類的安全濃度是不同的，強(qiáng)氯精在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中一般使用濃度是0.1～0.3mg/L，強(qiáng)氯精對(duì)部分養(yǎng)殖魚類安全濃度低于0.3mg/L，甚至低于0.1mg/L，表現(xiàn)出很高的毒性，如對(duì)月鱧的安全濃度是0.24mg/L，對(duì)劍尾魚的安全濃度為0.22mg/L，對(duì)厚頜魴魚苗的安全濃度是0.190mg/L，對(duì)南方大口鯰的安全濃度是0.147 mg/L，對(duì)梭鱸幼魚的安全濃度為0.141mg/L，對(duì)鯰魚魚苗的安全濃度為0.0357mg/L，對(duì)大刺鰍魚苗的安全濃度為0.041mg/L。在這些魚類的養(yǎng)殖生產(chǎn)和疾病防治過程中，就應(yīng)該禁用強(qiáng)氯精。

強(qiáng)氯精對(duì)其他一些養(yǎng)殖魚類的安全濃度超過0.3mg/L，如對(duì)云斑鮰的安全濃度為0.38mg/L，對(duì)草魚魚苗的安全濃度為0.4436 mg/L，對(duì)淡水白鯧的安全濃度為0.492mg/L，對(duì)金魚稚魚的安全濃度為0.53mg/L，對(duì)鯪魚魚苗的安全濃度為0.73mg/L，在這些魚類養(yǎng)殖過程中可以選擇強(qiáng)氯精，進(jìn)行水體消毒和水質(zhì)凈化。本試驗(yàn)結(jié)果表明，強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的安全濃度為0.34mg/L，接近強(qiáng)氯精的最高水體潑灑濃度，說明強(qiáng)氯精對(duì)白斑狗魚幼魚的毒性較強(qiáng)，從安全的角度來看，實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用強(qiáng)氯精時(shí)，要準(zhǔn)確計(jì)算藥物劑量，密切觀察魚的活動(dòng)情況，高濃度藥物浸泡時(shí)最好先用少量魚做試驗(yàn)，以免導(dǎo)致大量魚類中毒。