蔣銳沅,滿婷婷,覃艷春,楊夢(mèng)娜,莫春梅,榮 震Δ
(1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué),南寧 530000; 2. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,南寧 530000)
原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,也是世界第三常見(jiàn)的癌癥死亡原因[1]。2017年流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,我國(guó)原發(fā)性肝癌的發(fā)病率和死亡率日益上升,已經(jīng)成為我國(guó)發(fā)病率第五和死亡率第二的惡性疾病[2],因此原發(fā)性肝癌的防治研究問(wèn)題已成為我國(guó)腫瘤防治的熱點(diǎn)問(wèn)題和難點(diǎn)問(wèn)題。科學(xué)研究表明,癌癥相關(guān)性炎性是癌癥七大特征之一[3],能夠不斷促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在原發(fā)性肝癌的發(fā)展過(guò)程中,正是由于諸多炎性因子(包括TNF-α,IL-6、IL-8等)共同作用,維持了肝癌細(xì)胞不斷增殖、分化和轉(zhuǎn)移炎性微環(huán)境。
TACE術(shù)作為中晚期不可手術(shù)的原發(fā)性肝癌患者首選的局部治療措施,當(dāng)腫瘤組織血供消失后會(huì)出現(xiàn)大面積液化壞死,大量炎性因子和壞死后的腫瘤細(xì)胞釋放進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng),極易導(dǎo)致腫瘤的局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。而中醫(yī)藥對(duì)原發(fā)性肝癌具有多環(huán)節(jié)、分階段、多靶點(diǎn)的藥理學(xué)效應(yīng),對(duì)改善原發(fā)性肝癌TACE術(shù)后所面臨的多次手術(shù)、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高的問(wèn)題及循環(huán)系統(tǒng)中的高炎性因子狀態(tài)具有十分廣泛的前景。
敷和備化方是全國(guó)名老中醫(yī)榮遠(yuǎn)明以疏肝調(diào)脾、利濕化瘀為法治療原發(fā)性肝癌的基本方。前期臨床研究發(fā)現(xiàn),敷和備化方聯(lián)合TACE術(shù)治療原發(fā)性肝癌,能夠有效提高患者的免疫功能并改善患者術(shù)后肝功能[4]。本研究以原發(fā)性肝癌患者術(shù)前及術(shù)后血清中炎性因子作為主要指標(biāo),觀察對(duì)照組(單純TACE術(shù))及治療組(敷和備化聯(lián)合TACE術(shù))的臨床療效及治療前后血清炎性因子水平,以期闡釋敷和備化方治療原發(fā)性肝癌的作用機(jī)制。
選取2018年1月至2018年12月間在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科及肝病科收治入院確診為原發(fā)性肝癌的患者,以隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為2組。治療組40例,其中男19例,女21例;年齡36~59歲,平均年齡(48.2±8.6)歲;臨床分期Ⅱ期17例,Ⅲ期23例。對(duì)照組40例,其中男17例,女23例;年齡35~63歲,平均年齡(48.1±6.2)歲;臨床分期Ⅱ期15例,Ⅲ期25例。2組患者年齡、性別、腫瘤分期等方面比較(性別χ2=0.202、P=0.653,年齡t=0.074、P=0.941,腫瘤分期χ2=0.205、P=0.651 (P>0.05)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性。2組患者均按時(shí)完成整個(gè)療程,無(wú)失訪與脫落病例。本研究已獲得廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),入組患者及家屬均簽署知情同意書。
西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)頒布的《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[5]制定:病理診斷為肝組織學(xué)檢查或肝外組織的組織學(xué)檢查證實(shí)為原發(fā)性肝癌者;臨床診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)參照BCLC分期(巴塞羅那臨床肝癌分期,2010版)[6]。
中醫(yī)癥狀診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)頒布的《惡性腫瘤中醫(yī)診療指南(2014年版本)》[7]中肝癌病-肝郁脾虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)制定。主癥:脅肋、少腹疼痛,情志抑郁不舒,或喜嘆息,肢體倦怠,神疲乏力,納呆食少;次癥:脘腹脹滿,噯氣,少氣懶言,口黏不欲飲,時(shí)有惡心、腹瀉或大便干結(jié);舌脈:舌淡或邊有齒痕,苔薄或膩,脈弦或濡滑。確診要求: 具備3項(xiàng)主癥或2項(xiàng)主癥伴隨1項(xiàng)次癥,同時(shí)結(jié)合舌脈,由兩名副主任及以上級(jí)別醫(yī)師判定。
符合上述西醫(yī)診斷、中醫(yī)診斷和辨證分型患者;既往無(wú)慢性肝炎病史;性別不限;年齡25~65周歲;BCLC臨床分期為B或C期;均未經(jīng)過(guò)任何抗腫瘤治療的中晚期病人,或既往接受過(guò)抗腫瘤藥物治療但經(jīng)過(guò)4周的洗脫期;預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月;入組患者均符合TACE術(shù)適應(yīng)證。
患者原發(fā)性肝癌的分期處于終末期水平;既往有慢性乙型肝炎病史的原發(fā)性肝癌患者;既往有嚴(yán)重慢性疾病或合并心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病及精神病患者;曾經(jīng)接受過(guò)TACE治療,或接受過(guò)其他抗腫瘤治療未經(jīng)過(guò)4周洗脫期的患者;預(yù)計(jì)生存期≤3個(gè)月的患者;排除不能接受TACE術(shù)的患者。凡符合上述所有納入標(biāo)準(zhǔn)、沒(méi)有排除標(biāo)準(zhǔn)中任何一項(xiàng)并簽署知情同意書者,可納入觀察病例。
本研究患者入組后均參照《CSCO原發(fā)性肝癌診療指南(2017版)》[8]給予西醫(yī)常規(guī)治療,包括抗腫瘤藥物治療、保護(hù)肝功能、提高免疫功能等對(duì)癥支持治療措施。給予斑蝥酸鈉維生素B6注射液(貴州柏強(qiáng)制藥有限公司)每日0.3 mg,分1次靜脈滴注;復(fù)方甘草酸甘片(日本米諾發(fā)源制藥株式會(huì)社)每日225 mg,分3次口服;烏苯美司膠囊(浙江普洛康裕制藥有限公司)每日30 mg,分3次口服。TACE術(shù)的灌注藥物為吡柔比星10 mg稀釋液,奧沙利鉑50 mg+碘化油6 ml混合乳劑,并以明膠海綿顆粒進(jìn)行后續(xù)腫瘤血管栓塞。術(shù)后根據(jù)患者有無(wú)栓塞綜合征情況對(duì)癥處理。治療組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用敷和備化方,藥物組成:人參10 g,柴胡12 g,香附12 g,茵陳30 g,姜半夏12 g,白花蛇舌草30 g,白術(shù)15 g,枳實(shí)10 g,茯苓15 g,當(dāng)歸12 g,白芍12 g,鱉甲24 g,三七10 g,牛膝30 g,莪術(shù)12 g,生姜10 g,甘草6 g,方中所有中藥飲片均經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科中藥師鑒定為正品,由本院中藥房代煎,每日1劑水煎服,分早晚2次服用,每次200 ml,持續(xù)服用4周。
1.6.1 2組近期有效率 參照世界衛(wèi)生組織發(fā)布的實(shí)體瘤療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)RECISt 1.1版[9]制定療效判定方法和檢查方法,2組患者均于治療前及治療結(jié)束后行MRI增強(qiáng)檢查對(duì)腫瘤的位置、范圍進(jìn)行評(píng)估,檢查儀器為GE 3.0T 磁共振成像系統(tǒng),對(duì)比劑采用Gd-DTPA進(jìn)行增強(qiáng)比對(duì)。
1.6.2 2組血清甲胎蛋白水平 晨起患者空腹下抽取外周血3 mL,離心取血清于-70 ℃待測(cè);采用全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)(雅培i2000S12)測(cè)定血清甲胎蛋白(AFP)水平,在治療前及治療結(jié)束后各檢測(cè)1次。
1.6.3 2組生活質(zhì)量評(píng)分 以卡氏評(píng)分(Karnofsky)量表對(duì)2 組患者生活質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估,分別于患者治療前及治療結(jié)束后各測(cè)評(píng)1次,記錄患者所得生活質(zhì)量評(píng)分。
1.6.4 中醫(yī)癥狀評(píng)分 中醫(yī)癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)2組患者進(jìn)行臨床癥狀評(píng)估,參考《中藥新藥研究臨床指導(dǎo)原則》[10]中“肝癌病-肝郁脾虛證”的相關(guān)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)癥狀療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn),選擇腹痛腹脹、納呆食少、情志抑郁;次要癥狀包括惡心嘔吐、神疲乏力、口苦咽干的輕重分級(jí)量表。癥狀按照嚴(yán)重程度分為無(wú)、輕度、中度、重度4個(gè)級(jí)別,主要癥狀分別記為“0、2、4、6”分,次要癥狀記為“0、1、2、3”分,2組患者均在治療前及治療結(jié)束后各測(cè)評(píng)1次。
1.6.5 血清炎性因子水平測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)患者血清炎性細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α水平,試劑盒由武漢伊萊特公司生產(chǎn)。主要步驟:患者清晨空腹抽取靜脈血3 ml,放入真空干燥抗凝采血管后,3000 r/min離心5 min,吸取上層血清。在96孔板中逐孔加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清,并順序加入抗體、親和素與顯色劑,于37 ℃恒溫箱中充分孵育與反應(yīng)。待反應(yīng)完成后加入終止液,以酶標(biāo)儀設(shè)置450 mm波長(zhǎng)讀取OD值。以標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,換算每孔待測(cè)樣品中濃度值。
近期療效水平判定標(biāo)準(zhǔn)參照世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《實(shí)體瘤療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》RECISt 1.1版制定。完全緩解(CR):除結(jié)節(jié)性疾病外,所有目標(biāo)病灶完全消失,所有目標(biāo)結(jié)節(jié)須縮小至正常大小(短軸<10 mm),所有目標(biāo)病灶均須評(píng)價(jià);部分緩解(PR):所有可測(cè)量目標(biāo)病灶的直徑總和低于基線≥30%,目標(biāo)結(jié)節(jié)總和使用短徑,而所有其他目標(biāo)病灶的總和使用最長(zhǎng)直徑,所有目標(biāo)病灶均須評(píng)價(jià);疾病進(jìn)展(PD):以整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中所有測(cè)量靶病灶直徑之和的最小值為參照,直徑和相對(duì)增加至少20%(如果基線測(cè)量值最小就以基線值為參照);除此之外,必須滿足直徑和的絕對(duì)值增加至少5 mm(出現(xiàn)1個(gè)或多個(gè)新病灶也視為疾病進(jìn)展);疾病穩(wěn)定(SD):靶病灶減小的程度未達(dá)到PR,增加的程度也未達(dá)到PD水平,介于兩者之間,研究時(shí)可以直徑之和的最小值作為參考??傆行?ORR)=(CR+PR)/ 總例數(shù)×100%。疾病控制率(DCR)=(CR+PR+SD)/總例數(shù)×100%。
以患者行TACE術(shù)后發(fā)生的栓塞綜合征情況為安全性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),包括發(fā)熱、反酸、嘔吐、便秘、肝功能損害、腎功能損害及出血等情況。
表1示,2組患者TACE術(shù)后4周復(fù)查顯示,2組患者行TACE術(shù)后均獲得較高有效率;治療組患者總有效率高于對(duì)照組患者(Ρ<0.05);2組患者總控制率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Ρ>0.05)。圖1顯示,患者影像學(xué)表現(xiàn)為塊狀型肝癌,肝右葉S6段見(jiàn)一類圓形異常信號(hào)灶,大小約為2.7×1.6×1.2 cm,可見(jiàn)豐富血供,肝臟體積縮小各葉比例失調(diào),表面凹凸不平。圖2示,患者TACE術(shù)后復(fù)查,肝右葉S6段見(jiàn)一類圓形異常信號(hào)灶,大小約為2.0×1.5×0.7 cm,未見(jiàn)明顯血供,可見(jiàn)碘油沉積,肝臟體積縮小,各葉比例失調(diào),表面凹凸不平。與之前片比較,肝S6病灶較前縮小,未見(jiàn)明顯血供。
表1 2組近期有效率比較[例(%)]
表2 2組患者TACE術(shù)后不良反應(yīng)出現(xiàn)情況比較
表2示,2組患者TACE術(shù)后4周均未發(fā)生與本次研究相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng),2組患者均未發(fā)現(xiàn)死亡病例及嚴(yán)重栓塞綜合征病理。與對(duì)照組比較,治療組不良反應(yīng)出現(xiàn)率明顯低于對(duì)照組(Ρ<0.05)。
圖1 治療組患者TACE術(shù)前肝臟MRI增強(qiáng)圖像
圖2 治療組患者TACE術(shù)后1個(gè)月肝臟MRI增強(qiáng)圖像
表3示,2組患者TACE術(shù)后4周血清AFP水平均較術(shù)前顯著降低(Ρ<0.05);治療組患者術(shù)后AFP降低水平明顯低于對(duì)照組(Ρ<0.05)。
表3示,2組患者行TACE術(shù)4周后KPS評(píng)分均較術(shù)前有顯著上升(Ρ<0.05);治療組患者術(shù)后KPS評(píng)分顯著高于對(duì)照組(Ρ<0.05)。
表3 2組患者治療前后AFP及生活質(zhì)量評(píng)分比較
表4示,2組患者TACE術(shù)后4周中醫(yī)癥狀積分(腹痛腹脹、納呆食少、情志抑郁、惡心嘔吐、神疲乏力、口苦咽干)均較術(shù)前有顯著減少(Ρ<0.05);治療組患者上述癥狀積分顯著低于對(duì)照組(Ρ<0.05)。
表5示,2組患者行TACE術(shù)4周后血清IL-2顯著高于術(shù)前水平(Ρ<0.05);血清IL-6、IL-8與TNF-α水平顯著低于術(shù)后水平(Ρ<0.05);且治療組患者術(shù)后血清IL-2水平顯著高于對(duì)照組(Ρ<0.05);治療組患者術(shù)后血清IL-6、IL-8與TNF-α水平顯著低于對(duì)照組(Ρ<0.05)。
肝癌基質(zhì)微環(huán)境是由肝星狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞組成,這些細(xì)胞對(duì)肝癌的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有著重要作用。同時(shí),肝癌細(xì)胞也對(duì)肝癌的基質(zhì)環(huán)境產(chǎn)生著十分重要的影響,與肝癌基質(zhì)微環(huán)境中的眾多細(xì)胞共同構(gòu)成維持肝癌細(xì)胞不斷增殖、分化和轉(zhuǎn)移的微環(huán)境[10]。
中醫(yī)認(rèn)為,腫瘤組織與其處于炎性微環(huán)境能夠破壞人體內(nèi)的氣血陰陽(yáng)平衡,使“癌毒”更易出現(xiàn)。原發(fā)性肝癌與其炎性微環(huán)境的病因病機(jī)可以概括為“虛、痰、瘀、毒”,由于人體氣血陰陽(yáng)虧虛,痰濁、水飲、氣滯、血瘀諸多病理產(chǎn)物相互夾雜、交融,從而導(dǎo)致病變的發(fā)生。炎性微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用,與中醫(yī)對(duì)腫瘤病機(jī)認(rèn)識(shí)有許多共同之處。中醫(yī)認(rèn)為“脾主運(yùn)化,肝主疏泄”,大量的病理性炎性因子、細(xì)胞代謝產(chǎn)物即為中醫(yī)所指的“痰濕”范疇,癥瘕積聚也是正常細(xì)胞病理性增殖分化的結(jié)果[11]。而原發(fā)性肝癌炎性微環(huán)境的病因病機(jī)也可以概括為“虛、痰、瘀、毒”。由于人體氣血陰陽(yáng)虧虛,痰濁、水飲、氣滯、血瘀諸多病理產(chǎn)物相互夾雜、交融,從而導(dǎo)致病變的發(fā)生。炎性微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用,與中醫(yī)對(duì)腫瘤病機(jī)認(rèn)識(shí)有許多共同之處。“痰、瘀、毒”等構(gòu)成的病理環(huán)境實(shí)際就是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖分化,不斷推動(dòng)其惡性侵襲轉(zhuǎn)移的炎性微環(huán)境。通過(guò)辨證使用祛邪與扶正相結(jié)合的手法,采用清熱解毒、活血化瘀、溫陽(yáng)散寒、健脾理氣、扶正固本等方法對(duì)原發(fā)性肝癌進(jìn)行治療,改善腫瘤組織中的炎性微環(huán)境,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能,使腫瘤細(xì)胞的增殖和分化得到抑制,有效改善患者的臨床癥狀和預(yù)后。
全國(guó)名老中醫(yī)榮遠(yuǎn)明在診治原發(fā)性肝癌方面有獨(dú)特的理論和大量豐富的臨床經(jīng)驗(yàn),他認(rèn)為在治療原發(fā)性肝癌時(shí)應(yīng)注重從肝與脾的關(guān)系進(jìn)行論治。認(rèn)為肝癌病機(jī)主要是由于肝氣郁滯、脾失健運(yùn)導(dǎo)致中焦氣機(jī)升降不利,進(jìn)而引起膽腑郁熱、三焦水道不利,加上木郁乘土進(jìn)而引起氣滯、血瘀、濕停等多種病理性產(chǎn)物相互交織化生癌毒,導(dǎo)致原發(fā)性肝癌的產(chǎn)生。病機(jī)屬于“虛實(shí)夾雜,本虛標(biāo)實(shí),病理性產(chǎn)物停聚日久化生癌毒”,治療當(dāng)以健脾疏肝、清熱利濕、化瘀散結(jié)為大法,給予敷和備化方進(jìn)行治療,使肝木復(fù)敷和之性,脾土復(fù)備化之職,進(jìn)而使原發(fā)性肝癌患者的生活質(zhì)量和免疫功能水平得到改善,提高患者生存質(zhì)量。方中柴胡疏肝解郁,人參健脾益氣為君藥;香附疏肝解郁,當(dāng)歸養(yǎng)血活血,白芍柔肝止痛,白術(shù)健脾祛濕,枳實(shí)破氣消積,茯苓滲濕利痰為臣藥;生姜降逆止嘔,半夏燥濕祛痰,三七活血化瘀,茵陳清肝泄熱,白花蛇舌草消癌抗癌,莪術(shù)破血止痛,鱉甲軟堅(jiān)散結(jié)共為佐藥;牛膝引藥下行,甘草調(diào)和諸藥共為使藥,全方諸藥配伍疏肝理氣、健脾養(yǎng)血、祛痰利濕,扶正與祛邪同用,本虛與標(biāo)實(shí)兼顧,達(dá)到調(diào)理中焦肝脾的功效。
現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),敷和備化方中多味疏肝解郁、健脾益氣中藥均能起抗炎、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和抑制腫瘤細(xì)胞活性的作用。方中人參[12]有效成分人參皂苷Rh2具有誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721向正常細(xì)胞分化的作用;苦參[13]的有效成分苦參堿能誘導(dǎo)人肝癌HepG2 細(xì)胞發(fā)生分化現(xiàn)象;白花蛇舌草含藥血清[14]可促進(jìn)SMMC-7721人肝癌細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)向正常肝細(xì)胞分化;黃芩中有效成分黃芩苷[15]體外誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化;甘草能阻止脂肪在肝內(nèi)蓄積,抑制肝炎表面抗原產(chǎn)生并調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫細(xì)胞水平。因此,敷和備化方能夠從多環(huán)節(jié)、分階段、多靶點(diǎn)對(duì)原發(fā)性肝癌的炎性微環(huán)境起到治療效果。
本研究結(jié)果顯示,治療組患者的中醫(yī)癥狀評(píng)分顯著低于對(duì)照組,生活質(zhì)量評(píng)分顯著高于對(duì)照組,提示敷和備化方能夠有效改善原發(fā)性肝癌患者的臨床癥狀,提高生活質(zhì)量;治療組的術(shù)后血清炎性因子IL-6、IL-8與TNF-α顯著低于對(duì)照組,血清炎性因子IL-2顯著高于對(duì)照組,說(shuō)明加用敷和備化方能夠進(jìn)一步改善原發(fā)性肝癌患者腫瘤相關(guān)炎性微環(huán)境,改善血清炎性因子水平;治療組患者術(shù)后的血清AFP水平顯著低于對(duì)照組,說(shuō)明加用敷和備化方能夠有效改善原發(fā)性肝癌患者的預(yù)后水平;治療組TACE術(shù)后不良反應(yīng)出現(xiàn)率明顯低于對(duì)照組,說(shuō)明加用敷和備化方能夠有效提高TACE術(shù)的安全性,降低患者出現(xiàn)TACE術(shù)后不良反應(yīng)情況。治療4周后發(fā)現(xiàn),治療組有效率明顯高于對(duì)照組,提示加用敷和備化方能夠提高原發(fā)性肝癌患者運(yùn)用TACE術(shù)治療的臨床療效。
綜上所述,在常規(guī)行TACE術(shù)治療原發(fā)性肝癌的基礎(chǔ)上加用敷和備化方,可以有效改善患者的中醫(yī)證候、臨床有效率、生活質(zhì)量評(píng)分、血清AFP水平和不良反應(yīng)發(fā)生率,調(diào)節(jié)血清IL-2、IL-6、IL-8與TNF-α是其可能存在的作用途徑之一,值得臨床借鑒使用和深入研究。