時(shí)少磊

（山東省莒南縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 莒南 276600）

1 病毒性疾病

1.1 病毒分離技術(shù) 該技術(shù)能檢測(cè)被檢材料中存活的、能在體外復(fù)制的傳染性病毒。病毒分離技術(shù)特異性強(qiáng)，假陽(yáng)性少，但需時(shí)較長(zhǎng)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求較高。

1.2 病毒檢測(cè)

1.2.1 紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) 有些病毒具有凝集某些動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，利用這種特性設(shè)計(jì)的試驗(yàn)稱血凝試驗(yàn)。

兔出血癥簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確的診斷方法就是進(jìn)行血凝試驗(yàn)，利用兔的肝臟、脾等組織進(jìn)行紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)?zāi)茌^快確診是否感染。

1.2.2 血清學(xué)診斷 是利用陽(yáng)性血清檢測(cè)病毒性感染。常用的有直接凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。

1.2.3 包涵體檢測(cè) 有些病毒感染細(xì)胞后會(huì)產(chǎn)生包涵體，對(duì)此可通過(guò)組織切片或涂片檢查包涵體進(jìn)行診斷。如兔的黏液瘤病可通過(guò)檢查其皮膚組織中的包涵體來(lái)確診。

1.2.4 電鏡技術(shù)某些病毒感染早期可在標(biāo)本中用電鏡檢查到病毒顆粒，并可從形態(tài)學(xué)上鑒別病毒的種類。

1.2.5 病毒核酸檢測(cè) 核酸探針雜交法和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是檢測(cè)病毒核酸的常用方法。

核酸探針雜交法的基本原理是使彼此準(zhǔn)確互補(bǔ)的兩條核苷酸序列在一定條件下牢固地相互結(jié)合形成雙鏈核苷酸，用放射自顯影可證實(shí)靶序列的存在。

PCR法靈敏度高，可以檢出單個(gè)受感染細(xì)胞內(nèi)的病毒核酸甚至單個(gè)分子的DNA，但假陽(yáng)性率相對(duì)較高。

2 細(xì)菌性疾病

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù) 即無(wú)菌取病兔心血、肝臟、淋巴結(jié)、腸內(nèi)容物等接種到合適的培養(yǎng)基上，挑取可疑的單個(gè)菌落純化培養(yǎng)，再通過(guò)生化試驗(yàn)或血凝試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

2.2 組織觸片鏡檢 取病兔心血涂片或肝臟觸片在火焰上固定后，用美藍(lán)染色，再通過(guò)顯微鏡觀察有無(wú)細(xì)菌存在。

2.3 動(dòng)物試驗(yàn) 在進(jìn)行細(xì)菌分離純化試驗(yàn)、生化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行接種試驗(yàn)，以進(jìn)一步明確所分離細(xì)菌的致病力。

3 寄生蟲(chóng)性疾病

3.1 蟲(chóng)體檢查法 對(duì)寄生在家兔體表的寄生蟲(chóng)，如癢螨、疥螨等，可采用肉眼觀察和顯微鏡觀察相結(jié)合的方法進(jìn)行檢查。

可取患兔頭、耳、鼻、足等易感染寄生蟲(chóng)部位的毛發(fā)、皮屑等，或刮取病、健皮膚交界處皮屑，置載玻片上，滴加50%甘油溶液后置顯微鏡下檢查。

3.2 蟲(chóng)卵檢查法

3.2.1 肝球蟲(chóng)檢查 將肝結(jié)節(jié)置于載玻片上，加蓋玻片后置顯微鏡下觀察，如見(jiàn)大量球蟲(chóng)卵囊，則可診斷為感染肝型球蟲(chóng)。

3.2.2 腸內(nèi)容物檢查 取患兔腸內(nèi)容物置于載玻片上涂抹，再滴幾滴蒸餾水后，于低倍顯微鏡下觀察，如見(jiàn)球蟲(chóng)卵囊，則可診斷為感染腸球蟲(chóng)。

3.2.3 糞便檢查 許多寄生蟲(chóng)，特別是寄生于消化道的寄生蟲(chóng)，其蟲(chóng)卵、卵囊或幼蟲(chóng)均可通過(guò)糞便排出體外。通過(guò)檢查兔的糞便，可以確定其是否感染寄生蟲(chóng)及感染強(qiáng)度。

直接涂片法：取50%甘油水溶液1～2滴滴于載玻片上，再取黃豆大小的被檢糞便與之混勻后蓋上蓋玻片鏡檢。直接涂片法簡(jiǎn)便，但檢出率不高。

漂浮集卵法：取5～10 g 被檢糞便置于燒杯中，加入少量飽和鹽水?dāng)嚢杌旌虾?，加入約20 倍的漂浮液，再用金屬篩或紗布濾去糞渣。濾液靜置30～60 min，用直徑0.5～1 cm的金屬圈蘸取表面液膜抖落于載玻片上，并加蓋片后鏡檢。

沉淀集卵法：取1～2 g 被檢糞便置于試管中，加5倍量的水制成懸浮液后，經(jīng)銅篩過(guò)濾到離心管中，再以800 r/min 離心3～5 min 后，棄上清液，將沉渣置載玻片上鏡檢蟲(chóng)卵。

麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法：是常用的蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)方法。取被檢糞樣2 g放入三角燒瓶?jī)?nèi)，加飽和鹽水58 mL和玻璃珠若干充分震蕩制成混懸液。吸取混懸液注入麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)室，置顯微鏡下計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)室（1 cm2）內(nèi)蟲(chóng)卵數(shù)。由于每室混懸液等于0.15 mL，結(jié)果乘以200，即為每克糞便蟲(chóng)卵數(shù)。通常一次計(jì)數(shù)4室，然后按平均值計(jì)算。