陳 昆，邱建利

(1. 河南省駐馬店市中心醫(yī)院普外腔鏡外科，河南 駐馬店 463000；2. 河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院新生兒重癥醫(yī)學科，河南 鄭州 450000)

膽道閉鎖(biliary atresia，BA)的肝纖維化呈進行性發(fā)展的趨勢，最終會發(fā)展為終末期肝硬化。有研究表明，miR-145靶向Smad3可能是調(diào)控BA發(fā)病過程中肝纖維化的重要機制。川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)對刀豆蛋白A、四氯化碳誘導的肝纖維化具有改善作用[1-2]，但TMP在BA治療中的作用未見報道。本研究將以miR-145為切入點、在BA動物模型中觀察TMP對肝纖維化及Smad3信號通路的調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 材料出生3 d的Wistar幼鼠購自上海茂生衍生物科技有限公司；HE染色試劑盒、Masson染色試劑盒購自上海碧云天公司；透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)檢測試劑盒購自上海西唐公司；Smad3一抗購自Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1動物實驗 采用膽總管結(jié)扎的方法建立BA模型，給予TMP、miR-145抑制物慢病毒干預(yù)，連續(xù)28 d。

1.2.2肝臟病理改變的檢測 肝臟組織制作病理切片，進行HE染色和Masson染色并觀察病理改變。

1.2.3血清肝纖維化指標檢測 取血清并采用試劑盒檢測HA、LN含量。

1.2.4肝臟中miR-145表達的檢測 取肝臟組織并提取miR，采用熒光定量PCR法檢測miR-145的表達量。

1.2.5肝臟中蛋白表達的檢測 取肝臟組織并提取蛋白，采用western blot檢測Smad3的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 21.0軟件進行途徑分析，計量資料的多組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 TMP改善BA動物模型肝纖維化與對照組比較，BA組肝臟出現(xiàn)肝纖維化，血清HA、LN的含量增加；TMP干預(yù)后，TMP組肝纖維化改善，血清HA、LN的含量減少。

2.2 TMP對Smad3及miR-145表達的影響與對照組比較，BA組肝臟中Smad3的表達水平明顯增加，miR-145的表達水平明顯減少(P<0.05)；與BA組比較，TMP組肝臟中Smad3的表達水平明顯減少，miR-145的表達水平明顯增加(P<0.05)。

2.3 miR-145在TMP改善BA動物模型肝纖維化中的作用加用miR-145抑制物后，肝纖維化加重，血清HA、LN的含量明顯增加。

2.4 miR-145在TMP調(diào)控BA動物模型Smad3中的作用加用miR-145抑制物后，肝臟中Smad3的表達水平明顯增加(P<0.05)。

3 討論

TMP具有抗纖維化作用，本研究采用TMP治療BA。在BA造模后給予TMP干預(yù)，結(jié)果顯示肝纖維化明顯改善，血清中肝纖維化指標HA、LN含量明顯降低，表明TMP用于BA治療能夠起到抗纖維化作用。

miR-145靶向調(diào)控Smad3在肝纖維化進程中起關(guān)鍵作用[3-4]，本研究發(fā)現(xiàn)TMP用于BA干預(yù)能夠增加miR-145表達、抑制Smad3表達。在TMP干預(yù)的同時加用imR-145抑制物后，Smad3增加且TMP改善肝纖維化的作用削弱。

綜上所述，川芎嗪能夠改善BA動物的肝纖維化，增加miR-145并靶向抑制Smad3是可能的分子機制。