尹國(guó)友，孫 婕，2，*，澹 博，王一萍，吳靜嫻，周文雅

(1.河南城建學(xué)院 生命科學(xué)與工程學(xué)院，河南 平頂山 467036；2.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047)

韭菜籽是韭菜干燥成熟的種子，性溫、味微甜，具有溫補(bǔ)肝腎、壯陽(yáng)固精等功效[1]。韭菜籽中包含核苷酸類(lèi)、生物堿類(lèi)、不飽和脂肪酸、多糖和多肽等多種有效化學(xué)成分[2]。其中，多糖作為主要的有效成分之一，具有改善免疫功能、抗氧化、調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)、抗疲勞等藥理作用[2-3]。目前常用水提醇沉、超聲輔助熱水浸提和雙水相萃取等方法提取多糖。

雙水相萃取技術(shù)作為一種新型的綠色分離、富集技術(shù)，具有簡(jiǎn)單、省時(shí)、高效等特點(diǎn)，已被應(yīng)用于生物活性物質(zhì)的分離純化以及天然產(chǎn)物的提取等領(lǐng)域[4-5]。雙水相體系主要包括聚合物- 聚合物雙水相體系、聚合物- 鹽雙水相體系、離子液體- 鹽雙水相體系和小分子有機(jī)溶劑- 鹽雙水相體系。聚合物- 鹽雙水相體系，如聚乙二醇(PEG)-硫酸銨雙水相體系用鹽代替聚合物- 聚合物雙水相體系中的一種聚合物作為成相物質(zhì)，在降低體系黏度和生產(chǎn)成本的同時(shí)，還具備聚合物生物相容性好的優(yōu)點(diǎn)，可在工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)中進(jìn)行應(yīng)用，但少見(jiàn)在韭籽粕多糖中有應(yīng)用。因此，本研究選擇PEG-硫酸銨雙水相體系提取韭籽粕多糖，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化工藝參數(shù)[6]，并對(duì)提取的多糖進(jìn)行抗氧化評(píng)價(jià)，以期為下一步韭籽粕多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和構(gòu)效研究提供理論數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

韭籽粕(含油率<1%)，本課題組采用超臨界二氧化碳萃取法得到。PEG1000、PEG2000、PEG4000、PEG6000，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；PEG8000，天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)；硫酸銨、苯酚、濃硫酸(純度96%～98%)等，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠(chǎng)。

1.2 儀器與設(shè)備

ME204E型電子天平，梅特勒- 托利多儀器有限公司；101- 1SA型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司；JW- 1042型低速離心機(jī)，安徽嘉文儀器裝備有限公司；KQ5200DE型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；UV- 1100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海美普達(dá)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1多糖含量測(cè)定

采用苯酚- 硫酸法測(cè)定多糖含量，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)[7]。

1.3.2PEG-硫酸銨雙水相相圖繪制

分別精準(zhǔn)稱(chēng)取0.5 g PEG1000、PEG2000、PEG4000和PEG6000于錐形瓶中，加入1 mL雙蒸水，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的PEG溶液，記錄PEG溶液的質(zhì)量。向滴定管中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的硫酸銨溶液緩慢滴定PEG并振蕩，當(dāng)錐形瓶中開(kāi)始出現(xiàn)渾濁時(shí)停止滴定，記錄滴加鹽溶液的質(zhì)量。再向混合物中加水，直至溶液再次變得澄清，記錄滴加的水的質(zhì)量。繼續(xù)滴加硫酸銨溶液，直至再次出現(xiàn)渾濁，重復(fù)上述操作步驟數(shù)次，記錄每次質(zhì)量。硫酸銨和PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算見(jiàn)式(1)、式(2)；以渾濁時(shí)硫酸銨在系統(tǒng)中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)，PEG的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為縱坐標(biāo)繪圖，即可得到雙節(jié)線(xiàn)[8]。

w(PEG)=m1/(m1+m2+m3)×100%；

(1)

w(硫酸銨)=m2/(m1+m2+m3)×100%。

(2)

式(1)、式(2)中，m1，PEG在系統(tǒng)中的總質(zhì)量，g；m2，鹽溶液在系統(tǒng)中的總質(zhì)量，g；m3，水在系統(tǒng)中的總量，g。

1.3.3韭籽粕多糖提取

稱(chēng)取10 g韭籽粕加入150 mL去離子水，設(shè)定溫度60 ℃、功率80 W，提取2 h，冷卻后分裝于離心管中，4 000 r/min離心20 min，取上清液，置于冰箱中保存。從燒杯中準(zhǔn)確移取1.00 mL溶液稀釋25倍，取1 mL稀釋液于試管中，然后依次在試管中加入1.0 mL蒸餾水、1.00 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%苯酚溶液，搖勻后迅速加入5.00 mL濃硫酸，再次搖勻待其冷卻至室溫，以蒸餾水為空白組，測(cè)定吸光度。

1.3.4雙水相萃取

準(zhǔn)確量取多糖溶液20 mL，稱(chēng)取一定質(zhì)量的PEG，溶解后稱(chēng)取不同質(zhì)量的硫酸銨，充分混合，在室溫條件下靜置30 min。上、下相溶液各取1 mL，加蒸餾水稀釋至10 mL，再取1 mL稀釋液于試管中，依次加入1 mL蒸餾水、1.0 mL 5%苯酚溶液、5.0 mL濃硫酸，搖勻，室溫靜置冷卻。以蒸餾水為空白對(duì)照，測(cè)定490 nm處吸光度，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算多糖在上、下相中的含量。根據(jù)式(3)至式(5)計(jì)算雙水相體系的分配系數(shù)和多糖的萃取率。

K=ρa(bǔ)/ρb；

(3)

R=Va/Vb；

(4)

Y=1/(1+RK) 。

(5)

式(3)～式(5)中，K，多糖在PEG-硫酸銨兩相中的分配系數(shù)；R，上下相體積之比；Y，多糖在下相中的萃取率，%；ρa(bǔ)，上相中的多糖質(zhì)量濃度，mg/mL；ρb，下相中的多糖質(zhì)量濃度，mg/mL；Va，上相體積，mL；Vb，下相體積，mL。

1.3.5單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取PEG相對(duì)分子質(zhì)量(1 000、2 000、4 000、6 000、8 000)、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)(10%、15%、20%、25%、30%)、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)(15%、20%、25%、30%、35%)和萃取時(shí)間(20、30、40、50、60 min)4個(gè)因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考察單一因素改變對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響，平行重復(fù)5次，結(jié)果取平均值。

1.3.6響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

依據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行結(jié)果分析。選定PEG的相對(duì)分子質(zhì)量、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為響應(yīng)面的3個(gè)因素變量[9]，以韭籽粕多糖萃取率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行回歸分析和優(yōu)化，各因素與水平見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面分析法的因素與水平Tab.1 Factors and levels of response surface methodology

1.3.7韭籽粕多糖抗氧化活性測(cè)定

1.3.7.1 DPPH·清除能力測(cè)定

參照Sellal等[10]方法并稍有改動(dòng)。使用無(wú)水乙醇配置質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL的樣品溶液，并配置相同質(zhì)量濃度的維生素C溶液為對(duì)照。取1.0 mL濃度為0.2 mmoL/L的DPPH溶液和1.0 mL樣品溶液，混勻后于室溫暗反應(yīng)30 min，無(wú)水乙醇為參比，測(cè)定517 nm處的吸光度A；測(cè)定1.0 mL無(wú)水乙醇與1.0 mL樣品溶液的吸光度A0及1.0 mL DPPH溶液與1.0 mL無(wú)水乙醇的吸光度A1。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，按式(6)計(jì)算DPPH·清除率。

(6)

1.3.7.2 ·OH清除能力測(cè)定

參考孫婕等[11]方法，反應(yīng)體系中加9 mmol/L FeSO42.0 mL、9 mmol/L水楊酸- 乙醇2.0 mL，不同質(zhì)量濃度樣品溶液各3.0 mL，然后加8.8 mmol/L H2O22.0 mL，37 ℃反應(yīng)1 h，以蒸餾水為空白對(duì)照，在510 nm測(cè)定各質(zhì)量濃度樣品的吸光度?！H清除率計(jì)算見(jiàn)式(7)。

(7)

式(6)中，A0為空白對(duì)照液的吸光度，A1為加入待測(cè)樣品后的吸光度，A2為不加顯色劑H2O2的待測(cè)樣品溶液吸光度。

1.3.7.3 總還原能力測(cè)定

參照李珊等[12]的方法，使用無(wú)水乙醇配制質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL的多糖溶液，并配制同樣質(zhì)量濃度的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(butylated hydroxytoluene，BHT)溶液作為對(duì)照。在2.0 mL pH值6.6、濃度為0.2 mol/L的磷酸鹽緩沖溶液中分別加入樣品溶液2.0 mL和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鐵氰化鉀溶液2.0 mL，混勻后在50 ℃恒溫20 min，冷卻后加入2.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸溶液，然后以3 000 r/min離心10 min，取上清液2.0 mL，加2.0 mL雙蒸水、0.4 mL體積分?jǐn)?shù)0.1% FeCl3溶液，混勻后靜置10 min，在700 nm處測(cè)定吸光度，吸光度與還原能力之間呈正相關(guān)[13]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及繪圖均采用Excel 2007軟件，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.1 Standard curve of glucose

通過(guò)苯酚- 硫酸法顯色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，確定葡萄糖質(zhì)量濃度和吸光度之間的線(xiàn)性關(guān)系，y=8.594 3x+0.006 9，R2=0.990 8。

2.2 雙水相相圖分析

不同分子質(zhì)量PEG相圖見(jiàn)圖2。由圖2可知，當(dāng)成相物質(zhì)的濃度在雙節(jié)線(xiàn)以下時(shí)，不會(huì)出現(xiàn)上下相分離的現(xiàn)象，所以要選擇系線(xiàn)上方的點(diǎn)作為萃取體系。當(dāng)(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%時(shí)，PEG1000的質(zhì)量分?jǐn)?shù)需達(dá)到61.57%才能形成雙相，PEG2000的質(zhì)量分?jǐn)?shù)需達(dá)到45.89%，PEG4000的質(zhì)量分?jǐn)?shù)需達(dá)到29.46%，PEG6000的質(zhì)量分?jǐn)?shù)則需達(dá)到15.31%，這與王飛等研究一致[14]。由此可知，隨著聚乙二醇相對(duì)分子質(zhì)量的增大，相分離的動(dòng)力增強(qiáng)，形成雙水相體系所需的成相物質(zhì)濃度減小[15]。PEG相對(duì)分子質(zhì)量增大，其疏水性增強(qiáng)，形成雙水相的臨界濃度降低[16]。當(dāng)PEG相對(duì)分子質(zhì)量增大時(shí)，系統(tǒng)的黏度也增大，不易發(fā)生滲透作用。造成分子間碰撞次數(shù)的減少，相相分離的阻力增大，分相時(shí)間延長(zhǎng)。

圖2 不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG相圖Fig.2 Phase diagram of PEG with different relative molecular weights

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)分析

2.3.1PEG相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響

不同相對(duì)分子質(zhì)量PEG對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響如圖3。PEG-硫酸銨萃取系統(tǒng)中，硫酸銨一般在下相，PEG主要在上相，下相主要存在靜電作用，上相主要表現(xiàn)為疏水作用，韭籽粕多糖主要分布于下相。在硫酸銨和PEG的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定的情況下，當(dāng)PEG相對(duì)分子質(zhì)量增大時(shí)，上相體積逐漸變小，下相體積逐漸變大，總體變化不大，這和徐海軍等[17]的研究結(jié)果一致。由圖3可知，多糖的分配系數(shù)和萃取率隨著PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增大變化較明顯，分配系數(shù)呈現(xiàn)先減小后增大的趨勢(shì)；萃取率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在PEG相對(duì)分子質(zhì)量為6 000時(shí)最大，因?yàn)镻EG相對(duì)分子質(zhì)量越大，黏度增加，成相物質(zhì)分子的空間阻礙作用增大[18]。因此，PEG相對(duì)分子質(zhì)量為6 000時(shí)最有利于多糖在下相的富集，此時(shí)萃取率為84.37%。

圖3 多糖萃取率與PEG相對(duì)分子質(zhì)量的關(guān)系Fig.3 Relationship between polysaccharide extraction rate and relative molecular weight of PEG

2.3.2PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響

PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響見(jiàn)圖4。當(dāng)硫酸銨添加量一定時(shí)，上下相比隨著PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變大而增大，分配系數(shù)逐漸減小，多糖萃取率先增大后減小，這與徐海軍等[17]的研究結(jié)果一致。由圖4可知，在PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.00%時(shí)，多糖萃取率最大為84.34%。繼續(xù)增加PEG含量會(huì)導(dǎo)致溶液黏度增大，影響兩相的相比且給工業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)不利影響；由于相比的增加，韭籽粕多糖萃取率開(kāi)始降低，所以較佳的PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.00%。

圖4 多糖萃取率與PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)的關(guān)系Fig.4 Relationship between polysaccharide extraction rate and mass fraction of PEG

2.3.3硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響

硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響如圖5。當(dāng)PEG的添加量一定時(shí)，隨著下相硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，下相的吸水能力增強(qiáng)，下相體積呈增大趨勢(shì)，所以相比逐漸減小。體系中多糖的分配系數(shù)先降后增。由圖5可知，多糖萃取率先增大后減小，當(dāng)硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到20.00%時(shí)，多糖萃取率達(dá)到最大值80.60%。吳學(xué)昊等[19]發(fā)現(xiàn)當(dāng)雙水相系統(tǒng)中硫酸銨的含量過(guò)大時(shí)，會(huì)造成硫酸銨飽和析出，不易溶解，影響PEG的回收。

圖5 多糖萃取率與硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的關(guān)系Fig.5 Relationship between polysaccharide extraction rate and mass fraction of ammonium sulfate

2.3.4萃取時(shí)間對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響

萃取時(shí)間對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響如圖6。當(dāng)硫酸銨和PEG的質(zhì)量分?jǐn)?shù)都固定時(shí)，隨著時(shí)間的增加，上下相比逐漸減小但總體變化不明顯。由圖6可知，多糖萃取率在20～30 min的增加并不明顯，20 min時(shí)間較短，多糖不能完全分配好。但隨后在30～60 min內(nèi)，多糖萃取率卻下降明顯。當(dāng)時(shí)間為30 min時(shí)，多糖的萃取率相對(duì)較大，可達(dá)到84.03%。在工業(yè)上應(yīng)用時(shí)需要減少時(shí)間和財(cái)力的浪費(fèi)，因此，萃取時(shí)間不作為響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)的考察因素。

圖6 多糖萃取率與萃取時(shí)間的關(guān)系Fig.6 Relationship between polysaccharide extraction rate and extraction time

2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)分析

2.4.1響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，設(shè)定響應(yīng)面的3個(gè)因素變量為PEG相對(duì)分子質(zhì)量、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)，韭籽粕多糖萃取率為響應(yīng)值，利用軟件進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)，優(yōu)化提取工藝，以獲取最佳的提取率。響應(yīng)面設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2。

表2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)及結(jié)果Tab.2 Design and results of response surface

2.4.2回歸模型分析

對(duì)響應(yīng)面的結(jié)果進(jìn)行多元回歸擬合，得到雙水相體系下相的韭籽粕多糖萃取率與PEG相對(duì)分子質(zhì)量、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的多元回歸方程為：

Y=5.90-0.81A-0.44B+0.54C-0.58AB-
1.16AC+0.13BC-5.18A2-1.91B2-3.40C2

多元二次模型的方差分析見(jiàn)表3。

表3 響應(yīng)面二次模型方差分析Tab.3 Variance analysis of response surface quadratic model

根據(jù)回歸方程的方差分析可知，該模型的一次項(xiàng)A的P值為0.006 1小于0.01，B的P值為0.073 3大于0.05，C的P值為0.035 0小于0.05，表明PEG相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)韭籽粕多糖萃取率影響極顯著，PEG的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率影響不顯著，硫酸銨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)韭籽粕多糖萃取率影響顯著，影響因素主次順序依次為PEG相對(duì)分子質(zhì)量、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)。交互項(xiàng)AB、BC的P值都大于0.05，對(duì)多糖的萃取率影響不顯著；AC的P值為0.005 6小于0.01，對(duì)多糖萃取率的影響極顯著。二次項(xiàng)A2、B2、C2的P值均小于0.01，表明三者對(duì)韭籽粕多糖萃取率的影響均極顯著。研究表明，韭籽粕多糖萃取率受多種因素影響，且不是簡(jiǎn)單的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4.3交互作用分析

各因素對(duì)多糖萃取率的交互作用見(jiàn)圖7。根據(jù)等高線(xiàn)及響應(yīng)面分析可以直觀地反映出各因素對(duì)響應(yīng)值的影響。觀察圖7等高線(xiàn)的形狀和3D圖的顏色、傾斜度，可知AB、BC不顯著，AC極顯著。

圖7 各因素對(duì)韭籽粕多糖萃取率的交互作用Fig.7 Interaction of factors on extraction rate of polysaccharides from leek seed meal

2.4.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

根據(jù)Design Expert軟件分析3個(gè)因素較優(yōu)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)為PEG相對(duì)分子質(zhì)量6 000，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.46%，PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)14.50%，在此條件下多糖萃取率的預(yù)測(cè)值為85.98%。為驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，優(yōu)化條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的平均萃取率為85.39%，與理論值相差0.59%(相對(duì)誤差<5.00%)，說(shuō)明該方程與實(shí)際情況擬合很好，通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化得到的工藝條件可靠。

2.5 韭籽粕多糖抗氧化活性分析

2.5.1DPPH·清除能力分析

韭籽粕多糖對(duì)DPPH·的清除能力用清除率表示，清除率越高則韭籽粕多糖對(duì)自由基的清除能力越好，見(jiàn)圖8。由圖8可知，維生素C、BHT和韭籽粕多糖對(duì)DPPH·均有清除能力，且均隨樣品質(zhì)量濃度的增大而略微增大。當(dāng)韭籽粕多糖質(zhì)量濃度達(dá)到3.00 mg/mL時(shí)，DPPH·清除率最大，達(dá)53.22%。

圖8 韭籽粕多糖對(duì)DPPH·的清除能力Fig.8 Scavenging capacity of polysaccharide from leek seed meal to DPPH free radicals

2.5.2·OH清除能力分析

圖9 韭籽粕多糖對(duì)·OH的清除能力Fig.9 Scavenging capacity of polysaccharide from leek seed meal to hydroxyl radical

2.5.3總還原能力分析

抗氧化劑能使鐵氰化鉀的三價(jià)鐵還原成二價(jià)鐵(亞鐵氰化鉀)，二價(jià)鐵(亞鐵氰化鉀)進(jìn)一步和三氯化鐵反應(yīng)生成在700 nm處有最大吸光度的普魯士藍(lán)(Fe4[Fe(CN)6]3)，因此測(cè)定700 nm處的吸收峰可以間接反映抗氧化劑的還原能力大小，吸光度越大，還原能力越強(qiáng)。韭籽粕多糖的總還原能力見(jiàn)圖10。隨著維生素C、BHT和多糖質(zhì)量濃度的增加，三者在700 nm處的吸光度也在增加，即三者的總還原能力在增加。說(shuō)明維生素C、BHT和韭籽粕多糖均能抑制自由基轉(zhuǎn)移電子，從而終止自由基鏈反應(yīng)。而維生素C、BHT與多糖相比，維生素C和BHT表現(xiàn)出較強(qiáng)的還原能力。

圖10 韭籽粕多糖的總還原能力Fig.10 Total reducing capacity of polysaccharide from leek seed meal

3 結(jié) 論

雙水相萃取提取韭籽粕多糖的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PEG相對(duì)分子質(zhì)量6 000、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)15.00%、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.00%，分別有較高的多糖萃取率。進(jìn)而運(yùn)用Design Expert 8.06軟件進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)分析。由多元二次回歸方程相關(guān)系數(shù)的顯著性大小可知，各因素對(duì)萃取率的影響由大到小依次為PEG相對(duì)分子質(zhì)量、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)。根據(jù)軟件得到的優(yōu)化條件為PEG相對(duì)分子質(zhì)量6000、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)14.50%，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)20.46%，在此條件下韭籽粕多糖萃取率為85.39%。

韭籽粕多糖對(duì)DPPH·和·OH均有一定的清除效果；總還原力的測(cè)定中，隨著多糖質(zhì)量濃度的增大，抗氧化能力也在增加，可初步判斷采用雙水相萃取得到的韭籽粕多糖具有良好的抗氧化活性。