段彥麗，李志強(qiáng)，張翌楠 ，韓振芹

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京 102442）

在十字花科蔬菜生產(chǎn)中，常發(fā)生菜粉蝶(Pieris rapaeLinne)的危害。 菜粉蝶1年發(fā)生多代，南方一般1年發(fā)生8代，華北發(fā)生3.6～7代[1]。菜粉蝶，屬鱗翅目，粉蝶科，其幼蟲(chóng)俗稱(chēng)菜青蟲(chóng)，主要取食蔬菜葉片造成孔洞或缺刻，嚴(yán)重時(shí)吃光葉片僅留葉脈，甚至造成幼苗死亡，導(dǎo)致蔬菜產(chǎn)量下降；菜青蟲(chóng)排出的黑色糞便，污染葉片，還引發(fā)蔬菜軟腐病，降低蔬菜品質(zhì)。目前，常用化學(xué)農(nóng)藥防治該害蟲(chóng)，會(huì)造成害蟲(chóng)抗藥性、次要害蟲(chóng)再猖獗、農(nóng)藥殘留的“3R”問(wèn)題，不僅造成環(huán)境污染，還影響食品安全，而用生物制劑防治該害蟲(chóng)較少。因此，蔬菜害蟲(chóng)防治迫切需要利用與環(huán)境友好的生物防治手段。近年來(lái)，在北京郊區(qū)隨著設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展和蔬菜種植規(guī)模的不斷擴(kuò)大，為菜粉蝶的發(fā)生和危害創(chuàng)造了有利的條件。但是，農(nóng)戶(hù)常用化學(xué)農(nóng)藥來(lái)控制該害蟲(chóng)，會(huì)帶來(lái)蔬菜農(nóng)藥的殘留、害蟲(chóng)抗藥性、環(huán)境污染等副作用[2]。據(jù)報(bào)道，應(yīng)用蘇云金桿菌、昆蟲(chóng)病毒等生物制劑防治蔬菜害蟲(chóng)取得了較好的防治效果。尤其是利用菜粉蝶顆粒體病毒(PrGV)與蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)共同防治蔬菜害蟲(chóng)，具有獨(dú)特的防治效果。利用PrGV防治害蟲(chóng)具有特異性強(qiáng)、在害蟲(chóng)種群中形成流行病，Bt防治害蟲(chóng)具有速效性等特點(diǎn)，將二者復(fù)配進(jìn)行防治，結(jié)合二者的優(yōu)點(diǎn)，可以提高防治的速效性和持續(xù)性[3-4]。但上述報(bào)道室內(nèi)試驗(yàn)較多，田間應(yīng)用效果較少。本文應(yīng)用PrGV、Bt進(jìn)行復(fù)配，在室內(nèi)和田間進(jìn)行了藥效防治試驗(yàn)，為綠色和有機(jī)蔬菜生產(chǎn)中菜粉蝶防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試材料

試蟲(chóng)：菜粉蝶成蟲(chóng)采自未噴灑任何農(nóng)藥的白菜地，在室內(nèi)養(yǎng)蟲(chóng)網(wǎng)放置洗凈的新鮮白菜葉待其產(chǎn)卵，待幼蟲(chóng)孵化，挑選齡期相同的幼蟲(chóng)作為試蟲(chóng)。

1.1.2 供試藥劑

(1) 8 000 IU/mg 蘇云金桿菌(Bt) 可濕性粉劑(湖北康欣藥業(yè)有限公司)，單劑噴灑濃度為200倍稀釋液。

(2)菜粉蝶顆粒體病毒(PrGV)懸浮液 107PIB/mL(武漢楚強(qiáng)生物科技有限公司)。

(3)復(fù)合劑B-GV(簡(jiǎn)稱(chēng)復(fù)合劑)：北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院生物制劑室配制，有效成分(PrGV+Bt)含量為 104PIB/ul + 800 IU/ul。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)方法參照段彥麗所做試驗(yàn)采用的方法[5]。

1.2.1 蔬菜害蟲(chóng)種類(lèi)和危害情況調(diào)查

在大興、房山地區(qū)的蔬菜基地，調(diào)查白菜、菜花、菜心、芥藍(lán)生長(zhǎng)期害蟲(chóng)發(fā)生情況。每個(gè)基地選定地塊，采用5點(diǎn)調(diào)查法，每點(diǎn)5株，每塊地共調(diào)查25株，每天上午9:00定點(diǎn)調(diào)查，記錄害蟲(chóng)種類(lèi)和數(shù)量。

1.2.2 菜粉蝶發(fā)生規(guī)律和防治時(shí)期觀察

采用田間調(diào)查、室內(nèi)觀察相結(jié)合的方法。

田間調(diào)查：在調(diào)查點(diǎn)隨機(jī)5點(diǎn)取樣，每個(gè)調(diào)查點(diǎn)選取30株白菜掛牌，調(diào)查卵量和幼蟲(chóng)發(fā)生情況，每隔1～3 d調(diào)查數(shù)量并記錄，特別注意成蟲(chóng)的時(shí)間以及卵孵化高峰時(shí)間。

室內(nèi)觀察：田間采集幼蟲(chóng)，在溫度24℃±1℃、RH 30%～40%、光︰暗為10 h∶14 h的光照培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)，觀察其發(fā)育歷期。

成蟲(chóng)期觀察蛹羽化后，于室內(nèi)室溫下，養(yǎng)蟲(chóng)網(wǎng)飼養(yǎng)，配制1%的蔗糖水供成蟲(chóng)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，每天觀察成蟲(chóng)活動(dòng)，記錄產(chǎn)卵量、壽命等。

幼蟲(chóng)期觀察卵孵化后，每天觀察幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)情況，記錄化蛹時(shí)間。

1.2.3 復(fù)合劑對(duì)不同齡期菜青蟲(chóng)室內(nèi)試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：藥劑為復(fù)合劑300倍稀釋?zhuān)溆行С煞郑≒rGV+Bt）含量為：33.3 PIB/ul + 2.67 IU/ul；對(duì)照藥劑Bt濃度為2.67 IU/ul 。試蟲(chóng)為2～4齡幼蟲(chóng)。

試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，每個(gè)蟲(chóng)齡為1個(gè)處理。飼毒方法為浸葉法。將白菜葉片浸入配好的藥液中30 s后取出，晾干放在培養(yǎng)皿中飼喂試蟲(chóng)，每個(gè)處理放30頭，每皿放試蟲(chóng)10頭，重復(fù)3次，室溫 （24℃±1℃），分別于用藥1 d、2 d、3 d、4 d后觀察記錄存活狀態(tài)；以藥劑Bt飼毒4齡幼蟲(chóng)，浸清水葉片飼喂4齡幼蟲(chóng)為對(duì)照，計(jì)算校正蟲(chóng)口減退率。

1.2.4 不同濃度復(fù)合劑對(duì)菜粉蝶幼蟲(chóng)田間試驗(yàn)

試驗(yàn)區(qū)在北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院科技園 。

共設(shè)4個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。復(fù)合劑 A、B、C處理，其噴灑劑量分別為450 、900 、1 350 ml·hm-2；D 處理為 Bt（8 000 IU/mg）可濕性粉劑，噴灑濃度為20 000 IU/ml；以噴灑Bt為對(duì)照。

試驗(yàn)田塊為露地，多年種植白菜，面積為300 m2。田間設(shè)4個(gè)隨機(jī)排列試驗(yàn)小區(qū)，試驗(yàn)小區(qū)為30 m2，每小區(qū)為1個(gè)濃度處理，小區(qū)間相距0.5 m，每小區(qū)在白菜5～6葉期開(kāi)始試驗(yàn)，用殺蟲(chóng)網(wǎng)隔離。

菜青蟲(chóng)防治試驗(yàn)：用各處理藥劑噴灑白菜，藥劑噴灑白菜正反面。然后將2～3齡菜青蟲(chóng)6頭，接到標(biāo)記好的白菜葉片上，如此接種10株。于施藥后1 d、3 d、5 d、7 d觀察記錄菜青蟲(chóng)存活狀況，計(jì)算校正蟲(chóng)口減退率。

1.2.5 復(fù)合劑不同時(shí)間噴施對(duì)菜粉蝶的防治試驗(yàn)

分別選擇上午9:00和下午4:00在田間噴藥，復(fù)合劑300倍液，每個(gè)時(shí)間設(shè)1個(gè)處理，每個(gè)處理放60頭3齡菜粉蝶。每個(gè)處理分3個(gè)小區(qū)，每小區(qū)隨機(jī)取樣選取10棵白菜，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行，寬度為0.5 m。用工農(nóng)-16型噴霧器進(jìn)行全株噴霧，尤其注意葉背面的噴施，以噴濕葉片為度。分別于噴藥后1 d、5 d、7 d、12 d觀察記錄死蟲(chóng)數(shù)量。

1.3 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法

用spss統(tǒng)計(jì)進(jìn)行方差分析。計(jì)算蟲(chóng)口減退率和防效，計(jì)算公式如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)生規(guī)律和防治時(shí)期

2.1.1 北京地區(qū)蔬菜害蟲(chóng)種類(lèi)和危害情況調(diào)查調(diào)查情況具體見(jiàn)表1。

表1 北京郊區(qū)蔬菜常見(jiàn)害蟲(chóng)對(duì)寄主的危害

從表1可以看出，大興和房山地區(qū)害蟲(chóng)發(fā)生種類(lèi)和危害情況不同。在十字花科蔬菜上發(fā)生的常見(jiàn)害蟲(chóng)有菜粉蝶Pieris rapaeL.、小菜蛾P(guān)lutella xylostellaL.、桃蚜Myzus persicae(Sulzer)、甜菜夜蛾Spodoptera exigua( Hübner)、溫室白粉虱Trialeurodes vaporariorum(Westwood)、美洲斑潛蠅Liriomyza sativaeBlanchard、黃曲條跳甲Phyllotreta striolataFabricius等7種。菜粉蝶主要發(fā)生在白菜和芥藍(lán)上，百株蟲(chóng)數(shù)分別為30頭和10頭。發(fā)生嚴(yán)重的主要為小型的刺吸性口器害蟲(chóng)，如桃蚜、白粉虱、斑潛蠅等。食葉類(lèi)害蟲(chóng)不僅造成產(chǎn)量損失，還會(huì)影響蔬菜的品質(zhì)。

2.1.2 發(fā)生規(guī)律及防治時(shí)間

通過(guò)調(diào)查室內(nèi)飼養(yǎng)菜青蟲(chóng)發(fā)現(xiàn)，菜粉蝶在北京地區(qū)每年春秋兩季發(fā)生嚴(yán)重。菜粉蝶在北京地區(qū)1年發(fā)生4～5代，發(fā)生1代約39 d，其中，卵期約7 d，幼蟲(chóng)期約5齡、約15 d，蛹期約10 d，成蟲(chóng)期7 d。在菜粉蝶發(fā)生卵盛期開(kāi)始，應(yīng)用微生物制劑防治低齡幼蟲(chóng)危害。

2.2 復(fù)合劑對(duì)不同齡期菜青蟲(chóng)防治試驗(yàn)

防治效果具體見(jiàn)表2。

表2 復(fù)合劑對(duì)不同齡期菜粉蝶的室內(nèi)防治效果

從表2可知，復(fù)合劑對(duì)2、3齡菜粉蝶用藥4 d后的防效均達(dá)100.0% ，顯著高于Bt單劑處理；復(fù)合劑對(duì)4齡幼蟲(chóng)的防效，高于單劑Bt處理；復(fù)合劑對(duì)不同齡期幼蟲(chóng)防效存在顯著差異。

2.3 不同濃度復(fù)合劑對(duì)菜粉蝶幼蟲(chóng)田間試驗(yàn)

防治效果具體見(jiàn)表3。

表3 復(fù)合劑對(duì)菜粉蝶的田間防治效果

表3統(tǒng)計(jì)分析表明，用藥后3 d、5 d、7 d校正蟲(chóng)口減退率，隨著復(fù)合劑濃度增加而增大；兩個(gè)較高濃度處理，用藥3 d后校正蟲(chóng)口減退率分別為60.0%、80.0%，用藥7 d后分別為 75.0%、95.0%，顯著高于復(fù)合劑最低濃度處理30.0%、53.3%；用藥3 d、5 d、7 d后，Bt處理校正蟲(chóng)口減退率分別為71.7 %、80.0%、83.3%，均低于復(fù)合劑最高濃度處理，但二者沒(méi)有顯著差異，表現(xiàn)出復(fù)合劑高濃度處理對(duì)菜粉蝶特效性和持續(xù)性?xún)?yōu)于單劑Bt處理；用藥7 d后2個(gè)復(fù)合劑高濃度處理與Bt處理的校正蟲(chóng)口減退率均在75.0%以上。

2.4 復(fù)合劑不同時(shí)間噴施對(duì)菜粉蝶的防治效果

防治效果具體見(jiàn)表4。

從表4可以看出，復(fù)合劑在下午4:00噴藥7 d、12 d后的蟲(chóng)口減退率（79.3%、65.7% ），顯著高于上午9:00噴藥后的蟲(chóng)口減退率（52.3%、33% ），表明下午4:00噴藥對(duì)菜粉蝶的防效具有顯著的持效性。

3 結(jié)論與討論

據(jù)報(bào)道，昆蟲(chóng)病原微生物混合應(yīng)用對(duì)病原的毒力影響比較復(fù)雜，有些病原微生物對(duì)Bt有增效作用；不同病原微生物對(duì)不同昆蟲(chóng)NPV的毒力的作用不同[6-11]。Bell等[12]對(duì)Bt- NPV的混合感染做了詳細(xì)的研究，不同劑量病原同時(shí)感染幼蟲(chóng)，對(duì)幼蟲(chóng)毒力表現(xiàn)出增效和拮抗；當(dāng)Bt濃度為1×103～5×103IU/ml，NPV 濃度為 104～105PIB/ml時(shí)，主要表現(xiàn)為相加作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，Bt處理的濃度為20 IU/ml時(shí)，校正蟲(chóng)口減退率分別為71.7%、80.0%、83.3%，均低于復(fù)合劑1 350 ml/hm2高濃度處理，但二者沒(méi)有顯著差異，初步說(shuō)明顆粒體病毒對(duì)Bt有相加的作用，這與上述的研究結(jié)果趨于一致，但這一結(jié)論有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

不同組織特異性的病毒不會(huì)入侵同一個(gè)細(xì)胞并在其中增殖。不同昆蟲(chóng)病原微生物的作用機(jī)理不同，Bt主要通過(guò)δ-內(nèi)毒素殺蟲(chóng)，作用于昆蟲(chóng)的中腸基底膜細(xì)胞，昆蟲(chóng)病毒在昆蟲(chóng)的細(xì)胞核中增殖。復(fù)配劑中病原的濃度不同，其對(duì)病原的毒力也不同[13-17]。本研究的復(fù)配劑中，復(fù)合劑（PrGV+Bt）對(duì)菜粉蝶的防治試驗(yàn)，室內(nèi)的防治效果優(yōu)于田間，高濃度復(fù)合劑表現(xiàn)出較高的防效，有關(guān)這樣的報(bào)道較少，其機(jī)理有待于進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

微生物制劑對(duì)昆蟲(chóng)的毒力，隨著蟲(chóng)齡的增大防效減弱。在田間試驗(yàn)要掌握在昆蟲(chóng)3齡前防治，利用復(fù)合劑在蔬菜生產(chǎn)中預(yù)防食葉害蟲(chóng)，保障有機(jī)蔬菜的生產(chǎn)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。