王杰，劉緒平，段和祥，鄢雷娜，肖欽欽，陳希

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

藥物中殘留的有機溶劑不僅沒有療效，還可能增加藥物的毒副作用，影響藥物的穩(wěn)定性，為了保護患者免受藥物中殘留有機溶劑的傷害［1］，人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會（ICH）規(guī)定，必須對藥物中的殘留溶劑進行檢測，以保障用藥安全［2］。左氧氟沙星是新一代喹諾酮類合成抗菌藥，適用于敏感菌所致的呼吸、消化、泌尿、生殖系統(tǒng)、皮膚軟組織及外科、耳鼻喉科、眼科、口腔科的各種急、慢性細菌感染［3］。根據(jù)原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的工藝資料，獲知其工藝過程中使用甲醇、乙醇、三氯甲烷，參考《中國藥典》2015 年版四部通則0861“殘留溶劑測定法”［4］，采用氣相色譜頂空進樣程序升溫法同時測定樣品中三種有機溶劑的殘留量，并進行了方法學(xué)考察［5］。

1 儀器與試藥

Agilent 7890B 型氣相色譜儀［氫火焰離子化（FID）檢測器，7697A 頂空進樣器］；MS205DU 型電子天平（美國Mettler 公司）；甲醇、乙醇、三氯甲烷、二甲基亞砜均為色譜純（美國 Sigma-Aldrich 公司）。

乳酸左氧氟沙星原料（廠家A 批號：018C225- 190901；廠家B 批號：DK24-1806171-Ⅵ；廠家C批號：2018C225-190901）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-WAX（30 m×0.53 mm×1.0 μm）石英毛細管柱；柱溫：初始溫度60 ℃，保持4 min，以20 ℃/min 升溫至200 ℃，保持2 min；進樣口溫度：230 ℃；FID 檢測器溫度：240 ℃；載氣：氮氣（N2）；恒流流速：3.0 mL/min；分流比3∶1；頂空瓶平衡溫度85 ℃，平衡時間30 min，進樣量1 mL。

2.2 溶液配制

2.2.1 空白溶液精密量取0.1%二甲基亞砜5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，作為空白溶液。

2.2.2 對照品溶液精密稱取三氯甲烷61.85 mg，置10 mL 量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為三氯甲烷儲備液；精密稱取甲醇306.1 mg、乙醇500.4 mg，置10 mL 量瓶中，精密加入三氯甲烷儲備液1 mL，加水定容至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液；精密量取混合對照品儲備液1 mL，置100 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液精密稱取乳酸左氧氟沙星原料藥（批號：018C225-190901）約0.5 g，置20 mL 頂空瓶中，精密加0.1%二甲基亞砜5 mL，搖勻，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖。結(jié)果空白溶劑無干擾，供試品中無雜峰影響測定：甲醇、乙醇、三氯甲烷在該色譜條件下分離度好，分離效能較高。詳見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性圖譜

2.4 線性試驗

精密量取“2.2.2”項下混合對照品儲備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，按“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)進行線性回歸。結(jié)果表明，在所示各線性范圍內(nèi)，甲醇、乙醇和三氯甲烷的線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 線性回歸結(jié)果表

2.5 檢測限與定量限

取“2.2.2”項下對照品溶液，以水為溶劑逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖，以信噪比3∶1 確定檢測限，以信噪比10∶1 確定定量限。得甲醇、乙醇和三氯甲烷的定量限分別為1.43、0.62和0.077 μg/mL，檢測限分別為0.43、0.19 和0.023 μg/mL。均遠小于ICH Q3C 最大限度的30%。

2.6 精密度試驗

精密量取“2.2.2”項下對照品溶液，共6 份，分別置20 mL 頂空瓶中，密封，按“2.1”項下色譜條件，重復(fù)進樣6 次，記錄色譜圖。計算測得峰面積，考察精密度。結(jié)果甲醇、乙醇、三氯甲烷的RSD 分別為2.7%、1.6%、2.4%。

2.7 重復(fù)性試驗

精密稱取乳酸左氧氟沙星約0.5 g，共6 份，分別置20 mL 頂空瓶中中，精密加0.1%二甲基亞砜5 mL，搖勻，密封，按“2.1”項下色譜條件，記色譜圖，甲醇、乙醇、三氯甲烷均未檢出。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗

取混合對照儲備液0.8、1.0、1.2 mL，分別置100 mL 量瓶中，制成相當(dāng)于對照品溶液濃度的80%、100%、120% 的溶液。精密稱取乳酸左氧氟沙星約0.5 g，共9 份，置20 mL 頂空瓶中，分別精密加入80%、100%、120% 的溶液5 mL，每個濃度平行制備3 份，按“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計算回收率，平均回收率分別為100.7%、99.2%、100.6%，RSD 分別為0.5%、0.4%、0.9%，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.9 樣品測定

分別精密稱取不同廠家的乳酸左氧氟沙星約0.5 g，按“2.2.3”制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖，測定有機溶劑殘留量，按外標(biāo)法以峰面積計算，三個廠家乳酸左氧氟沙星中甲醇、乙醇、三氯甲烷均未檢出。

3 討論

采用頂空進樣法可增加有機物檢出的靈敏度和準(zhǔn)確度［6］，從而更加嚴(yán)格地控制藥物中有機溶劑的殘留量，提高藥品質(zhì)量。乳酸左氧氟沙星在水中的溶解度較好，由于三氯甲烷不溶于水，因此配制三氯甲烷對照品溶液時，第一步用DMSO 作為溶劑，后續(xù)配制以水做溶劑，從而增加三氯甲烷的溶解性。且本法中加0.1%二甲基亞砜不影響待測有機溶劑的檢測，故選以0.1%二甲基亞砜作溶劑。由于本實驗中的待測溶劑的沸點均低于80 ℃，并且溶劑為0.1%二甲基亞砜，因此確定頂空瓶平衡溫度為80 ℃；對頂空瓶平衡時間進行篩選，實驗表明平衡30 min 后頂空瓶內(nèi)可以達到氣液平衡，待測溶劑峰面積基本保持不變，因此選80 ℃下平衡30 min；三種待測溶劑以DB-WAX 為色譜柱，進行程序升溫，分離度良好，故選用DB-WAX 為色譜柱。

藥品中有機溶劑殘留種類因生產(chǎn)工藝不同而異。參照人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)組織（ICH）［7］和我國藥典［4］規(guī)定，三氯甲烷為I 類有機溶劑，甲醇、乙醇為Ⅲ類有機溶劑，安全限度分別為0.3%和0.5%、0.006% 。從測定結(jié)果看，3 批樣品均符合2015 年版《中國藥典》四部的限度要求。