韓 瑩

吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118

兔球蟲(chóng)病是由艾美爾科的球蟲(chóng)引起的一種寄生性原蟲(chóng)病，隨著規(guī)模養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，該病對(duì)我國(guó)養(yǎng)兔業(yè)的危害日益嚴(yán)重，中國(guó)是養(yǎng)兔大國(guó)，每年由兔球蟲(chóng)病造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大[1]。目前，報(bào)道的感染家兔的艾美爾屬球蟲(chóng)有17 種，其中斯氏艾美爾球蟲(chóng)的致病力最強(qiáng)、危害最大，它寄生于兔的肝膽管上皮細(xì)胞，能引起嚴(yán)重的肝球蟲(chóng)病。隨著我國(guó)畜牧產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，家兔養(yǎng)殖集約化程度越來(lái)越高，兔球蟲(chóng)病導(dǎo)致家兔死亡率越來(lái)越高，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失，各種品種和不同年齡的兔都可感染，但以1 ～3 月齡的兔最易感而且病情嚴(yán)重，死亡率高。成年兔發(fā)病輕微，多為帶蟲(chóng)者，成為重要的傳染源[2]。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

吉林省長(zhǎng)春市凈月區(qū)玉潭鎮(zhèn)一養(yǎng)兔場(chǎng)，飼養(yǎng)5 000 只肉兔，其中有將近500 只40 日齡幼兔出現(xiàn)拉稀，精神沉郁，腹圍增大，觸摸有疼痛感，背毛凌亂，每日死亡20 只左右，自行到獸藥店購(gòu)買(mǎi)地克珠利藥品治療3 d，效果不明顯，每日幼兔繼續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。

2 臨床檢查

取病死幼兔進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)幼兔腸系膜出血，肝臟有大量白色的結(jié)節(jié)，取糞便，采用飽和食鹽水漂浮法檢測(cè)卵囊，在顯微鏡下觀察，可見(jiàn)大量兔斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊，肝臟結(jié)節(jié)壓片，在顯微鏡下觀察，可見(jiàn)不同發(fā)育階段的蟲(chóng)體和卵囊。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

取病死幼兔肝臟，用剪刀剪碎肝臟，用研磨棒在研磨碗里研磨肝臟，加入適量的蒸餾水，攪拌均勻，將攪拌液過(guò)300 目網(wǎng)篩，將濾液以4 000轉(zhuǎn)的速度離心15 min，棄上清液，白色沉淀即為兔斯氏艾美耳球蟲(chóng)卵囊。參考康為提取基因組盒子操作說(shuō)明提取基因組，提取斯氏艾美爾球蟲(chóng)總DNA。采用巢氏PCR 檢測(cè)方法鑒定，斯氏艾美耳球蟲(chóng)巢氏PCR 18SrDNA 基因引物序列：Es-18S-eF TGAGAAACG GCTACCACA，Es-18S-eR GAAGTATTCAGGGCGACAA，Es-18S-iF TCGAGGTAGTGACGAGAAATA，Es-18S-iR TGACCACGACAGAAATCCA。兩輪反應(yīng)體系相同，反應(yīng)體系：2.5 μL 的10×Buffer，2 μL 的dNTP，上游引物和下游引物各1 μL，1 μL 的樣本，0.2 μL 的Taq 酶，17.3 μL 的ddH2O，總體積25 μL。兩輪反應(yīng)條件相同，反應(yīng)條件：94 ℃2 min,94 ℃30 s，55 ℃30 s,72 ℃1 min ，72 ℃10 min ,4 ℃保存，30 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增。對(duì)兩組巢氏PCR 產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果顯示，18 SrDNA 基因組擴(kuò)增出的條帶片段大小約為194 bp，與目的條帶大小一致，紫外燈環(huán)境中，切掉膠塊的目的片段并放置在1.5 mL 的離心管中，送到吉林省庫(kù)美生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在NCBI 的BLAST 中比對(duì)序列為100%，鑒定結(jié)果為兔斯氏艾美爾球蟲(chóng)。

4 治療

兔斯氏艾美耳球蟲(chóng)是兔球蟲(chóng)病中，致死率最高，且難治愈，主要以前期預(yù)防為主，治療用磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉，在飼喂的兔糧中混入藥物，每1 000 kg 飼料中添加600 g,連用5 ～10 d，休藥期為28 d，不得作為飼料添加劑長(zhǎng)期應(yīng)用。雖然死亡率下降了，但是病兔一般都預(yù)后不良，生長(zhǎng)緩慢，無(wú)經(jīng)濟(jì)價(jià)值和實(shí)驗(yàn)價(jià)值，肝臟損傷不可逆。

5 防治措施

目前防治措施主要是在飼料和飲水中加入抗球蟲(chóng)藥來(lái)預(yù)防兔球蟲(chóng)病，定期檢測(cè)兔場(chǎng)糞便，確定感染球蟲(chóng)的種類(lèi)，不要盲目用藥，也不要長(zhǎng)期的不科學(xué)喂藥，防止產(chǎn)生耐藥蟲(chóng)株，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期清理糞便，飼料槽和飲水槽定期消毒，籠舍采用火焰消毒，或者用10%氨水消毒。定期對(duì)成年公兔和母兔進(jìn)行球蟲(chóng)檢測(cè)，也可以采用中藥復(fù)方進(jìn)行兔球蟲(chóng)病的預(yù)防治療。目前還沒(méi)有兔斯氏艾美爾球蟲(chóng)疫苗。