馮睿婷，趙繼智

鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450003

腫瘤免疫學(xué)研究表明，機(jī)體免疫狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切［1］。大量研究表明，惡性腫瘤患者均存在T淋巴細(xì)胞狀態(tài)異常及比例失調(diào)［2］。而T淋巴細(xì)胞亞群是機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要組成，具有識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞的作用，在腫瘤免疫監(jiān)測(cè)中具有重要價(jià)值［3］。T淋巴細(xì)胞的活化是機(jī)體免疫應(yīng)答的核心，可誘導(dǎo)T細(xì)胞活化、增殖及分化，從而對(duì)特殊抗原具有直接殺傷作用，并對(duì)致敏T細(xì)胞所釋放的細(xì)胞因子具有協(xié)同殺傷作用。基于此，本研究旨在探討采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)鼻咽癌患者的外周血T細(xì)胞亞群及活化T淋巴細(xì)胞的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)論如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性搜集2018年1月—2019年10月于鄭州人民醫(yī)院就診的52例鼻咽癌患者臨床資料，將其作為試驗(yàn)組，其中男31例，女21例；年齡42～65歲，平均年齡（51.04±4.28）歲；有吸煙史28例；臨床分期：Ⅱ期6例，Ⅲ期21例，Ⅳ期25例。納入標(biāo)準(zhǔn)：納入病例均經(jīng)病理檢查確診；符合《中國(guó)鼻咽癌分期2017版（2008鼻咽癌分期修訂專(zhuān)家共識(shí)）》［4］中鼻咽癌的臨床分期：Ⅱ-Ⅳ期；卡氏評(píng)分＞60分，預(yù)計(jì)生存周期＞6個(gè)月；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重傳染性疾病、其他惡性腫瘤者；放療禁忌癥者；中途退出治療者；病情不穩(wěn)定，惡化速度加快，病情危重者。另選取同期體檢健康者50例作為對(duì)照組，其中男30例，女20例；年齡41～64歲，平均年齡（51.26±4.33）歲。兩組間性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑： FACScalibur流式細(xì)胞儀及配套Simultest IMK-Lymphocyte雙色免疫熒光試劑盒（美國(guó)Bection Dickinson公司）；PREP全自動(dòng)溶血儀（美國(guó)Beckmancoulter公司），鼠抗人單克隆抗體CD4+/CD8+/CD3+、CD3+/CD（16++56+）、CD3+/HLA-DR、CD8+/HLA-DR，ABC溶血素。

1.2.2 檢測(cè)方法：采集所有入選者清晨空腹肘靜脈血3 ml，置于EDTA-K2抗凝真空試管中，取2支試管分設(shè)為對(duì)照管（正常人群）和試驗(yàn)管（鼻咽癌患者），分別加入100μL血，各加入20μL熒光素標(biāo)記的鼠抗人單克隆抗體CD4+/CD8+/CD3+、CD3+/CD（16++56+）、CD3+/HLA-DR、CD8+/HLA-DR，充分混勻。避光孵育30 min后加入2 ml溶血素，靜置8～12 min后，利用離心機(jī)以1 000 r/min離心處理5 min，除去上清液，加入2 ml磷酸緩沖液（PBS）洗滌，除去上清液，重復(fù)2次。之后再加入1 ml PBS，利用流式細(xì)胞儀自動(dòng)檢測(cè)標(biāo)本T細(xì)胞亞群及活化T淋巴細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血T細(xì)胞亞群測(cè)定比較

試驗(yàn)組CD3+、CD4+水平低于對(duì)照組，CD8+、CD（16++56+）水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 外周血T細(xì)胞亞群測(cè)定比較（±s） %

表1 外周血T細(xì)胞亞群測(cè)定比較（±s） %

組別試驗(yàn)組（n=52）對(duì)照組（n=50）tP CD3+57.54±12.43 64.61±10.51 3.092 0.003 CD4+25.82±6.87 36.11±6.83 7.698 0.000 CD8+36.34±10.57 27.22±6.34 4.105 0.000 CD（16++56+）28.23±12.41 21.81±8.87 2.995 0.003

2.2 活化T淋巴細(xì)胞測(cè)定比較

試驗(yàn)組CD3+/HLA-DR、CD8+/HLA-DR水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 活化T淋巴細(xì)胞測(cè)定比較（±s） %

表2 活化T淋巴細(xì)胞測(cè)定比較（±s） %

組別試驗(yàn)組（n=52）對(duì)照組（n=50）tP CD3+/HLA-DR 33.54±9.48 12.43±7.43 12.484 0.000 CD8+/HLA-DR 37.53±9.42 15.11±6.26 14.099 0.000

3 討論

T細(xì)胞亞群中輔助性T細(xì)胞CD4和抑制性T細(xì)胞CD8的動(dòng)態(tài)平衡與相互制約是機(jī)體免疫功能運(yùn)行正常的關(guān)鍵，也是維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境與腫瘤微環(huán)境穩(wěn)定的關(guān)鍵［5］。研究證實(shí)，T細(xì)胞亞群及活化T淋巴細(xì)胞在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用［6］。

流式細(xì)胞術(shù)是臨床定量分析和分選單細(xì)胞或其他生物粒子的檢測(cè)手段，主要是通過(guò)快速測(cè)定熒光信號(hào)、側(cè)向角散射及光吸收、前向角散射，從而定量檢測(cè)細(xì)胞中DNA含量、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體、表面抗原及細(xì)胞體積等多種參數(shù)，并依據(jù)各參數(shù)結(jié)果，快速、準(zhǔn)確、可重復(fù)性的分離不同性質(zhì)的細(xì)胞，以獲得研究所需的純細(xì)胞群體，也是便捷評(píng)估、檢測(cè)腫瘤患者機(jī)體免疫狀態(tài)的有效手段［7］。本研究中應(yīng)用該方法檢測(cè)鼻咽癌患者T細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞明顯低于正常群體，CD8+、CD（16++56+）明顯高于正常群體，提示鼻咽癌患者的免疫功能低于正常群體，T細(xì)胞亞群可作為腫瘤療效及預(yù)后的參考指標(biāo)之一。分析其原因，腫瘤免疫反應(yīng)主要是以T細(xì)胞亞群為主導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，CD4+淋巴細(xì)胞可輔助T細(xì)胞分化，促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗感染作用，從而促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞增殖，提高殺菌作用［8］；CD8+淋巴細(xì)胞抑制T細(xì)胞及殺傷性T細(xì)胞，降低患者免疫應(yīng)答。當(dāng)CD4+水平降低時(shí)，機(jī)體細(xì)胞免疫功能低下，抗癌能力下降；CD8+水平升高，可使腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展，并快速惡化、轉(zhuǎn)移［9］。同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鼻咽癌患者的活化T淋巴細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)，CD3+/HLA-DR、CD8+/HLA-DR水平明顯高于對(duì)照組，提示活化T淋巴細(xì)胞也可作為惡性腫瘤免疫診斷的指標(biāo)之一。分析其原因，CD3是人類(lèi)T細(xì)胞分化抗原，HLA-DR是主要組織相容復(fù)合體Ⅱ型MHC分子，其抗原主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞、活化T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染、抑制免疫排斥反應(yīng)時(shí)均易導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞活化，故HLA-DR+T淋巴細(xì)胞可反映活化T細(xì)胞含量，并可評(píng)估T細(xì)胞活化狀態(tài)及活化效率，對(duì)評(píng)估腫瘤患者免疫活化狀態(tài)具有重要的臨床參考價(jià)值［10］。

綜上所述，鼻咽癌患者的免疫功能低于正常人群，而采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患者的外周血細(xì)胞亞群及活化T淋巴細(xì)胞，可有效反映患者腫瘤的免疫活化狀態(tài)及病情變化，具有重要臨床價(jià)值。