河南省洛陽市疾病預(yù)防控制中心（471023）趙衛(wèi) 劉萌萌

肺結(jié)核為結(jié)核分枝桿菌感染所致常見慢性病，近年來其發(fā)病率持續(xù)增高，對(duì)患者身心健康及生活質(zhì)量影響極大，同時(shí)，我國為結(jié)核病多發(fā)國家之一，及早確診肺結(jié)核并有針對(duì)性給予對(duì)應(yīng)干預(yù)措施有利于改善疾病整體療效與預(yù)后效果。此外，由于免疫抑制劑廣泛應(yīng)用、基礎(chǔ)病變及多重耐藥等可造成結(jié)核病再現(xiàn)，故臨床急需加強(qiáng)結(jié)核桿菌早期迅速檢測(cè)，避免延誤患者最佳治療時(shí)機(jī)。既往臨床用于肺結(jié)核結(jié)核桿菌的病原學(xué)檢測(cè)方式主要包括培養(yǎng)法及痰涂片法，前者為疾病診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但用時(shí)較長(zhǎng)、操作繁瑣，而痰涂片法特異性及檢出率均較低[1]。FQ-PCR也是肺結(jié)核重要診斷措施，其具有較高特異性及敏感度，可檢測(cè)出1～100fg純化結(jié)核分枝桿菌DNA，逐漸在疾病診療中發(fā)揮重要作用[2]?；诖耍狙芯窟x取肺結(jié)核患者103例，探討FQ-PCR應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我中心2 0 1 7 年6月～2018年12月肺結(jié)核患者103例設(shè)為研究組，同期103例非肺結(jié)核患者設(shè)為對(duì)照組。研究組男61例，女42例；年齡46～68歲，平均（57.06±5.03）歲。對(duì)照組男59例，女44例；年齡47～70歲，平均（57.64±4.91）歲；疾病類型：氣胸2例，膿胸3例，支氣管擴(kuò)張癥22例，真菌性肺炎4例，細(xì)菌性肺炎72例。兩組基線資料均衡可比（P＞0.05）。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①首次發(fā)??；②均經(jīng)病理檢查確診；③知曉本研究，簽署同意書；④研究組經(jīng)CT或胸片檢查可見肺結(jié)核征象。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并全身性重度感染性病變者；②合并其他肺部病變者；③合并腎肝等臟器器質(zhì)性病變者；④合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)病變者；⑤合并代謝系統(tǒng)病變者。

1.3 方法 漂浮集菌涂片法：采集患者24h痰液（即時(shí)痰、晨痰、晚痰），置于2倍體積無菌蒸餾水內(nèi)，常規(guī)實(shí)施20min高壓蒸汽滅菌，置入0.3ml二甲苯，震蕩約10min后加滿無菌蒸餾水，15min靜置，取帶有血清玻片覆蓋于瓶口后靜置約15min，去掉載玻片，干燥處理，實(shí)施萋-尼氏抗酸染色及鏡檢分級(jí)。FQ-PCR法：取痰標(biāo)本，置入等量胰蛋白酶（濃度：1%），混合均勻，取0.5ml離心（10000r/min，5min）處理，留沉淀置入生理鹽水1ml實(shí)施重懸，2次離心洗滌；DNA擴(kuò)增模板制備：沉淀加入試劑盒DNA，取50ul混合均勻，煮沸約10min后靜置裂解菌體6h，離心（10000r/min，5min）處理，取2ul上清液作模板，依據(jù)試劑盒說明書所提供反應(yīng)條件實(shí)施DNA擴(kuò)增，93℃條件下2min預(yù)變性，55℃條件下45s、93℃條件下45s，擴(kuò)增10個(gè)循環(huán)，隨后采取55℃ 45s及93℃ 45s擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)，取陽性及陰性質(zhì)控品作參照，若拷貝數(shù)＞50則評(píng)定為陽性。

1.4 觀察指標(biāo) ①漂浮集菌涂片法及FQPCR法對(duì)肺結(jié)核檢查結(jié)果。②漂浮集菌涂片法及FQ-PCR法對(duì)肺結(jié)核診斷效能。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過SPSS25.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采取n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漂浮集菌涂片法及FQ-PCR法檢查結(jié)果 經(jīng)FQ-PCR法檢查可知研究組陽性率為（98.06%）、對(duì)照組陰性率為（97.09%），經(jīng)漂浮集菌涂片法檢查可知研究組陽性率為（88.35%）、對(duì)照組陰性率為（98.06%）。見附表1。

2.2 漂浮集菌涂片法及FQ-PCR法診斷效能 FQ-PCR法對(duì)肺結(jié)核診斷敏感度（98.06%）、準(zhǔn)確度（97.57%）高于漂浮集菌涂片法（88.35%、93.20%）（P＜0.05），F(xiàn)Q-PCR法對(duì)肺結(jié)核診斷特異度（97.09%）與漂浮集菌涂片法（98.06%）間無顯著差異（P＞0.05）。見附表2。

附表1 漂浮集菌涂片法及FQ-PCR法檢查結(jié)果[n(%)]

附表2 漂浮集菌涂片法及FQ-PCR法診斷效能(n=206)

3 討論

抗結(jié)核治療存在不規(guī)范性，導(dǎo)致患者機(jī)體中結(jié)核桿菌對(duì)抗結(jié)核藥物出現(xiàn)耐藥，并形成耐多藥結(jié)核病或耐藥結(jié)核病。因此，如何早期診斷肺結(jié)核并進(jìn)行針對(duì)性治療仍是研究熱點(diǎn)。肺結(jié)核常規(guī)診斷中，肺泡灌洗液、痰液、漿膜腔積液檢測(cè)為最可靠診斷措施，結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中存在較多脂類，其不易著色，但延長(zhǎng)染色時(shí)間并加溫處理后，則較難被酸性脫色劑脫色，故臨床依據(jù)此原理常采取痰涂片法對(duì)疑似肺結(jié)核患者實(shí)施診斷鑒別。痰涂片檢查雖具有操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，但檢查結(jié)果極易受操作者主觀因素及含菌量低等因素影響；痰培養(yǎng)法則由于結(jié)核桿菌特殊細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)導(dǎo)致生長(zhǎng)速度較慢，常規(guī)L-J培養(yǎng)用時(shí)較長(zhǎng)，而快速培養(yǎng)系統(tǒng)（包括BACT/ALERT 3D及Bactec MGIT 960等快速培養(yǎng)系統(tǒng)）雖然可以顯著提升檢測(cè)速度及檢出率，但其對(duì)痰涂片陽性標(biāo)本培養(yǎng)用時(shí)仍可達(dá)7～10d，無法實(shí)現(xiàn)肺結(jié)核患者早期快速診斷及治療[3][4]。X線胸片在肺結(jié)核診斷中也較常用，但其極易對(duì)非典型病例造成漏診及誤診，診斷效能較低，多需聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行綜合診斷。

FQ-PCR法為近十幾年得到發(fā)展應(yīng)用的核酸擴(kuò)增新技術(shù)，具備可定量、結(jié)果客觀、自動(dòng)化、重復(fù)性好、特異度及敏感度高、檢測(cè)迅速等優(yōu)勢(shì)，且相較于常規(guī)PCR檢查，其具備一定抗污染性，較適用于無法或較難進(jìn)行人工培養(yǎng)的病原體測(cè)定。相關(guān)研究表明，F(xiàn)Q-PCR把熒光反應(yīng)物置入普通PCR反應(yīng)體系，以此使其和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物間發(fā)生關(guān)聯(lián)性，通過測(cè)定PCR擴(kuò)增反應(yīng)內(nèi)熒光強(qiáng)度改變定量分析標(biāo)本內(nèi)DNA特定序列，相較于普通PCR反應(yīng)，F(xiàn)Q-PCR法整個(gè)反應(yīng)均于單一管中進(jìn)行，可最大程度地避免樣本遭受污染，保證診斷的有效性[5]。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)Q-PCR法對(duì)肺結(jié)核診斷敏感度、準(zhǔn)確度高于漂浮集菌涂片法（P＜0.05），表明采取FQ-PCR法對(duì)肺結(jié)核實(shí)施診斷，可顯著提升診斷敏感度及準(zhǔn)確度，最大程度降低漏診風(fēng)險(xiǎn)，避免延誤患者最佳干預(yù)時(shí)機(jī)。

綜上所述，F(xiàn)Q-PCR法在肺結(jié)核診斷中具有較高應(yīng)用價(jià)值，可有效檢出結(jié)核桿菌，提高肺結(jié)核診斷準(zhǔn)確度及敏感度，避免漏診，為臨床及早制定、調(diào)整有針對(duì)性干預(yù)方案提供客觀參考依據(jù)。