張曉霞 馬家驊 謝海霞 付 博 張琪苓 顏川嵐 楊文雪 冉玉婷

西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川綿陽 621010

皮膚由于總暴露在外部環(huán)境中，創(chuàng)傷等受傷概率較大[1-2]，尤其因人口老齡化，以及肥胖和糖尿病等發(fā)病率不斷上升，更多的人可能會受皮膚創(chuàng)傷的困擾[3-5]，因此，加速皮膚創(chuàng)傷愈合對身體健康至關(guān)重要。目前促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的活性物質(zhì)主要包括生長因子、生物材料、中藥等，盡管顯示出較好的治療效果，但起效相對較慢，有些存在安全隱患，長期使用成本較高，為患者帶來沉重的負(fù)擔(dān)[6-8]，亟需探尋更加安全有效的治療手段。

目前市面上有一種空間電勢發(fā)生裝置，即DENBA+技術(shù)裝置，通過產(chǎn)生高壓低頻交變電場實(shí)現(xiàn)保鮮，其主要原理是其產(chǎn)生的電場進(jìn)入商品的水分子細(xì)胞中，發(fā)生共振，使水分子保持活性，不流失，由此達(dá)到保鮮的效果[9-10]。同理，若DENBA+產(chǎn)生的電場能使傷口處的肉芽組織等活性組織保持活性，則有可能促進(jìn)細(xì)胞生長增殖，達(dá)到促進(jìn)傷口愈合的效果。為此，進(jìn)行了DENBA+對小鼠皮膚線形傷口愈合程度的影響研究。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

小鼠，昆明種，SPF 級，購于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司，雌雄各半，體重18 ～22 g，許可證號SCXK（川）2015-030。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

DENBA +電毯，由四川長虹器件科技有限公司提供；硫化鈉九水合物為分析純（上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司，批號：C00000055），水為純凈水。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小鼠皮膚線形傷口模型的制備與分組 小鼠30 只，隨機(jī)分為三組，每組10 只，分別為DENBA+處理8 h 組、DENBA+處理4 h 組和空白組。用醫(yī)用棉簽少量多次沾取8%硫化鈉溶液對小鼠背部進(jìn)行脫毛，10 min 后觀察背部毛是否脫干凈，若未脫干凈，重復(fù)上述步驟，觀察24 h，確認(rèn)脫毛未損傷背部肌膚后，進(jìn)行造模。依據(jù)小鼠體重按5 ml/kg 分別腹腔注射10%水合氯醛溶液，待小鼠完全處于麻醉狀態(tài)后，在背部脫毛區(qū)域劃一長度為1 cm 的線形傷口[11-12]，避免劃破筋膜層。對于DENBA+ 8 h 組與DENBA+4 h 組，分別將小鼠籠置于電壓為2200 V的DENBA+電毯上處理8 h 和4 h，而空白組不作處理。

1.3.2 指標(biāo)觀察 每天觀察并記錄小鼠的活躍程度和毛色等體征變化情況，記錄攝食量與飲水量，最后一天稱重，同時在造模后的第2、7、12 天分別量取小鼠傷口長度，按下式計算愈合率。

愈合率=（第1 天傷口長度-第n 天傷口長度）/第1 天傷口長度×100%

1.3.3 病理組織檢測 在造模后的第12 天，將小鼠麻醉，取創(chuàng)面邊緣至創(chuàng)面中心寬約1 cm×2 cm 的皮膚組織，將取下的皮膚用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，蘇木精和伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色，用顯微鏡觀察小鼠皮膚組織病理改變。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SSPS 26.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用（）表示。多組資料比較采用單因素方差分析，組間比較用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DENBA+對小鼠體重、攝食、飲水及體征的影響

各組小鼠的體重比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示DENBA+處理與否對小鼠的體重影響不大。經(jīng)DENBA+處理后，DENBA+處理8 h 組和4 h 組的攝食量低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且DENBA+處理8 h 組攝入量低于4 h組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而各組飲水量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。根據(jù)每日對小鼠整體狀態(tài)的觀察，發(fā)現(xiàn)在整個實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠表現(xiàn)活躍，毛色均勻，皮毛順滑，無明顯差異。見表1。

表1 DENBA+對小鼠體重與飲食的影響（±s）

表1 DENBA+對小鼠體重與飲食的影響（±s）

注：與空白組比較**P ＜0.01；與DENBA+處理4 h 組比較##P ＜0.01

組別 n 體重（g） 攝食量[g/（只·d）] 飲水量[g/（只·d）]DENBA+處理8 h 組 10 35.716±1.981 9.613±0.541**## 11.014±0.594 DENBA+處理4 h 組 10 37.072±1.956 12.648±0.486** 10.976±0.630空白組 10 35.734±1.464 14.577±0.616 10.947±0.473 F 值 1.834 123.954 0.021 P 值 0.179 0.000 0.979

2.2 DENBA+對小鼠皮膚傷口愈合程度的影響

DENBA+ 對小鼠皮膚傷口愈合程度的影響見圖1、表2。由圖1 可見，與第1 天比較，在第3天時，傷口的開合程度較大，表明傷口正在經(jīng)歷炎癥期，之后慢慢地隨著肉芽組織的生長，傷口的愈合也加速。與空白組比較，DENBA+ 處理8 h 組在第11 天傷口已經(jīng)表皮愈合完全，只留下一道很細(xì)的縫。由表2 可知，DENBA+ 處理的第2 天，與空白組比較，小鼠傷口愈合情況較好，且隨著處理時間的加長，愈合率也提高，其中DENBA+處理8 h 組高于空白組，差異有極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；第7 天與第12 天情況類似，DENBA+ 處理8 h 組與4 h 組的愈合率高于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而DENBA+處理8 h 組與4 h 組的效果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示DENBA+ 產(chǎn)生的電場對線形傷口愈合有促進(jìn)作用。

圖1 DENBA+處理對小鼠傷口的影響

2.3 DENBA+對小鼠皮膚傷口病理組織的影響

DENBA+對小鼠皮膚傷口病理組織的影響見圖2。由圖2 可知，各組表皮連續(xù)，細(xì)胞排列整齊，已經(jīng)明顯處于傷口愈合的最后階段，但DENBA+處理組較空白組細(xì)胞排列緊密，表明DENBA+產(chǎn)生的電場對線形傷口的愈合有促進(jìn)作用，但處理8 h 與4 h 無明顯差異。

圖2 DENBA+對小鼠皮膚傷口影響的病理切片結(jié)果 ( HE, ×100 )

表2 DENBA+對皮膚傷口愈合程度的影響（±s，%）

表2 DENBA+對皮膚傷口愈合程度的影響（±s，%）

注：與空白組比較**P ＜0.01

組別 動物數(shù)（只） 第2 天愈合率 第7 天愈合率 第12 天愈合率DENBA+處理8 h 組 10 33.792±3.265** 48.855±4.783** 89.852±3.713**DENBA+處理4 h 組 10 31.605±2.953 47.073±3.526** 89.018±2.023**空白組 10 29.962±2.617 39.620±2.355 81.555±2.242 F 值 4.223 17.622 27.343 P 值 0.025 0.000 0.000

3 討論

創(chuàng)傷愈合是一個包括炎癥期、增殖期和組織再塑期的有序過程[13]，實(shí)驗(yàn)中，小鼠的急性線形傷口在第2 ～3 天時開口較大，主要是因?yàn)榇藭r正處于炎癥期，傷口局部有不同程度的組織壞死和血管斷裂出血，會出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為充血、漿液滲出及白細(xì)胞游出，故局部紅腫。雖然皮膚傷口在第2 天開口很大，但長度縮小較快，之后隨著細(xì)胞漿液的滲出與凝集成塊，創(chuàng)口漸漸開始結(jié)痂，愈合較前期變慢，在第10 天左右，有的小鼠皮膚痂皮已經(jīng)脫落，只留下一絲傷口痕跡，該愈合過程與文獻(xiàn)報道基本一致[14]。

本研究結(jié)果提示，DENBA+處理的傷口愈合情況較空白組好，可能是DENBA+技術(shù)裝置產(chǎn)生的高壓低頻交變電場，通過共振效應(yīng)使人體的水分子活化，激活和修復(fù)機(jī)體受損細(xì)胞，減少炎癥滲出，控制炎癥，并通過改善創(chuàng)面局部微循環(huán)瘀滯狀態(tài)，加速創(chuàng)面新陳代謝，促進(jìn)毛細(xì)血管再生和膠原沉積，從而促進(jìn)肉芽組織增生，達(dá)到加速傷口愈合的效果[15-16]，與韓燕等[17]報道的外源性脈沖電磁場刺激促進(jìn)糖尿病皮膚創(chuàng)傷愈合的機(jī)制類似，但其效應(yīng)可能與電場強(qiáng)度、處理時間、動物模型等有關(guān)[18]，還需要后期進(jìn)一步探討。同時，DENBA+對皮膚愈合相關(guān)的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、表 皮 生 長 因 子（epidermal growth factor，EGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）、轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor-β，TGF-β）、炎癥釋放因 子（inflammatory release factor-1β，IL-1β）、血管增生等的影響也有待研究[19]，后期將在此基礎(chǔ)上取皮膚組織制片，通過免疫組化來檢測上述指標(biāo)，進(jìn)一步揭示DENBA+促進(jìn)傷口愈合的機(jī)制。

綜上所述，DENBA+產(chǎn)生的電場對皮膚傷口愈合有促進(jìn)作用，但會使小鼠攝食減小，飲水略有增加，為DENBA+在臨床方面的應(yīng)用提供了理論依據(jù)與實(shí)驗(yàn)支撐。