李婷 盧艷慧 李春霖 劉敏燕 成曉玲 張麗麗 苗新宇 李楠 孫般若

中國人民解放軍總醫(yī)院第二醫(yī)學(xué)中心內(nèi)分泌科，北京 100853

骨硬化蛋白是一種由SOST基因編碼的骨細(xì)胞分泌的糖蛋白，是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化和功能的關(guān)鍵因子[1]。骨硬化蛋白通過與LRP-5/6核受體結(jié)合，從而阻止Wnt與其受體之間的相互作用，最終導(dǎo)致?-catenin的磷酸化和降解[2]，Wnt靶基因沒有被激活。骨硬化蛋白因此下調(diào)了負(fù)責(zé)成骨細(xì)胞分化和增殖功能的經(jīng)典Wnt信號通路[3]。與此同時(shí)，骨硬化蛋白也被證明通過RANKL依賴的途徑促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成[4]。目前的證據(jù)表明，合成阻斷骨硬化蛋白的單克隆抗體正成為治療骨質(zhì)疏松癥的一個(gè)新靶點(diǎn)[5]。因此，近幾年有關(guān)骨硬化蛋白的研究逐漸成為骨質(zhì)疏松癥領(lǐng)域的新熱點(diǎn)。

同時(shí)研究者注意到骨質(zhì)疏松癥與心血管疾病之間的聯(lián)系，有許多共同參與骨轉(zhuǎn)換和血管斑塊鈣化形成的細(xì)胞因子和生長因子引起廣泛重視，其中包括骨硬化蛋白。研究表明，在心血管系統(tǒng)，骨硬化蛋白能促進(jìn)動(dòng)脈壁中的成骨樣細(xì)胞導(dǎo)致動(dòng)脈斑塊鈣化形成[6]，其水平與心血管原因引起的死亡率有關(guān)，這些發(fā)現(xiàn)提示可使用血清骨硬化蛋白作為心血管死亡風(fēng)險(xiǎn)的新標(biāo)志物來建立預(yù)防策略[7-8]。但臨床觀察血清骨硬化蛋白水平和血管鈣化程度、心血管疾病危險(xiǎn)因素的關(guān)系尚無統(tǒng)一結(jié)論[9]。有關(guān)骨硬化蛋白指標(biāo)是否可作為心血管疾病預(yù)測的獨(dú)立危險(xiǎn)因素報(bào)道較少，故基于現(xiàn)狀，通過對患者血清骨硬化蛋白水平的檢測與比較，擬對已明確的各心血管疾病危險(xiǎn)因素與骨硬化蛋白間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1 對象和方法

1.1 對象

本研究為橫斷面研究，2014年3～4月對北京某社區(qū)中老年人群706例人員進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，按以下標(biāo)準(zhǔn)篩查出105例納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：長期居住在北京，男性，年齡40～69歲；自愿參加本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有糖尿病、慢性肝腎功能不全、惡性腫瘤等；近期(半年內(nèi))使用影響血糖血脂代謝藥物(如糖皮質(zhì)激素類藥物、降血脂類藥物)等；近3個(gè)月內(nèi)使用維生素D制劑、鈣劑、降鈣素、雙膦酸鹽、抗驚厥、抗凝藥、雌激素和雌激素受體調(diào)節(jié)劑等影響骨代謝藥物。

通過FPG、2 h PG及糖尿病病史的嚴(yán)格篩選，排除糖尿病和糖尿病前期(空腹血糖受損、葡萄糖耐量受損)，共納入105例血糖正常的中老年男性(年齡：40～69歲)作為研究對象。

1.2 方法

①一般信息采集：由統(tǒng)一培訓(xùn)后的專人進(jìn)行全面查體及信息采集，包括年齡、身高、體重、血壓、吸煙飲酒史、既往疾病史、用藥史等，并計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)(BMI)=體重(kg)/身高的平方(m2)；②生化指標(biāo)檢測：收集受試者空腹血3 mL，離心分離后將血清置于-80 ℃冰箱保存，行75 g口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)，留取餐后2 h血，分離凍存?zhèn)溆谩２捎昧_氏自動(dòng)分析儀(Cobas E601，Roch) 測定肝腎功能、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、血清尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等指標(biāo)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(Abcam，Quantikine?ELISA，DSST00)測定血清骨硬化蛋白，批內(nèi)和批間CV均<10%。

1.3 主要觀察指標(biāo)

不同年齡、BMI、腰圍、收縮壓、舒張壓、FPG、2 h PG、TG、TC、HDL-C、LDL-C，是否服用降壓藥，現(xiàn)在是否吸煙，是否有心血管病家族史，血清骨硬化蛋白水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS 21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、三組間比較采用單因素方差分析，通過Spearman相關(guān)系數(shù)、多元線性回歸分析骨硬化蛋白水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。P<0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對象的基本特點(diǎn)

105例血糖正常中老年男性的相關(guān)資料主要涵蓋心血管病危險(xiǎn)因素和骨硬化蛋白指標(biāo)。具體包括：①定量資料：年齡(49.89±5.77)歲，BMI(25.99±2.56) kg/m2，腰圍(87.51±7.03) cm，收縮壓(132.99±14.74) mmHg，舒張壓(83.22±8.84) mmHg，F(xiàn)PG(5.20±0.59) mmol/L，2 h PG(5.76±0.92) mmol/L，TG(1.73±1.50) mmol/L，TC(5.01±0.90) mmol/L，HDL-C(1.35±0.31) mmol/L，LDL-C(3.41±0.84) mmol/L，骨硬化蛋白(92.21±28.06) ng/L。②定性資料：是否吸煙、是否服用降壓藥、是否有心血管病家族史以及與心血管密切相關(guān)的既往史(是否診斷高血壓病、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥)，采用“構(gòu)成比”對其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述(見表1)。

表1 研究對象定性資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)描述

2.2 心血管危險(xiǎn)因素不同水平中骨硬化蛋白的比較

結(jié)合各指標(biāo)的正常值范圍，綜合將各心血管危險(xiǎn)因素分成不同水平組，分析各組之間血清骨硬化蛋白的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。按照收縮壓、舒張壓、TG、TC、HDL-C、LDL-C、是否吸煙、是否服用降壓藥、是否有心血管病家族史各因素進(jìn)行分組，各組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(見表2)；年齡、BMI、腰圍各因素分為3組，各組間采用單因素方差分析(見表3)。結(jié)果提示，不同年齡、BMI水平的骨硬化蛋白差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 心血管危險(xiǎn)因素不同水平(分2組)骨硬化蛋白的差異分析 Table 2 Differential analysis of different levels of sclerostin (in 2 groups) in cardiovascular risk factors

表3 心血管危險(xiǎn)因素不同水平(分3組)骨硬化蛋白的差異分析

2.3 各心血管危險(xiǎn)因素與血清骨硬化蛋白的相關(guān)性分析

將各心血管危險(xiǎn)因素與血清骨硬化蛋白分別作Spearman相關(guān)分析，得到相關(guān)系數(shù)和P值，探討有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表4)。結(jié)果提示，年齡(相關(guān)系數(shù)：0.315)、BMI(相關(guān)系數(shù)：0.342)、腰圍(相關(guān)系數(shù)：0.309)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4 各心血管危險(xiǎn)因素與血清骨硬化蛋白的Spearman相關(guān)性分析

2.4 多元線性回歸方程的建立

血清骨硬化蛋白作為應(yīng)變量，上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的年齡、BMI、腰圍作為自變量進(jìn)入多元線性回歸分析，采用逐步回歸分析的變量篩選方法，經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件分析后，腰圍因無顯著影響且與BMI存在共線性被列為“已排除變量”，年齡、BMI與骨硬化蛋白正相關(guān)(P<0.05)(見表5)。

表5 各心血管危險(xiǎn)因素與血清骨硬化蛋白的多元線性回歸分析

3 討論

3.1 心血管危險(xiǎn)因素篩選依據(jù)

2016年，我國學(xué)者利用中國動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(China-PAR)研究大樣本隊(duì)列數(shù)據(jù)，建立了用于心血管病風(fēng)險(xiǎn)評估的 China-PAR 模型，需納入性別、年齡、現(xiàn)居住地、地域、腰圍、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、當(dāng)前血壓水平、是否服用降壓藥、是否患有糖尿病、現(xiàn)在是否吸煙、是否有心血管病家族史。本研究以China-PAR模型為根據(jù)，選取有關(guān)項(xiàng)目作為心血管危險(xiǎn)因素納入統(tǒng)計(jì)分析。

3.2 本研究選擇血糖正常人群的原因

綜合國內(nèi)外的報(bào)道，在1型糖尿病兒童患者中，血清骨硬化蛋白升高，且伴隨骨質(zhì)疏松發(fā)病率的增加[10]。而2型糖尿病相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，血清骨硬化蛋白與空腹血糖正相關(guān)，目前具體機(jī)制尚不明確[11-12]。同時(shí)有研究表明，骨硬化蛋白濃度升高與2型糖尿病患者CVD風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[13]。因此為了排除糖尿病對結(jié)果的影響，選取血糖正常人群作為研究對象，希望探討其他心血管危險(xiǎn)因素與骨硬化蛋白的相關(guān)性。本研究顯示，在中老年男性正常血糖人群中，血糖與骨硬化蛋白水平無明確相關(guān)性。

3.3 本研究結(jié)果分析

本研究發(fā)現(xiàn)，中老年男性正常血糖人群中，隨著年齡和BMI的增長，血清骨硬化蛋白水平隨之升高。而研究對象的血脂、血糖、血壓等其他心血管危險(xiǎn)因素與骨硬化蛋白沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。

既往有研究提出，年輕人骨硬化蛋白水平比老年人低[14]，在50歲以上的健康男性中探討兩者間關(guān)系，也顯示骨硬化蛋白隨著年齡的增長明顯升高[15]。本文有關(guān)“血清骨硬化蛋白水平與年齡呈正相關(guān)”的結(jié)果與上述報(bào)道一致。眾所周知，骨硬化蛋白在維持成骨細(xì)胞骨生成和破骨細(xì)胞骨吸收的動(dòng)態(tài)平衡中起到關(guān)鍵作用[16]。血清骨硬化蛋白水平隨著年齡增長而升高，抑制了成骨細(xì)胞分化，減少骨生成，導(dǎo)致骨流失增加。這一點(diǎn)與老年人骨質(zhì)疏松發(fā)病率明顯增加的趨勢吻合。

研究顯示肥胖人群的骨硬化蛋白水平可能低于正常人，因此肥胖人群對骨生成的抑制作用更弱，被認(rèn)為是骨質(zhì)疏松癥的一個(gè)相對保護(hù)因素[17-18]。與之相反，肥胖卻是心血管病的明確危險(xiǎn)因素。另外，在超重個(gè)體骨折風(fēng)險(xiǎn)的研究中，卻提出肥胖對骨折的發(fā)生不是完全的保護(hù)作用[6]。而本研究發(fā)現(xiàn)，血清骨硬化蛋白水平與BMI呈正相關(guān)，與以往報(bào)道并不一致，后期希望加大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證兩者關(guān)系。同時(shí)也重新思考骨硬化蛋白與肥胖、骨質(zhì)疏松癥、心血管病之間的作用機(jī)制。

目前有關(guān)骨硬化蛋白與血脂相關(guān)性的研究偏少，報(bào)道結(jié)果尚不統(tǒng)一。從本研究結(jié)果來看，血脂均與血清骨硬化蛋白無明顯相關(guān)性，有待進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究探索。

3.4 本研究的不足之處

本研究為橫斷面研究，樣本量較少，納入統(tǒng)計(jì)因素不夠全面，可能還受其他危險(xiǎn)因素干擾。因此，血清骨硬化蛋白與心血管疾病危險(xiǎn)因素的關(guān)系尚需進(jìn)一步的大樣本前瞻性研究。