余冰潔, 程 鈞, 宋 珊, 楊玲玲

0引言

眼部堿燒傷是一種常見(jiàn)又非常難治的眼外傷，可嚴(yán)重影響患者的視力。對(duì)于堿燒傷急性期的治療，應(yīng)主要關(guān)注于促進(jìn)角膜和結(jié)膜上皮修復(fù)、減輕眼表炎癥反應(yīng)、抑制新生血管生成等方面。但是堿燒傷后眼表環(huán)境復(fù)雜，涉及多種反應(yīng)，多種炎癥因子的參與，角膜上皮往往難以修復(fù)。有研究發(fā)現(xiàn)NLRP3炎性小體介導(dǎo)的NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-1β焦亡通路參與無(wú)菌性角膜損傷，抑制該通路可以減輕炎癥反應(yīng)，降低角膜的混濁程度，可作為提高眼部堿燒傷預(yù)后的一種新治療方法[1]。左旋肉堿(L-carnitine，LC)又名左卡尼汀，是一種氨基酸衍生物，具有抗氧化，抗凋亡，抑制炎癥反應(yīng)[2]及滲透保護(hù)等作用，目前LC已廣泛應(yīng)用于干眼、青光眼、白內(nèi)障等眼部疾病的治療。LC可通過(guò)抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路減少活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生，從而抑制炎癥反應(yīng)[3]，改善氧化應(yīng)激所破壞的微環(huán)境[4]。我們猜想LC在堿燒傷中可能起到一定的作用。我們通過(guò)觀察眼部堿燒傷后應(yīng)用LC角膜上皮修復(fù)的情況，焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，以確定LC在角膜上皮細(xì)胞修復(fù)及調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡的作用，尋找治療眼部堿燒傷的新方法。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1主要實(shí)驗(yàn)試劑L-carnitine試劑(美國(guó)Selleck公司)；RIPA裂解液(北京索萊寶公司)；磷酸酶抑制劑(上海碧云天公司)；NLRP3抗體(MAB7578，美國(guó)R&D公司)；Caspase-1抗體(sc-56036，美國(guó)Santa Cruz公司)；Ki-67(ab16667)、p-STAT3抗體(ab2105，美國(guó)Abcam公司)；IL-1β(A1192)、STAT3抗體(A1192，武漢愛(ài)博泰克公司)；P63抗體(618901，美國(guó)BioLegend公司)；GAPDH抗體(T0004-HRP，美國(guó)Affinity公司)；HRP偶連山羊抗大鼠(S0009)、山羊抗兔(S0001)二抗(美國(guó)Affinity公司)；HRP偶連山羊抗小鼠二抗(AB0102，上海泊灣公司)；熒光偶連抗兔二抗(A-11034，美國(guó)Invitrogen公司)；鹽酸丙美卡因滴眼液(比利時(shí)ALCINE公司)；O.C.T.冷凍切片包埋劑(美國(guó)櫻花公司)；PVDF膜(美國(guó)Millipore公司)。

1.1.2主要實(shí)驗(yàn)儀器光學(xué)顯微鏡(德國(guó)Zeiss公司)；裂隙燈顯微鏡(瑞士Haag-Streit公司)；熒光顯微鏡(日本Nikon公司)；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Bio-Rad公司)；手術(shù)顯微器械(蘇州明仁醫(yī)械公司)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康雄性C57/6J小鼠96只，6～8周齡，體質(zhì)量18～20g，經(jīng)裂隙燈顯微鏡檢查無(wú)眼部疾患，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。小鼠經(jīng)隨機(jī)數(shù)字表法分為PBS組、LC治療組，每組各35只，其余為空白對(duì)照組。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，小鼠飼養(yǎng)條件為正常晝夜交替采光，溫度(25±1)℃，相對(duì)濕度(60±10)%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用遵循國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)山東省眼科研究所倫理審批會(huì)審查，符合倫理學(xué)要求。

1.2方法

1.2.1溶液的配制LC滴眼液：將LC粉劑溶解于PBS緩沖液中，配制成濃度為150mmol/L的保存液，置于-80℃冰箱保存。使用時(shí)用PBS緩沖液稀釋至60mmol/L。

1.2.2角膜堿燒傷模型制作及分組處理隨機(jī)選小鼠取右眼制作堿燒傷模型。造模方法為：按(40～70)mg/kg使用0.6%戊巴比妥鈉溶液行腹腔注射麻醉，術(shù)前0.01%鹽酸丙美卡因滴眼液眼表麻醉，無(wú)菌棉簽拭去多余液體。吸取2μL 1mol/L氫氧化鈉溶液于直徑2.0mm的單層圓形濾紙上，然后迅速貼在小鼠角膜中央40s，0.9% NaCl溶液沖洗40s。術(shù)后小鼠角膜中央均可見(jiàn)一直徑約2.0mm圓形白色混濁，與濾紙片接觸位置對(duì)應(yīng)；熒光素鈉染色可見(jiàn)直徑約2.0mm綠色著色的角膜破損區(qū)域，即眼部堿化學(xué)燒傷建模成功。造模后立即常規(guī)給予氧氟沙星眼膏1次預(yù)防感染?？瞻讓?duì)照組不作任何處理，PBS組、LC組分別給予PBS溶液、60mmol/L LC溶液點(diǎn)眼，自建模前1d開(kāi)始給藥，所有滴眼藥物用量均為每次5μL，每天固定時(shí)間滴眼6次，連續(xù)給藥至取材。

1.2.3角膜上皮缺損面積的統(tǒng)計(jì)每組隨機(jī)選取12只，連續(xù)給藥至建模后第7d，每日裂隙燈顯微鏡觀察各組小鼠眼表情況，并在0h，3、7d用0.25%熒光素鈉觀察角膜上皮缺損面積，并在鈷藍(lán)燈光下拍照。經(jīng)Image J軟件分析熒光素鈉染色面積，計(jì)算殘余角膜上皮缺損占原始缺損面積百分比，即角膜上皮缺損面積比=各時(shí)間點(diǎn)角膜上皮缺損面積/0h缺損面積×100%。

1.2.4角膜上皮組織蛋白提取每組隨機(jī)選取18只小鼠，給藥至建模后第3d，每次實(shí)驗(yàn)6只，重復(fù)3次。用頸椎脫臼法處死小鼠，摘取完整的眼球，在顯微鏡下分離角膜組織，使用上皮刮刀刮取角膜上皮，同組樣本混合置于RIPA裂解液中(PMSF 1∶100、磷酸酶抑制劑1∶50混入)，冰上裂解30min，經(jīng)勻漿、超聲、離心取上清，使用BCA法測(cè)各組蛋白濃度。上清與Loading buffer混均后95℃金屬浴，10min；-80℃保存。

1.2.5 Western blot 配制12.5%的十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)，每孔取15μg總蛋白上樣；電泳完畢后剝離SDS-PAGE膠，蛋白經(jīng)濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至PVDF膜；室溫下使用5% BSA封閉1h，TBST溶液洗滌，分別加入NLRP3(1∶400)、Caspase-1(1∶400)、p-STAT3(1∶1 000)、STAT3(1∶1 000)、P63(1∶1 000)、GAPDH(1∶6 000)一抗，4℃孵育過(guò)夜；經(jīng)PVDF膜TBST溶液洗滌后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的對(duì)應(yīng)二抗(均為1∶6 000)，室溫下孵育1h；TBST溶液洗滌；ECL顯影并拍照。以GAPDH為內(nèi)參，使用Image Lab圖像分析軟件分析各個(gè)蛋白的灰度值。以目的蛋白條帶灰度值與GAPDH表達(dá)灰度值的比值為目的蛋白相對(duì)表達(dá)量，并計(jì)算p-STAT3/STAT3的值。實(shí)驗(yàn)需重復(fù)3次取平均值。

1.2.6免疫熒光染色隨機(jī)選取小鼠建立堿燒傷模型，每組5只，給藥至建模后第3d，頸椎脫臼法處死小鼠，將眼球完整取下，浸入O.C.T.膠中包埋，立即放入-80℃，冰凍切片機(jī)7μm連續(xù)切片。切片室溫放置30min，PBS清洗，4%多聚甲醛溶液固定10min，PBS清洗，0.1% Triton透化5min，PBS清洗，室溫下5% BSA封閉1h，一抗IL-1β(1∶100)、Ki-67(1∶100)4℃孵育過(guò)夜，PBS清洗。室溫下孵育二抗(1∶200)1h，PBS清洗，DAPI染核5min，PBS沖洗后封片，共焦顯微鏡下觀察拍攝。

2結(jié)果

2.1堿燒傷后PBS組及LC組角膜上皮修復(fù)情況的比較PBS組和LC組眼部堿燒傷后即刻可見(jiàn)圓形全角膜熒光素鈉染色。在堿燒傷后3d，LC組小鼠角膜熒光素鈉染色面積明顯縮小，在第7d僅見(jiàn)角膜中央較小面積熒光素鈉著色。同時(shí)間點(diǎn)PBS組小鼠的染色面積均大于LC組，且在第7d角膜中央?yún)^(qū)仍可見(jiàn)較大面積熒光素鈉染色(圖1A)。在堿燒傷后3、7d時(shí)PBS組與LC組比，殘留角膜上皮缺損面積占原始缺損面積的百分比分別為(29.38±6.83)%vs(17.78±4.11)%、(14.23±4.51)%vs(4.10±2.10)%，組別和時(shí)間點(diǎn)存在交互作用，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0001，圖1B，表1)。在各自時(shí)間點(diǎn)LC組比PBS組上皮缺損面積更小(P<0.01)。結(jié)果表明與PBS組比，LC組的角膜上皮修復(fù)速度更快。

圖1 PBS組及LC組堿燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)角膜上皮損傷面積變化的比較 A：堿燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)各組小鼠角膜熒光素鈉染色；B：堿燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)各組小鼠角膜熒光素鈉染色面積結(jié)果。bP<0.01 vs LC組。

表1 堿燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)各組小鼠角膜熒光素鈉染色的廣義估計(jì)方程分析

2.2各組角膜上皮中NLRP3和Caspase-1蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比，堿燒傷3d后，PBS組與LC組角膜上皮內(nèi)的焦亡通路被激活，組織中NLRP3和Caspase-1蛋白的前體及成熟體表達(dá)條帶均明顯增強(qiáng)。與PBS組比，LC組NLRP3、pro Caspase-1、cleaved Caspase-1蛋白表達(dá)條帶量均降低?？瞻讓?duì)照組、PBS組和LC組細(xì)胞中NLRP3表達(dá)量相對(duì)值分別為0.741±0.106、2.579±0.218、0.987±0.100；pro Caspase-1相對(duì)表達(dá)量分別為5.374±1.604、12.589±2.515、8.119±0.138；cleaved Caspase-1相對(duì)表達(dá)量分別為0.907±0.312、1.667±0.199、1.164±0.118。各蛋白三組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(NLRP3：F=23.22，P<0.01；pro Caspase-1：F=13.39，P<0.01；cleaved Caspase-1：F=8.910，P<0.01)。各組間兩兩比較，除cleaved Caspase-1空白對(duì)照組與LC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。小鼠角膜免疫熒光染色結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，PBS組和LC組全角膜IL-1β熒光強(qiáng)度均增強(qiáng)；與PBS組比較，LC組全角膜包括角膜上皮中IL-1β熒光強(qiáng)度顯著減弱，見(jiàn)圖2。

圖2 堿燒傷后3d各組角膜上皮中NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表達(dá) A：堿燒傷后3d各組角膜上皮NLRP3、Caspase-1、GAPDH蛋白表達(dá)電泳圖；B、C、D：分別為堿燒傷后3d各組角膜上皮中NLRP3、pro Caspase-1、cleaved Caspase-1蛋白表達(dá)量比較。aP<0.05 vs空白對(duì)照組；cP<0.05, dP<0.01 vs PBS組；E：免疫熒光染色(IF)顯示堿燒傷后3d各組角膜上皮中IL-1β蛋白表達(dá)。綠色熒光為IL-1β陽(yáng)性，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核。

2.3各組小鼠角膜上皮干/祖細(xì)胞增生情況Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比，堿燒傷后各組小鼠角膜上皮中的P63表達(dá)水平顯著下降；與PBS組比，LC組角膜上皮中有更高的P63蛋白表達(dá)?？瞻讓?duì)照組、PBS組和LC組細(xì)胞中P63的相對(duì)表達(dá)量分別為1.713±0.307、0.528±0.185和1.003±0.095，三組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.22，P<0.01)；與空白對(duì)照組比，PBS組、LC組的P63蛋白表達(dá)均降低(P<0.05)；LC組細(xì)胞中P63蛋白表達(dá)條帶強(qiáng)于PBS組(P<0.05)。免疫熒光染色結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，PBS組與LC組小鼠角鞏膜緣Ki-67熒光強(qiáng)度明顯升高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加；與PBS組比較，LC組Ki-67蛋白熒光強(qiáng)度更高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，見(jiàn)圖3。

圖3 堿燒傷后3d各組角膜上皮中P63、Ki-67蛋白表達(dá)情況 A：堿燒傷后3d各組角膜上皮P63、GAPDH蛋白表達(dá)電泳圖；B：堿燒傷后3d各組角膜上皮中P63蛋白表達(dá)量比較結(jié)果。aP<0.05 vs LC組; dP<0.01 vs 空白對(duì)照組；C：免疫熒光染色(IF)顯示堿燒傷后3d各組角膜上皮中Ki-67蛋白表達(dá)。綠色熒光為Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核。

2.4各組角膜上皮中p-STAT3/STAT3的相對(duì)表達(dá)量變化Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比，堿燒傷后各組小鼠角膜上皮中的STAT3活化水平顯著上調(diào)；與PBS組比，LC組STAT3活化水平更高?？瞻讓?duì)照組、PBS組和LC組細(xì)胞中p-STAT3與STAT3蛋白的比值分別為0.391±0.301、2.836±0.724、4.299±0.278，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=50.68，P<0.01)；用LSD-t檢驗(yàn)兩兩比較，與空白對(duì)照組比較，堿燒傷后第3d，PBS組與LC組角膜上皮中STAT3蛋白磷酸化水平明顯升高(P<0.01)；與PBS組比，LC組STAT3磷酸化水平更高(P<0.05)，見(jiàn)圖4。

圖4 堿燒傷后3d各組角膜上皮中p-STAT3與STAT3蛋白的比值 A：堿燒傷后3d各組角膜上皮p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)電泳圖；B：堿燒傷后3d各組角膜上皮中NLRP3蛋白表達(dá)量比較。aP<0.05 vs PBS組，dP<0.01 vs空白對(duì)照組。

3討論

眼部堿化學(xué)燒傷是一種復(fù)雜的眼外傷，堿性物質(zhì)與組織發(fā)生皂化反應(yīng)，溶解組織中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，受損的組織細(xì)胞可以釋放蛋白水解酶，并逐漸向眼內(nèi)滲透，對(duì)眼球造成進(jìn)一步損害。重癥堿燒傷可致角膜穿孔、瞼球黏連、干眼、繼發(fā)性青光眼、并發(fā)白內(nèi)障或眼球萎縮等，造成嚴(yán)重的視力損害。

堿燒傷后炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并產(chǎn)生大量炎癥因子,如白介素-6(interleukin-6，IL-6)、IL-1β、IL-10、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)，炎癥反應(yīng)劇烈，加劇眼部損害[5]。此時(shí)眼表處于高滲、重度炎癥反應(yīng)的微環(huán)境，極不利于角膜上皮的修復(fù)。因此抑制炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及血管新生對(duì)減輕堿燒傷所致角膜損傷程度、改善角膜透明度具有重要價(jià)值。

細(xì)胞焦亡是一種介導(dǎo)無(wú)菌性炎癥的程序性死亡程序。在各種信號(hào)刺激下，細(xì)胞內(nèi)的模式識(shí)別受體識(shí)別這些信號(hào)，以凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(ASC)為接頭蛋白與半胱天冬酶-1(Caspase-1)的前體結(jié)合，形成炎性小體，使Caspase-1活化。活化的Caspase-1一方面切割Gasdermin D，形成含有Gasdermin D氮端活性域的肽段，氮端同源集聚形成貫穿于質(zhì)膜的親水性孔道，膜的完整性被破壞，無(wú)機(jī)小分子選擇性通過(guò)使細(xì)胞逐漸膨脹至破裂，釋放出內(nèi)容物如IL-1β、IL-18，引起炎癥反應(yīng)；另一方面，活化的Caspase-1切割I(lǐng)L-1β和IL-18的前體，形成并釋放有活性的IL-1β和IL-18至胞外，募集炎癥細(xì)胞，擴(kuò)大炎癥反應(yīng)。

ATP[6]、自噬[7]、ROS[8]及某些金屬離子[9]均可引起炎性小體的活化及細(xì)胞焦亡。有研究表明在小鼠堿燒傷模型中NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-1β通路介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡被激活，應(yīng)用NLRP3抑制劑阻斷該通路可抑制NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)角膜上皮修復(fù)，改善角膜的透明度[9]。IL-1β是參與堿燒傷后炎癥反應(yīng)的一個(gè)重要的前炎癥因子，且IL-1β的表達(dá)量與堿燒傷后炎癥反應(yīng)正相關(guān)[5]。IL-1β和TNF-α可以促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的表達(dá)，進(jìn)而降解角膜膠原纖維，導(dǎo)致角膜變薄甚至引起穿孔[10]。還有研究表明受IL-1β、TNF-α刺激時(shí)，角膜緣干細(xì)胞的增殖能力下降。因此降低IL-1β的表達(dá)，有利于堿燒傷后角膜的恢復(fù)[11]。

有研究表明，在激活NLRP3炎性小體和IL-1β分泌中，ROS有決定性作用[12-13]，還有研究表明高滲應(yīng)激誘導(dǎo)的干眼與人角膜上皮細(xì)胞(human corneal epithelial cells，HCECs)中ROS激活的NLRP3炎性小體介導(dǎo)誘導(dǎo)的ROS-NLRP3-IL-1β軸的激活相關(guān)，ROS水平升高對(duì)NLRP3表達(dá)有相應(yīng)的影響，而NLRP3表達(dá)可觸發(fā)先天免疫反應(yīng)，NLRP3表達(dá)量也與干眼疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)[14]。堿燒傷時(shí)，組織釋放出大量ROS[15]。LC已被證實(shí)可降低ROS水平，減少氧化應(yīng)激來(lái)提高體外胚胎的存活能力[16]。另外LC可以激活高血糖條件下的抗氧化信號(hào)通路，增加抗氧化蛋白SOD2的表達(dá)，防止ROS的形成，促進(jìn)STAT3活化，來(lái)保護(hù)心肌細(xì)胞免受氧化應(yīng)激相關(guān)損傷[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，LC通過(guò)抑制抗氧化酶的下降和抑制ROS的產(chǎn)生來(lái)保護(hù)HCECs免受氧化應(yīng)激[17]。有研究表明LC的酯化物乙酰左旋肉堿可降低非酒精性脂肪肝小鼠的肝細(xì)胞焦亡水平[18]；LC可降低慢性他克莫司腎病大鼠腎組織的焦亡水平，促進(jìn)細(xì)胞的存活[19]。我們猜想LC可以通過(guò)抑制ROS生成進(jìn)一步影響細(xì)胞焦亡的水平。有研究表明，在小鼠堿燒傷模型中細(xì)胞焦亡在建模后第2d升高，第5d降低[9]，為了證明LC對(duì)細(xì)胞的焦亡作用，我們檢測(cè)了堿燒傷后3d時(shí)與焦亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。與Zheng等[19]的結(jié)果一致，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與PBS組比，LC組NLRP3、Caspase-1、IL-1β水平均有所下降，可以證實(shí)在堿燒傷模型中，LC可降低細(xì)胞焦亡水平，從而減輕炎癥反應(yīng)對(duì)角膜的損害。

有研究表明，外源性給予LC可顯著促進(jìn)肝部分切除大鼠的肝細(xì)胞再生[20]、促進(jìn)新生豬小腸上皮細(xì)胞的增殖[21]。與他們的結(jié)果一致，在本研究中，我們對(duì)堿燒傷后0h，3、7d角膜上皮缺損面積進(jìn)行分析，結(jié)果表明，各時(shí)間點(diǎn)LC組角膜上皮恢復(fù)均早于PBS組。因角膜上皮修復(fù)在建模后前3d更為顯著，我們?cè)诮：蟮?d取材。角膜上皮組織中Ki-67的免疫熒光與P63 Western blot結(jié)果表明，與PBS組比，LC組角膜上皮中干細(xì)胞增殖能力的Ki-67蛋白與角膜緣干細(xì)胞干性標(biāo)志物P63蛋白的表達(dá)水平均上調(diào)，說(shuō)明LC可促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞的存活與增殖，有助于角膜上皮的修復(fù)。

STAT3是一種轉(zhuǎn)錄因子，STAT3磷酸化被激活，進(jìn)入細(xì)胞核，引起細(xì)胞核內(nèi)凋亡、增殖、遷移相關(guān)基因的表達(dá)[22]，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)干細(xì)胞存活、增殖、遷移、活化，抑制干細(xì)胞調(diào)亡，維持干細(xì)胞的自我更新等作用[23-24]。最近的研究表明睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)角膜上皮干細(xì)胞/祖細(xì)胞活化和創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用是通過(guò)STAT3的活化介導(dǎo)的[25]。IL-6參與正常和糖尿病小鼠角膜上皮修復(fù)的過(guò)程，這一作用通過(guò)激活STAT3信號(hào)通路促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞的活化和增生來(lái)實(shí)現(xiàn)[26]。另有研究表明JAK/STAT3信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)了細(xì)胞增殖、凋亡、分化等多種生理過(guò)程，當(dāng)該通路被激活時(shí)，可進(jìn)一步調(diào)控其下游相關(guān)基因如Ki-67、p53等的表達(dá)[27-28]。另外在角膜緣處的STAT3的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位水平高于角膜中央，可通過(guò)調(diào)節(jié)ΔNp63的表達(dá)水平來(lái)調(diào)控角膜緣干細(xì)胞的增殖及分化狀態(tài)[29]。在眼部堿燒傷模型中，角膜損傷部位的角膜上皮缺損及其再生是重要的病理生理反應(yīng)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，堿燒傷后的前3d小鼠角膜上皮快速修復(fù)，此時(shí)角膜上皮細(xì)胞的增生最為顯著，因此我們給藥至第3d取材，檢測(cè)STAT3的磷酸化水平。與Vacante等[4]的結(jié)論一致，結(jié)果表明，與PBS組比，LC組STAT3磷酸化水平升高，我們推測(cè)LC可通過(guò)激活STAT3來(lái)促進(jìn)角膜上皮修復(fù)。

綜上所述，堿燒傷后給予左旋肉堿滴眼液可通過(guò)抑制細(xì)胞焦亡來(lái)減輕炎癥反應(yīng)，通過(guò)STAT3信號(hào)通路的活化來(lái)促進(jìn)堿燒傷后角膜上皮的修復(fù)。