徐 睿，劉 闖，張瀟月，周國(guó)英，劉君昂

（1.河南林業(yè)職業(yè)學(xué)院 森林保護(hù)系，河南 洛陽(yáng) 471002；2.中南林業(yè)科技大學(xué)a.南方人工林病蟲害防控國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.森林有害生物防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410004）

油茶Camellia oleifera是山茶科Theaceae 山茶屬Camellia常綠小喬木，為中國(guó)南方重要的木本油料樹(shù)種，擁有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值、食用價(jià)值和藥用價(jià)值[1]。目前，中國(guó)的油茶種植面積約為367 萬(wàn)hm2，種質(zhì)資源極為豐富，主要產(chǎn)區(qū)包括湖南、福建、江西、廣東、廣西、浙江等18 個(gè)?。▍^(qū)）。以油茶籽制備的山茶油含有豐富的油酸等不飽和脂肪酸，是一種理想的健康食用植物油，非常適于患有心臟病、血管硬化、高血壓等病癥的人群食用[2]。近年來(lái)油茶種植面積持續(xù)增長(zhǎng)，在各大油茶產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生各種病害，炭疽病是較為重要的病害之一，嚴(yán)重影響了油茶的產(chǎn)量及品質(zhì)[3]。炭疽屬真菌是一類在全世界分布極其廣泛的重要病原菌，屬于半活體營(yíng)養(yǎng)型真菌。油茶炭疽病的病原菌涵蓋了炭疽屬的多個(gè)種，由于不同種的形態(tài)特征十分相似，僅靠菌落、分生孢子和附著胞等的形態(tài)學(xué)特征難以區(qū)分炭疽屬真菌的種類，因此，目前主要是采用綜合形態(tài)學(xué)特征和多基因分子序列信息的方法來(lái)鑒定。根據(jù)研究報(bào)道，油茶炭疽病原菌有8 種，分別是油茶果生炭疽菌Colletotrichum fructicola、膠孢炭疽菌C.gloeosporioides、山茶炭疽菌C.camelliae、暹羅炭疽菌C.siamense、喀斯特炭疽菌C.karstii、哈銳炭疽菌C.horii、君子蘭炭疽菌C.cliνiae和博寧炭疽菌C.boninense，其中油茶果生炭疽菌在我國(guó)多地油茶炭疽病的病原菌中均有發(fā)現(xiàn)，且分離率高，為油茶炭疽病的優(yōu)勢(shì)致病菌[4-8]。

目前，對(duì)于油茶病害的主要防治措施是化學(xué)防治。使用化學(xué)農(nóng)藥防治油茶炭疽病，雖然能快速降低損失，但由于油茶炭疽病病原菌具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，容易引起油茶炭疽病病原菌抗藥性的產(chǎn)生[9]。大劑量使用化學(xué)農(nóng)藥不僅會(huì)嚴(yán)重污染生態(tài)環(huán)境，還使茶油內(nèi)的農(nóng)藥殘留量增加，降低茶油的品質(zhì)，影響油茶產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[10]。隨著人們綠色環(huán)保意識(shí)越來(lái)越強(qiáng)烈，世界各國(guó)對(duì)生物防治越來(lái)越關(guān)注，生物防治藥劑的市場(chǎng)需求與日俱增，研究者不斷開(kāi)展研發(fā)工作，試圖生產(chǎn)出安全環(huán)保、高效、可持續(xù)發(fā)展的生防制品。尋求安全、低毒、高效的油茶病害防治手段也受到普遍關(guān)注[11]。近年來(lái)，我國(guó)研究人員開(kāi)始考慮從微生物或植物中尋找對(duì)油茶炭疽病有防治功能的生物農(nóng)藥，篩選和利用拮抗微生物可以成為防治油茶炭疽病研究的新方向[12]。周盈等[13]報(bào)道了1 種對(duì)胡蘿卜軟腐歐文氏菌具有抑菌活性的枯草芽孢桿菌BSn5 及其產(chǎn)生的抑菌蛋白APn5，但該菌僅能拮抗胡蘿卜軟腐歐文氏菌亞種，其生防范圍較窄。宋光桃[14]發(fā)現(xiàn)短芽孢桿菌Z26 能有效抑制油茶炭疽病病菌、根腐病病菌、半邊瘋病菌等病原菌的生長(zhǎng)，該生防菌劑對(duì)油茶炭疽病的最大抑制率達(dá)到83.4%。

為給油茶炭疽病防治提供更加準(zhǔn)確的解決途徑，本研究中分析了2 株生防菌對(duì)5 種油茶炭疽菌的抑菌活性。

1 材料與方法

1.1 材 料

生防菌：枯草芽孢桿菌Bacillus subtilisYL13，由油茶內(nèi)生菌誘變獲得，保存于微生物菌種保藏中心。球孢鏈霉菌球孢亞種St.globisporussubsp.globisporusF10，分離自攸縣油茶示范基地土壤，保存于河南林業(yè)職業(yè)學(xué)院微生物菌種保藏中心。

病原菌：膠孢炭疽菌、果生炭疽菌、暹羅炭疽菌、山茶炭疽菌、哈銳炭疽菌由河南林業(yè)職業(yè)學(xué)院微生物菌種保藏中心提供。

培養(yǎng)基：NA 培養(yǎng)基配方為蛋白胨10 g、牛肉膏5 g、NaCl 5 g、瓊脂18 g、水1 000 mL；NB 培養(yǎng)液配方為蛋白胨10 g、牛肉膏5 g、NaCl 5 g、水1 000 mL；PDA 培養(yǎng)基配方為土豆200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g；高氏1 號(hào)培養(yǎng)基配方為可溶性淀粉20 g、KNO31 g、K2HPO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、NaCl 0.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g、瓊脂20 g、水1 000 mL；YL13 培養(yǎng)基配方為蔗糖11 g、牛肉膏16 g、NaCl 4 g；F10 培養(yǎng)液配方為酵母粉5 g、葡萄糖10 g、KH2PO41 g、NaCl 1 g、CaCO33 g、水1 000 mL。

1.2 方 法

1.2.1 拮抗菌發(fā)酵濾液制作

YL13 發(fā)酵液：采用發(fā)酵法，將實(shí)驗(yàn)室保藏的YL13 菌種在NA 培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)2 d 后，用接菌環(huán)移取1 環(huán)，置入裝有20 mL NB 培養(yǎng)液的50 mL 三角瓶中，在搖床（30 ℃、160 r/min）上振蕩培養(yǎng)36 h 制成種子液，按6%的接種量接種至裝有50 mL YL13 培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中，在搖床（30 ℃、170 r/min）上振蕩培養(yǎng)36 h，制成發(fā)酵液。

F10 發(fā)酵液：采用發(fā)酵法，將實(shí)驗(yàn)室保藏的F10 菌種在高氏1 號(hào)培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)7 d 后，用接菌環(huán)移取直徑為6 mm 的F10 菌餅，置入裝有100 mL 高氏1 號(hào)培養(yǎng)液的300 mL 三角瓶中，在搖床（30 ℃、160 r/min）上振蕩培養(yǎng)5 d制成種子液，按10%的接種量接種至裝有100 mL F10 培養(yǎng)基的300 mL 三角瓶中，在搖床（30 ℃、140 r/min）上振蕩培養(yǎng)7 d，制成發(fā)酵液[15]。

將2 種拮抗菌發(fā)酵液分別用0.22 μm 細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾，得到拮抗菌發(fā)酵濾液。

1.2.2 拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌的抑菌活性測(cè)定

將拮抗菌發(fā)酵濾液和約50 ℃的PDA 培養(yǎng)基按體積比1∶19 混勻后倒入培養(yǎng)皿中，冷卻后在平板中央分別放入直徑為6 mm 的5 種炭疽菌（膠孢炭疽菌、果生炭疽菌、暹羅炭疽菌、山茶炭疽菌、哈銳炭疽菌）菌餅。5 d 后測(cè)量病菌菌落直徑，每處理3 個(gè)重復(fù)，以無(wú)菌水為空白對(duì)照。抑菌效果用抑菌率（R抑）表示。

R抑=[(d0-d)/(d0-6)]×100%。

式中：d0為對(duì)照菌落直徑，d為處理菌落直徑。

1.2.3 拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種的效價(jià)測(cè)定

將拮抗菌發(fā)酵濾液與約50 ℃的PDA 培養(yǎng)基按1∶19、1∶39、1∶99、1∶399、1∶999 的體積比混勻，倒入培養(yǎng)皿中，冷卻后備用。用6 mm 的打孔器在已經(jīng)培養(yǎng)好的果生炭疽菌、膠孢炭疽菌培養(yǎng)基上打取菌絲塊，接種于放置1 d 的培養(yǎng)基上，5 d 后測(cè)量病菌菌落直徑，每處理3 個(gè)重復(fù)，以無(wú)菌水為空白對(duì)照。抑菌效果用抑菌率（R抑）表示。

1.2.4 拮抗菌對(duì)離體葉片油茶炭疽菌的防治效果測(cè)定

選取健康且大小一致的2年生‘湘林1 號(hào)’油茶葉片作為接種對(duì)象，用75%酒精將葉片消毒30 s，再用無(wú)菌水將葉片清洗3 次后晾干，使用一次性注射器針頭將葉片背面表皮挑破但不刺穿，每葉片挑破1處，置于鋪有滅菌吸水紙的培養(yǎng)皿中。預(yù)防試驗(yàn)處理（處理1～5）為先噴葉接種拮抗菌，然后分別于接種1、2、3、4、5 d 后將果生炭疽菌的菌絲塊接于葉片剌傷處；治療試驗(yàn)處理（處理6～8）為先將果生炭疽菌的菌絲塊接于葉片剌傷處，然后分別于接種2、3、4 d 后噴葉接種拮抗菌。

2 種拮抗菌各進(jìn)行8 組處理，以僅接種果生炭疽菌菌絲的葉片作為對(duì)照（CK），每處理接種10片，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)保濕培養(yǎng)，光照周期為12 h 光照、12 h 黑暗，逐天連續(xù)觀察并記錄葉片發(fā)病情況。

R病=[(N病-N總)/N總]×100%。

式中：R病為發(fā)病率，N病為發(fā)病葉片數(shù)，N總為總?cè)~片數(shù)。

R防=[(R0-R1)/R0]×100%。

式中：R防表示防治效果，R0為對(duì)照發(fā)病率，R1為處理發(fā)病率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2003 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌的抑制效果

拮抗菌發(fā)酵濾液處理下5 種油茶炭疽菌的菌落生長(zhǎng)情況如圖1所示。由圖1可以看出，2 種拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)5 種炭疽菌的菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用。拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)5 種油茶炭疽菌的具體抑制效果見(jiàn)表1。由表1可知，2 種拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)膠孢炭疽菌的抑制效果均為最好，抑制率分別為83.46%、62.20%，對(duì)山茶炭疽菌的抑制率均為最低，分別為49.15%、30.99%。經(jīng)比較得出，在稀釋20 倍時(shí)，YL13 發(fā)酵濾液對(duì)5 種炭疽菌的抑制效果由強(qiáng)到弱依次為膠孢炭疽菌、暹羅炭疽菌、果生炭疽菌、哈銳炭疽菌、山茶炭疽菌，F(xiàn)10 發(fā)酵濾液對(duì)5 種炭疽菌的抑制效果由強(qiáng)到弱依次為膠孢炭疽菌、果生炭疽菌、哈銳炭疽菌、暹羅炭疽菌、山茶炭疽菌。

圖1 拮抗菌發(fā)酵濾液處理下5 種油茶炭疽菌菌落的生長(zhǎng)情況Fig.1 The growth of five species of C.oleifera anthracis colonies under the treatment of antagonistic antibacterial fermentation filtrate

表1 拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)5 種油茶炭疽菌的抑制效果Table 1 Inhibitory effect of antagonistic antibacterial fermentation filtrate on five species of C.oleifera anthracis

2.2 拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種的效價(jià)

不同濃度拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種的抑菌率見(jiàn)表2。由表2可知，2 種拮抗菌對(duì)2種油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種膠孢炭疽菌和果生炭疽菌的抑菌率均隨著拮抗菌發(fā)酵濾液稀釋倍數(shù)的增加而降低。

表2 不同濃度拮抗菌發(fā)酵濾液對(duì)油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種的抑菌率Table 2 Inhibition rate of different concentrations of antagonistic antibacterial fermentation filtrate on dominant species of C. anthracis

當(dāng)YL13 發(fā)酵濾液稀釋至20 倍時(shí)，其對(duì)膠孢炭疽菌的抑菌率高達(dá)83.46%，對(duì)果生炭疽菌的抑菌率相對(duì)較低（66.33%），但當(dāng)稀釋倍數(shù)增大，YL13 對(duì)膠孢炭疽菌的拮抗效果下降速度要快于對(duì)果生炭疽菌的拮抗效果，當(dāng)YL13 發(fā)酵濾液稀釋至40 倍時(shí)，YL13 發(fā)酵濾液對(duì)果生炭疽菌的抑菌率便超過(guò)了其對(duì)膠孢炭疽菌的抑菌率。當(dāng)YL13 發(fā)酵濾液稀釋至100 倍時(shí)，其對(duì)膠孢炭疽菌的抑制率降低至49.21%。因此可推測(cè)YL13 發(fā)酵濾液對(duì)膠孢炭疽菌的效價(jià)約為100 倍。當(dāng)YL13 發(fā)酵濾液稀釋至400 倍時(shí)，其對(duì)果生炭疽菌的抑菌率為52.86%，當(dāng)稀釋至1 000 倍時(shí)，其對(duì)果生炭疽菌的抑菌率下降至49.07%。因此可推測(cè)，YL13 發(fā)酵濾液對(duì)果生炭疽菌的效價(jià)約為400 倍。不同濃度YL13 發(fā)酵濾液處理下油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種菌落的生長(zhǎng)情況如圖2所示。

圖2 不同濃度YL13 發(fā)酵濾液處理下油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種菌落的生長(zhǎng)情況Fig.2 Growth of dominant species of C.anthracis in different concentrations of YL13 fermentation filtrate

F10 發(fā)酵濾液對(duì)膠孢炭疽菌和果生炭疽菌的抑制率相差不大。當(dāng)F10 發(fā)酵濾液稀釋至20 倍時(shí)，其對(duì)膠孢炭疽菌、果生炭疽菌的抑菌率分別為62.20%、61.28%。當(dāng)F10 發(fā)酵濾液稀釋至40 倍時(shí)，對(duì)膠孢炭疽菌、果生炭疽菌的抑菌率下降幅度相似，抑菌率分別為52.76%、55.39%，同樣當(dāng)F10 發(fā)酵濾液稀釋至100 倍時(shí)，其對(duì)膠孢炭疽菌、果生炭疽菌的抑菌率分別為39.76%、38.97%。因此可以得出，F(xiàn)10 發(fā)酵濾液對(duì)膠孢炭疽菌、果生炭疽菌的效價(jià)均約為40 倍。不同濃度F10 發(fā)酵濾液處理下油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種菌落的生長(zhǎng)情況如圖3所示。

圖3 不同濃度F10 發(fā)酵濾液處理下油茶炭疽菌優(yōu)勢(shì)種菌落的生長(zhǎng)情況Fig.3 Growth of dominant species of C.anthracis in different concentrations of F10 fermentation filtrate

2.3 拮抗菌對(duì)離體葉片上油茶炭疽菌的防治效果

拮抗菌離體接種對(duì)油茶炭疽病的防治效果見(jiàn)表3。由表3可知，在離體葉片上拮抗菌株對(duì)油茶炭疽病均有一定的防治效果。在接種YL13 菌株2 d 后再接種病原菌的預(yù)防效果最好，達(dá)到了60%，F(xiàn)10 菌株對(duì)油茶炭疽病的預(yù)防和治療均是拮抗菌與病原菌相隔1 d 接種效果最佳，防治效果均達(dá)到了70%。

表3 拮抗菌離體接種對(duì)油茶炭疽病的防治效果Table 3 Prevention and control of anthracnose of C.oleifera by inoculation of YL13/F10 %

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌YL13 的發(fā)酵濾液對(duì)5 種炭疽菌的抑制效果由強(qiáng)到弱依次為膠孢炭疽菌、暹羅炭疽菌、果生炭疽菌、哈銳炭疽菌、山茶炭疽菌，鏈霉菌F10 的發(fā)酵濾液對(duì)5 種炭疽菌的抑制效果由強(qiáng)到弱依次為膠孢炭疽菌、果生炭疽菌、哈銳炭疽菌、暹羅炭疽菌、山茶炭疽菌，YL13 和F10 對(duì)膠孢炭疽菌的抑制效果均為最佳，抑制率分別為83.46%、62.20%，對(duì)山茶炭疽菌抑制率均最低，分別為49.15%、30.99%。YL13 發(fā)酵濾液對(duì)膠孢炭疽菌的效價(jià)約為100 倍，對(duì)果生炭疽菌的效價(jià)約為400 倍，F(xiàn)10 發(fā)酵液對(duì)膠孢炭疽菌和果生炭疽菌的效價(jià)均約為40 倍。2 株拮抗菌對(duì)5 種炭疽菌均具有較為明顯的抑制作用，其中YL13 表現(xiàn)出抑菌活性最高，其發(fā)酵濾液稀釋20 倍后對(duì)膠孢炭疽菌的抑制率高達(dá)83.46%，當(dāng)2種拮抗菌的發(fā)酵濾液稀釋至一定濃度后，抑菌率均發(fā)生了不同程度的降低。隨著稀釋倍數(shù)的增大，YL13 的抑菌活性降低速率遠(yuǎn)超過(guò)F10。在離體葉片上拮抗菌株對(duì)油茶炭疽病均有一定的防治效果，在接種YL13 菌株2 d 后再接種病原菌的預(yù)防效果最好，達(dá)到了60%，F(xiàn)10 菌株對(duì)油茶炭疽病的預(yù)防和治療均是拮抗菌與病原菌相隔1 d 接種效果最佳，防治效果均達(dá)到了70%。

自人類發(fā)現(xiàn)可以用微生物來(lái)防治植物病害，已有許多高效拮抗菌株被報(bào)道[16-17]，各類生防菌劑也不斷被開(kāi)發(fā)。微生物主要通過(guò)產(chǎn)生拮抗物質(zhì)及競(jìng)爭(zhēng)、溶菌作用，在寄主植物上對(duì)病原菌作用，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性及促進(jìn)植物生長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)拮抗菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行深入分析，結(jié)果表明芽孢桿菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)主要有細(xì)菌素、酶類、活性蛋白類、脂肽類及多肽類物質(zhì)等[18]，鏈霉菌可以產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，還產(chǎn)生許多其他生物活性物質(zhì)，如免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)、酶制劑、藥理活性物質(zhì)、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等[19]。本研究中使用的2 株炭疽病拮抗菌分別為枯草芽孢桿菌YL13 和球孢鏈霉菌球孢亞種F10，YL13 是由健康油茶葉中分離出的拮抗菌Y13 誘變而來(lái)，F(xiàn)10 是從油茶根際土壤分離得到的，2 種菌均由中南林業(yè)科技大學(xué)森林保護(hù)和微生物研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行過(guò)初步的拮抗試驗(yàn)，均具有良好的抑菌效果[20-23]。前期研究結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌YL13 是通過(guò)分泌蛋白酶、脂肽類物質(zhì)來(lái)影響病原菌菌絲的生長(zhǎng)，還可通過(guò)分泌相關(guān)防御酶誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性來(lái)防治油茶炭疽?。绘溍咕鶩10 是通過(guò)分泌蛋白酶和纖維素酶來(lái)影響油茶炭疽菌細(xì)胞壁的形成，從而抑制其菌絲的生長(zhǎng)[24]。此研究結(jié)果為開(kāi)展2 株拮抗生防菌對(duì)油茶炭疽病多種病原的抑菌活性及防效研究提供了良好的理論基礎(chǔ)。

除了從自然界分離篩選得到生防菌，還可通過(guò)與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配、與其他拮抗微生物相互協(xié)同使用、誘變或利用基因工程技術(shù)改良生防菌等方式，得到更為高效且穩(wěn)定的菌株。其中，基因工程改良菌種主要通過(guò)誘變、DNA 重組、原生質(zhì)體融合及準(zhǔn)性生殖來(lái)實(shí)現(xiàn)，是目前研究的熱點(diǎn)。張霞等[25]通過(guò)轉(zhuǎn)座子Tn917 的轉(zhuǎn)座誘變，構(gòu)建了枯草芽孢桿菌B931 的突變體庫(kù)，篩選得到了6 個(gè)對(duì)小麥全蝕病菌抑制能力喪失且產(chǎn)生生長(zhǎng)素、赤霉素、細(xì)胞分裂素能力增加的突變體。朱海霞等[26]以對(duì)野麥有強(qiáng)致病力的菌株Fusarium oatroseGD-2和TrichodermaHZ-31 作為親本，進(jìn)行原生質(zhì)體融合，得到融合子，盆栽致病力測(cè)定結(jié)果顯示，融合子R1 對(duì)野燕麥的防效值高于親本。將生防菌與其他互融的拮抗微生物共同施用，使之發(fā)揮相互協(xié)同作用，增強(qiáng)混合菌株的競(jìng)爭(zhēng)力，也是目前改進(jìn)生防菌劑效果的常用方式。此外，生防菌不僅可用于防治植物病害，還可在醫(yī)藥、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

本研究中得出了2 種拮抗菌對(duì)2 種炭疽菌優(yōu)勢(shì)種的效價(jià)及其對(duì)5 種炭疽菌的拮抗能力，但是由于目前尚未深入了解2 種拮抗菌的具體抑菌機(jī)制，且不同炭疽菌的菌絲生長(zhǎng)速率相差較大，在一定程度上影響了其相對(duì)抑菌率，因此，應(yīng)更加深入地對(duì)其產(chǎn)生拮抗作用的抑菌物質(zhì)、抑菌機(jī)制等進(jìn)行探究。另外，可以對(duì)不同地區(qū)的炭疽菌優(yōu)勢(shì)種進(jìn)行調(diào)查，有針對(duì)性地施用菌劑，達(dá)到精準(zhǔn)施藥的目的。目前，微生物防治在實(shí)際應(yīng)用中仍存在許多問(wèn)題。在田間施用時(shí)，由于受到生存環(huán)境如溫度、濕度、光照、pH 等因素的影響，大多生防菌的效用不穩(wěn)定，因此目前多數(shù)生防菌處于無(wú)法推廣使用的狀態(tài)，因此應(yīng)進(jìn)一步探究微生物菌劑的田間施用效果。