施宇博，龐維鵬，孔 博，錢(qián)常歡，方素芳，崔 平

（河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北張家口075000）

雞脂肪肝出血綜合征（fatty liver hemorrhagic syndrome，F(xiàn)LHS）是由雞肝臟脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂引起肝臟的脂肪過(guò)度堆積和肝出血的一種營(yíng)養(yǎng)代謝病[1]，嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)。外源注射雌激素與28 d的高脂日糧復(fù)合誘導(dǎo)，可有效建立FLHS模型雞，F(xiàn)LHS雞病理變化表現(xiàn)明顯[2-4]。水飛薊素是水飛薊的提取物，具有抗氧化抗炎、免疫調(diào)節(jié)以及降血脂的功能。目前，水飛薊素常用于各種肝膽疾病的治療和預(yù)防[5-6]。本試驗(yàn)以北京油雞為研究對(duì)象，通過(guò)建立FLHS模型，使用不同劑量水飛薊素來(lái)預(yù)防FLHS，檢測(cè)血清生化指標(biāo)、肝臟出血指數(shù)、肝總脂含量和FLHS發(fā)生率，從而觀察水飛薊素對(duì)FLHS是否有預(yù)防效果，并初步研究討論其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

TG16G臺(tái)式離心機(jī)（天津廣豐科技有限公司）、DP8018VET全自動(dòng)生化分析儀（廣州東唐電子科技有限公司）、YD－12P生物組織全自動(dòng)脫水機(jī)（金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司）、DHG－9070AS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（江南玻璃儀器有限公司）。

甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）試劑盒購(gòu)自上?？婆d商貿(mào)有限公司；苯甲酸雌二醇注射液購(gòu)自博萊藥業(yè)；水飛薊素購(gòu)自西安惠豐生化股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

50只體重相近的1周齡北京油雞預(yù)飼7 d后，將其隨機(jī)分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)2只雞。FLHS模型組（A組）每天飼喂高脂日糧，肌肉注射2.5 mL/kg雌激素，每周3次；水飛薊素低劑量組（B1組）飼喂高脂日糧，水飛薊素按50 mg/kg拌料給藥；水飛薊素中劑量組（B2組）飼喂高脂日糧，水飛薊素按100 mg/kg拌料給藥；水飛薊素高劑量組（B3組）飼喂高脂日糧，水飛薊素按200 mg/kg拌料給藥；每組均肌肉注射2.5 mL/kg雌激素，每周3次；對(duì)照組（O組）飼喂肉雛雞基礎(chǔ)日糧。

本試驗(yàn)中的試驗(yàn)雞分籠飼養(yǎng)，可避免地面飼養(yǎng)可能導(dǎo)致的其他疾病，尤其是雞球蟲(chóng)病。光照為自然光，飲水和采食不做控制，飼養(yǎng)28 d。

1.3 試驗(yàn)日糧

采用孫翔驍?shù)萚7]的方法設(shè)計(jì)肉雛雞基礎(chǔ)日糧和肉雛雞高脂日糧。本試驗(yàn)使用商品肉用仔雞前、中期全價(jià)顆粒料作為肉雛雞基礎(chǔ)日糧。將15%牛油融化后與85%肉雛雞基礎(chǔ)日糧攪拌均勻，作為本試驗(yàn)的肉雛雞高脂日糧?；A(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Basic diet composition and nutritional level

1.4 樣品采集

飼養(yǎng)28 d時(shí)，對(duì)所有試驗(yàn)雞進(jìn)行心臟采血和肝臟取樣保存。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 血液生化指標(biāo)按照ALT、AST、TG、TC試劑盒的說(shuō)明書(shū)設(shè)置全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)程序，檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)。

1.5.2 肝臟總脂含量

采用索氏抽提法測(cè)定肝臟的肝總脂含量。

1.5.3 肝臟出血指數(shù)和FLHS發(fā)生率

將采樣肝臟的出血點(diǎn)計(jì)數(shù)并記錄，以計(jì)算肝臟出血指數(shù)，肝臟出血指數(shù)以Wolford評(píng)點(diǎn)法表示。Wolford評(píng)點(diǎn)法見(jiàn)表2。

表2 Wolford評(píng)點(diǎn)法Tab.2 Wolford rating method

雞脂肪肝出血綜合征的判定方法如下：

肝總脂含量超過(guò)正常對(duì)照組的正常個(gè)體肝總脂含量的20%，并且肝臟出血指數(shù)在2.0以及2.0以上的個(gè)體，即可判斷發(fā)生了雞脂肪肝出血綜合征。

FLHS發(fā)生率的計(jì)算方法為該組罹患FLHS的個(gè)體數(shù)與該組所有個(gè)體數(shù)的比值再乘以百分率即為FLHS發(fā)生率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，最小顯著性差異法（LSD）進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 水飛薊素對(duì)油雞血清生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知，與Q組相比，A組的血清生化指標(biāo)數(shù)值均極顯著升高（P＜0.01），表明雞脂肪肝出血綜合征模型制備成功，且水飛薊素可有效抑制血清各生化指標(biāo)的升高。水飛薊素3個(gè)劑量組相比，血清中的TG和TC含量差異極顯著（P＜0.01），且隨水飛薊素劑量增加而降低；水飛薊素3個(gè)劑量組的AST活性無(wú)顯著差異（P＞0.05）；B1組的ALT活性與B2、B3組相比極顯著升高（P＜0.01），表明低劑量水飛薊素保護(hù)肝細(xì)胞的作用與中、高劑量水飛薊素相比較差。

表3 水飛薊素對(duì)油雞血清生化指標(biāo)的影響Tab.3 Effect of silymarin on serum biochemical indexesof oil chicken

2.2 水飛薊素對(duì)油雞肝總脂含量、肝臟出血指數(shù)及FLHS發(fā)生率的影響（見(jiàn)表4）

表4 水飛薊素對(duì)油雞肝總脂含量、肝臟出血指數(shù)及FLHS發(fā)生率的影響Tab.4 Effect of silymarin on total liver lipid content,hepatic bleeding index and FLHSincidence of oil chicken

由表4可知，A組與O組相比肝總脂含量極顯著升高（P＜0.01）；A組與水飛薊素三個(gè)劑量組的肝總脂含量相比極顯著升高（P＜0.01），水飛薊素3個(gè)劑量組之間相比肝總脂含量沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，水飛薊素可以有效降低肉雞肝總脂含量。

A組與O組相比肝臟出血指數(shù)極顯著升高（P＜0.01）；A組與水飛薊素3個(gè)劑量組相比肝臟出血指數(shù)極顯著升高（P＜0.01），B2、B3組與B1組的肝臟出血指數(shù)相比顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果表明，水飛薊素可以有效降低肉雞肝臟出血指數(shù)，且隨劑量升高預(yù)防效果也提高。

A組與O組相比FLHS發(fā)生率極顯著升高，表明該試驗(yàn)成功建立了雞脂肪肝出血綜合征模型。水飛薊素3個(gè)劑量組與A組相比FLHS發(fā)生率極顯著降低，表明水飛薊素對(duì)雞脂肪肝出血綜合征的發(fā)生有著良好的預(yù)防作用；B1組仍然有雞脂肪肝出血綜合征的發(fā)生，而B(niǎo)2和B3組未出現(xiàn)雞脂肪肝出血綜合征，表明隨著水飛薊素劑量的增加，對(duì)雞脂肪肝出血綜合征的預(yù)防效果也增強(qiáng)。

3 討論

肝細(xì)胞是轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生的主要場(chǎng)所。因此，在肝細(xì)胞中AST和ALT的活性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在血清中的活性。而肝臟病變會(huì)使肝細(xì)胞受損，轉(zhuǎn)氨酶釋放進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清中的AST與ALT活性異常升高。所以判斷肝功能異常的重要指標(biāo)就是血清轉(zhuǎn)氨酶活性[8]。當(dāng)肉雞發(fā)生FLHS時(shí)，脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂，其體內(nèi)進(jìn)入肝臟的游離脂肪酸難以被代謝出去，并且沉積在肝細(xì)胞內(nèi)，引起肝臟的脂肪過(guò)度堆積[9-10]，導(dǎo)致FLHS雞血清ALT與AST活性出現(xiàn)大幅上升，同時(shí)TG與TC含量也顯著升高。因此，檢查肉雞是否罹患FLHS可檢測(cè)其血清TG、TC含量及ALT、AST活性[11-12]。

FLHS與肝總脂含量、肝臟出血指數(shù)具有直接關(guān)系，當(dāng)肉雞發(fā)生FLHS時(shí)，肝總脂含量和肝臟出血指數(shù)與正常對(duì)照組肉雞相比極顯著升高，水飛薊素3個(gè)劑量組肉雞與FLHS模型組肉雞相比肝總脂含量和肝臟出血指數(shù)極顯著降低；而FLHS發(fā)生率和肝總脂含量、肝臟出血指數(shù)具有直接關(guān)系，表明水飛薊素可以降低肉雞肝臟脂肪沉積，減少肝臟出血點(diǎn)數(shù)量及出血點(diǎn)大小，從而降低FLHS發(fā)生概率。本試驗(yàn)中，低劑量的水飛薊素對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用不夠強(qiáng)，而中高劑量的水飛薊素對(duì)FLHS的預(yù)防效果更好，且劑量越高，預(yù)防效果越好，說(shuō)明肝細(xì)胞對(duì)水飛薊素具有一定的劑量依賴(lài)性。因此，水飛薊素能夠顯著降低血清中ALT、AST的活性和血清TG和TC的含量，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制自由基和炎性因子的產(chǎn)生，從而減少肝細(xì)胞脂肪沉積，提高肝臟抗氧化能力以維持血清各生化指標(biāo)于正常區(qū)間，縮小肉雞肝臟脂肪變性區(qū)域，減小肝臟出血點(diǎn)數(shù)量及出血點(diǎn)大小[13-15]，保肝利膽，從而降低FLHS的發(fā)病率和死亡率。

4 結(jié)論

水飛薊素對(duì)雞脂肪肝出血綜合征具有良好的預(yù)防效果，可有效降低由于雞脂肪肝出血綜合征導(dǎo)致的一系列癥狀。