徐 廣，譚秋生，羅 敏，郭 瑀，楊 丹，鄧才富，楊永東，任星宇，傅 滟

(重慶市藥物種植研究所 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量控制研究中心，重慶 408435)

前胡為傘形科植物白花前胡的干燥根，具有散風(fēng)清熱、降氣化痰的功效，常用于治療風(fēng)熱咳嗽、痰多、痰熱喘滿、咳痰黃稠等[1]。藥理研究表明，白花前胡具有鈣通道阻滯、降壓、抗腫瘤、抗病毒、抗炎及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥等多種生物活性[2-4]。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，前胡野生資源日漸枯竭，難以滿足需求。目前前胡藥材主要來(lái)源于栽培品種，然而栽培品和野生品的活性成分含量差異大[5-6]。前胡的栽培方式有助于提高其有效物質(zhì)的含量，同時(shí)活性物質(zhì)的提取方法也對(duì)于前胡的開(kāi)發(fā)利用至關(guān)重要。本研究通過(guò)對(duì)比不同提取方法對(duì)白花前胡甲素和白花前胡乙素提取量的影響，為前胡藥材的質(zhì)量提升提供幫助。

1 材料與儀器

甲醇(色譜純)：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司，批號(hào)20190901；三氯甲烷：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司，批號(hào)20120702；水：均為臨用現(xiàn)制的超純水；白花前胡甲素、白花前胡乙素對(duì)照品：中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為111711-201904、111904-201804。

島津LC-20AT高效液相色譜儀，包括LCsolution色譜管理處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器、日本島津Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×0.5 μm×250 mm)、CBM-20Alite系統(tǒng)控制器；METTLER AL104型電子天平(感量：0.1 mg)，CPA225D型電子天平(感量：0.01 mg)；Molecular標(biāo)準(zhǔn)智能型純水機(jī)；KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海龍躍儀器有限公司)；HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海汗諾儀器有限公司)；多功能微波合成萃取儀(UWav-2000，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司)；LYZ恒溫?fù)u床(上海龍躍儀器設(shè)備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法

2.1.1 按照 2015版藥典超聲提取法(S1) 取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.2 按照藥典改進(jìn)法(S2、S3) 取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇或乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)提取液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.3 按照微波法(S4) 取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，微波處理(功率400 W，30 ℃)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.4 按照搖瓶法(S5) 取前胡樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，恒溫?fù)u床(30 ℃，120 rmp)搖瓶30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.2 測(cè)定方法與結(jié)果

2.2.1 色譜條件 按《中國(guó)藥典》2015年版一部“前胡”標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下“含量測(cè)定”規(guī)定進(jìn)行測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75∶25)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為321 nm，理論板數(shù)按白花前胡甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

精密稱取白花前胡甲素、白花前胡乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL各含白花前胡甲素73.0 μg、白花前胡乙素79.8 μg的混合溶液，即得。白花前胡甲、乙素混合對(duì)照品色譜，見(jiàn)圖1。

注：1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素。

2.2.2 譜圖相似度 將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)出為AIA格式，然后導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2012版，進(jìn)行相似度分析，其色譜見(jiàn)圖2，相似度見(jiàn)表1。由圖2可知，4種提取方法所得色譜圖和藥典法均較為相似，提取物質(zhì)種類和出峰時(shí)間都和藥典提取法較為吻合。由表1可知，S5法和藥典提取法相似度最高，系數(shù)為1.000；S2、S3及S4和藥典提取法的相似系數(shù)均在0.96以上。由此可見(jiàn)，上述幾種方法都能很好地滿足藥典要求，進(jìn)而替代藥典提取法。

表1 HPLC圖譜相似度系數(shù)

圖2 前胡不同提取方法的HPLC圖譜

2.2.3 提取量比較 不同提取方法所得白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量見(jiàn)表2。由表2可知，S2、S3、S4和S5均能提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取量，增加其可檢測(cè)性。與藥典提取法相比白花前胡乙素的含量提高了12.61%～20.05%，白花前胡乙素的含量提高了11.23%～21.05%。同時(shí)，優(yōu)化的提取方法測(cè)得的白花前胡甲素和白花前胡乙素含量均高于藥典要求(大于0.9%和大于0.24%)。

表2 提取方法對(duì)白花前胡甲素、乙素的影響 (%)

3 討論

《中國(guó)藥典》2015版Ⅰ部前胡項(xiàng)下的HPLC測(cè)定方法，樣品提取方法繁瑣，操作過(guò)程多，且采用三氯甲烷為提取溶劑，該溶劑為二類有毒試劑，應(yīng)避免使用。故項(xiàng)目組對(duì)其提取方法進(jìn)行優(yōu)化，首先將提取溶劑三氯甲烷替換為甲醇或乙醇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲醇更有利于白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取，使其測(cè)得含量更高；在此基礎(chǔ)上，對(duì)比了微波提取和搖瓶提取的差異，搖瓶法對(duì)白花前胡乙素的提取有一定促進(jìn)作用。搖瓶法所得HPLC圖譜和藥典法的HPLC圖譜相似度最為接近，系數(shù)為1.000；此法提取溶劑更安全，提取方式更溫和、安全、有效，且能同時(shí)提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量；該方法有望替代三氯甲烷超聲提取法。

通過(guò)對(duì)比前胡的提取方法，采用甲醇超聲提取法提取前胡的白花前胡甲素和白花前胡乙素，均能獲得較高的含量；而采用更為溫和的搖瓶法則更有利于白花前胡乙素的提取。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，可以根據(jù)樣品的不同情況，選擇合適的提取方法，有利于提高生產(chǎn)效率。