王首力

摘 要：文章以乳牙作為研究對(duì)象，通過使用多樂氟、生物活性玻璃溶液、五倍子溶液及生物活性玻璃和五倍子結(jié)合溶液對(duì)乳牙釉質(zhì)早期齲治療進(jìn)行處理;然后使用掃描電鏡對(duì)不同組的樣本進(jìn)行觀察，使用熒光顯微鏡對(duì)不同樣本牙齒進(jìn)行觀察，使用生化分析儀對(duì)再脫礦處理中脫礦液的鈣離子濃度進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，生物活性玻璃和五倍子的結(jié)合溶液對(duì)乳牙釉質(zhì)早期齲治療效果最好。

關(guān)鍵詞：生物活性玻璃;五倍子;乳牙

中圖分類號(hào)：R781.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-5922（2021）06-0044-05

Abstract：This paper takes deciduous teeth as the research object， and treats the early caries of deciduous tooth enamel by using dole fluoride， bioactive glass solution， gallnut solution and bioactive glass and gallnut combined solution; then using scanning electron microscope to observe different groups of samples， a microhardness tester was used to measure different sample teeth， and a biochemical analyzer was used to measure the calcium ion concentration of the demineralization solution in the re-demineralization treatment. The experimental results show that the combined solution of bioactive glass and gallnut has the best effect on the treatment of early caries of enamel of deciduous teeth.

Key words：bioactive glass; gallnut; deciduous teeth

如今，低齡兒童喜歡喝碳酸飲料，提高了乳牙釉質(zhì)齲病的發(fā)生概率。于是人類對(duì)乳牙齲病的重視程度不斷提高，進(jìn)行早期齲治療將有利于治療效果。生物活性玻璃是一種能夠修復(fù)、再生和替代組織的材料，在牙科、骨科領(lǐng)域中具有廣泛作用[1]。將生物活性玻璃材料應(yīng)用到乳牙釉質(zhì)早期齲治療中，能夠促進(jìn)釉質(zhì)再礦化[2]。五倍子屬于一種中草藥，該材料應(yīng)用到齲齒治療中能夠阻礙牙本質(zhì)齲的進(jìn)展速度[3]。通過相關(guān)學(xué)者對(duì)五倍子的研究，五倍子具有抗菌作用，能夠抑制脫礦、促進(jìn)再礦化，能夠抑制齲齒的發(fā)展等作用[4]。所以文章將對(duì)這兩組材料及其結(jié)合體在乳牙釉質(zhì)早期齲治療中進(jìn)行應(yīng)用分析。

1 實(shí)驗(yàn)過程

1.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

實(shí)驗(yàn)需要的主要材料為乳前牙，還需要人工唾液、五倍子、多樂氟、生物活性玻璃粉體、人工脫礦液（50 mmol/L冰醋酸、2.2 mmol/L磷酸二氫鉀、2.2 mmol/L硝酸鈣、PH=4.5）、去離子水、無水乙醇等。其中乳前牙的獲取方式：將某醫(yī)院一段時(shí)間內(nèi)患者的滯留乳前牙進(jìn)行保存，要求患者的年齡在5～8歲，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的乳前牙需要具備一些要求，比如該牙齒沒有裂紋、沒有填充、沒有進(jìn)行牙髓治療、沒有磨損、沒有色素沉著、牙釉質(zhì)發(fā)育完全、形態(tài)正常等，經(jīng)過選擇之后，最后一共收集到了88顆符合要求的乳前牙。這些乳前牙用于實(shí)驗(yàn)之前，需要對(duì)其進(jìn)行處理和保存，首先需要將其殘余根部進(jìn)行清除，只需要用到牙齒的牙冠部分。然后使用沒有含氟的拋光膏對(duì)牙齒進(jìn)行處理，并且還要將牙齒上的各種污漬、軟組織進(jìn)行清洗干凈，最后將其放入生理鹽水中在4℃的環(huán)境中進(jìn)行保存。文章將會(huì)設(shè)置為4組實(shí)驗(yàn)，其中第一組為多樂氟（A組），二組為6%生物活性玻璃溶液組（B組），第三組為1%五倍子溶液組（C組），第4組為生物活性玻璃和五倍子的結(jié)合溶液組（D組）。

實(shí)驗(yàn)需要的儀器有顯微硬度計(jì)、掃描電子顯微鏡、生化分析儀、電子天平等。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣本的制作方式

首先將牙冠從生理鹽水中拿出備用，將其表面的水分吸干再對(duì)牙冠進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)過程中并不會(huì)將整個(gè)牙冠使用生物活性玻璃和五倍子，而是在牙齒唇側(cè)釉質(zhì)的正中央留出一定的面積用來作為實(shí)驗(yàn)區(qū)域，文章選擇的區(qū)域大小長(zhǎng)寬都為2.5mm，其他面積即為非試驗(yàn)區(qū)，為了避免實(shí)驗(yàn)過程中超過了實(shí)驗(yàn)區(qū)域，所以將非試驗(yàn)區(qū)使用指甲油進(jìn)行封閉，當(dāng)指甲油完全干燥之后，再將處理好的牙齒放到生理鹽水中進(jìn)行保存，即試驗(yàn)樣本制作完成。

1.3 脫礦牙樣本制作方式

將樣本放到四個(gè)不同的容器中，然后在每個(gè)容器中倒入等量人工脫礦液，浸泡10min之后，使用去離子水對(duì)樣本進(jìn)行反復(fù)沖洗，目的在于將其表面的人工脫礦液沖洗干凈，然后將其吸干水分，最后將其放入到人工唾液中。以這樣的一個(gè)操作方式，對(duì)其經(jīng)常重復(fù)操作，間隔時(shí)間為8h每次，一共需要操作20d。在操作過程中，需要對(duì)釉質(zhì)面顏色進(jìn)行觀察。20d之后，將樣本使用去離子水進(jìn)行清洗干凈即可。

1.4 再礦化處理

將4組脫礦之后的試樣在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上進(jìn)行PH循環(huán)礦化處理，其時(shí)間點(diǎn)分別為早上8點(diǎn)、中午12點(diǎn)和晚上6點(diǎn)。其礦化處理的方式首先將4組樣本分別放到各自對(duì)應(yīng)的溶液中浸泡10min，比如B組中將樣本放到6%生物活性玻璃溶液中浸泡10min;然后再將試樣放到人工脫礦液中進(jìn)行脫礦20min，再對(duì)樣本使用去離子水沖洗干凈;最后將樣本放到37℃的人工唾液中浸泡。該3個(gè)步驟即為一個(gè)PH循環(huán)礦化處理，需要在3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)循環(huán)進(jìn)行這3個(gè)步驟，完成周期為20d。

1.5 再脫礦牙齒處理

將再礦化處理的樣本中選擇32個(gè)，對(duì)該32個(gè)樣本進(jìn)行再脫礦處理，一共將其平均分為4組。該步驟和脫礦牙樣本制作方式一致，只是將其中的周期設(shè)置為15d。再脫礦牙齒處理過程中，其中使用的人工脫礦液不需要更換，直至周期時(shí)間結(jié)束之后，將人工脫礦液分別收集到不同的無菌密閉試管中，然后將其保存到零下80℃的環(huán)境中備用，目的在于對(duì)其進(jìn)行生化檢測(cè)。

1.6 實(shí)驗(yàn)說明

（1）熒光顯微鏡測(cè)試實(shí)驗(yàn)。首先在脫礦的試樣中選擇隨機(jī)選擇3個(gè)樣本，然后再在再礦化處理之后的每組試樣中同樣隨機(jī)選擇3個(gè)樣本，然后將每個(gè)試樣使用羅丹明B溶液進(jìn)行染色1h，在染色過程中需要避光處理。完成染色之后還需要將每個(gè)樣本表面的溶液使用去離子水反復(fù)進(jìn)行沖洗，直至將其沖洗干凈為止。再將釉質(zhì)塊沿著冠根方向進(jìn)行切開，最后選擇每個(gè)樣本的相同部位使用顯微鏡進(jìn)行觀察，主要觀察剖面染液滲入情況。

（2）掃描電鏡觀察。為了觀察實(shí)驗(yàn)過程中，乳牙釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)變化，使用掃描電鏡對(duì)樣本進(jìn)行觀察。首先選擇脫礦前、脫礦后、再礦化后的樣本中隨機(jī)選擇3個(gè)樣本，并對(duì)其進(jìn)行編號(hào)處理。然后依次使用3種不同濃度的乙醇對(duì)樣本進(jìn)行梯度脫水處理，3種乙醇的濃度分別為50%、70%和無水乙醇。每種乙醇對(duì)樣本進(jìn)行處理時(shí)的時(shí)間為15min，處理完成之后，將其放到室溫環(huán)境下進(jìn)行干燥24h。然后將處理好的試樣進(jìn)行真空噴金，噴金的位置為牙齒的實(shí)驗(yàn)區(qū)域，最后使用掃描電鏡對(duì)試驗(yàn)區(qū)的釉質(zhì)表面形態(tài)進(jìn)行觀察。

（3）鈣離子溶出量的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。使用生化分析儀對(duì)30個(gè)再脫礦的樣本進(jìn)行檢測(cè)，主要檢測(cè)不同組別中人工脫礦液中含有的鈣離子濃度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

選擇SPSS19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果進(jìn)行分析，正態(tài)分布的定量資料使用進(jìn)行表示，兩個(gè)因素之間進(jìn)行比較使用t檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05時(shí)表示兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 試樣熒光顯微鏡觀察結(jié)果

使用顯微鏡對(duì)染色的樣本進(jìn)行觀察之后，得到如圖1所示的結(jié)果，從圖1（a）中可以看出，其熒光染料沉積多，并且具有比較強(qiáng)的熒光，是因?yàn)槊摰V之后乳牙的牙釉質(zhì)變得更加疏松，必然會(huì)增加牙齒的孔隙，所以就會(huì)造成熒光較多。另外四幅圖為再礦化處理之后熒光結(jié)果，因?yàn)樵俚V化處理之后，會(huì)降低牙釉質(zhì)的的孔隙，所以相比于圖1（a），另外四幅圖的熒光強(qiáng)度和寬度都有所降低。從圖1（b）中可以看出，熒光帶有明顯的變窄，但是熒光強(qiáng)度還比較大，圖1（c）中的熒光強(qiáng)度有明顯降低，而且熒光帶縮窄，但是其中可以看出染液滲入部位不均勻，圖1（d）中熒光強(qiáng)度比較大，沉積也比較多，而且染液滲入不均勻，圖1（e）中熒光強(qiáng)度和寬度，還有其滲入均勻性均比另外幾幅圖的好，所以能夠說明，將五倍子和生物活性玻璃進(jìn)行融合使用的溶液具有更好的齲齒治療效果。

2.2 掃描電鏡觀察結(jié)果

使用掃描電鏡需要對(duì)乳牙脫礦前、脫礦后和再礦化的試樣進(jìn)行觀察，主要觀察使用不同物質(zhì)的牙試驗(yàn)區(qū)釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)變化情況。如圖2所示為釉質(zhì)脫礦前的掃描電鏡結(jié)果，從圖中可以看出，乳牙釉質(zhì)具有光滑的表面，而且大致上沒有孔隙，只有個(gè)別位置存在很小的釉質(zhì)劃痕。圖3為脫礦后的電鏡圖，當(dāng)樣本經(jīng)過脫礦處理之后，能夠看出牙釉質(zhì)表面變得更加粗糙，也存在不同大小的孔隙，整體表現(xiàn)出蜂窩孔狀。圖4為再礦化處理之后4組的掃描電鏡圖，從中可以看出，再礦化處理之后，樣本上存在不同程度的礦物質(zhì)沉淀，另外每組的表現(xiàn)狀態(tài)不一樣，其中生物活性玻璃溶液組在牙釉質(zhì)表面能夠發(fā)現(xiàn)有大塊的白色顆粒，呈現(xiàn)出礦化不均、大小不一致的現(xiàn)狀，而五倍子溶液組中牙釉質(zhì)表面存在大小比較接近的顆粒結(jié)果物質(zhì)，且其礦物質(zhì)沉積不均勻，有些孔隙中沒有出現(xiàn)礦物質(zhì)。而最后一組組合組中，能夠看出牙釉質(zhì)表面呈現(xiàn)出光滑平坦的狀態(tài)，脫礦之后幾乎上沒有孔隙出現(xiàn)。

2.3 鈣離子溶出量的測(cè)量實(shí)驗(yàn)

在實(shí)驗(yàn)部分，已經(jīng)對(duì)牙齒的再脫礦處理進(jìn)行分析，保存了每組樣本中浸泡牙齒的脫礦液體，于是將對(duì)液體中溶出的鈣離子濃度進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究結(jié)果如表2所示，其中溶出量后面的字母一致時(shí)表示無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，不同則表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從表中可以看出，4組試樣中鈣離子溶出量之間兩兩進(jìn)行比較，計(jì)算得到，即兩組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，對(duì)比4組試樣中鈣離子溶出量的大小，發(fā)現(xiàn)A>C>B>D，所以將生物活性玻璃和五倍子進(jìn)行結(jié)合使用，有助于降低鈣離子溶出量。

3 討論

齲齒屬于一種常見的口腔疾病，尤其是在兒童中，患有齲病的兒童在兒童齲病中發(fā)生的概率高達(dá)60%以上。這種慢性疾病在初期時(shí)，并不會(huì)出現(xiàn)任何的癥狀，所以人們也不會(huì)對(duì)其進(jìn)行重視，直至其病情嚴(yán)重之后才進(jìn)行相應(yīng)的治療。兒童患者中的乳牙含鈣成分比較低，并且具有不同的晶體結(jié)構(gòu)，所以具有更強(qiáng)的齲齒易感性，所以乳牙患有齲病的概率也在提高，需要對(duì)其進(jìn)行研究，從而使得齲病能夠有更好的治療效果[5-6]。

本實(shí)驗(yàn)中選擇同一年齡段的兒童乳前牙作為研究樣本，這樣能夠有助于初始變量的控制，而且選擇人離體體牙齒作為樣本，能夠提高實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性，所以最后獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有更好的參考價(jià)值。另外，實(shí)驗(yàn)過程中選擇人工脫礦液作為脫礦液，因?yàn)槠鋚H值大致在4.5左右，而牙釉質(zhì)出現(xiàn)脫礦時(shí)所需要的pH值不大于4.5，所以正好符合牙脫礦所需要的pH值。在實(shí)驗(yàn)過程中，牙齒離開人工脫礦液中之后，需要將其放入到人工唾液中進(jìn)行保存。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，雖然在盡量模擬實(shí)際口腔情況，但是由于口腔環(huán)境比較復(fù)雜，其中pH值會(huì)存在變動(dòng)情況，而在實(shí)驗(yàn)過程中很難將pH值設(shè)定為變動(dòng)情況，只能將其設(shè)置為固定值。

通過使用4組不同的溶液對(duì)乳牙釉質(zhì)早期齲治療的效果進(jìn)行研究，文章進(jìn)行了3種不同實(shí)驗(yàn)，分別為熒光顯微鏡觀察、掃描電鏡觀察和鈣離子溶出量測(cè)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果上文也已經(jīng)得到，然后接下來將對(duì)3種結(jié)果進(jìn)行分析。

（1） 熒光顯微鏡結(jié)果分析。熒光染料具有滲透作用，所以將其應(yīng)用于牙釉質(zhì)檢測(cè)中，能夠分析出牙釉質(zhì)的礦物損失量[7]。本文的實(shí)驗(yàn)是使用羅丹明B進(jìn)行染色，使用顯微鏡進(jìn)行觀察，從觀察結(jié)果中可以看出，五倍子和生物活性玻璃的融合使用相比于其他幾種溶液具有最窄的熒光帶和強(qiáng)度最弱的熒光，于是能夠反映出該樣本經(jīng)過再礦化處理之后能夠非常明顯降低脫礦孔隙。

（2）掃描電鏡結(jié)果分析。在牙齒的脫礦與再礦化結(jié)果的變化過程中，使用掃描電鏡對(duì)其進(jìn)行觀察屬于一種主要的觀察方式，所以文章同樣使用掃描電鏡對(duì)不同樣本的結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行觀察。有研究表明，不同濃度的生物活性玻璃溶液具有不同的再礦化效果，且當(dāng)濃度為6%時(shí)，再礦化效果最好，所以文章在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過程中選擇的生物活性玻璃溶液濃度為6%。但是對(duì)A組中使用掃描電鏡進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)其再礦化效果并不好，礦化不均勻，而且存在大塊白色顆粒。出現(xiàn)這種現(xiàn)象大致有兩種原因，首先就是其他研究中使用的恒牙作為研究對(duì)象，而本文選擇乳牙作為研究對(duì)象，兩種研究對(duì)象的晶體結(jié)構(gòu)存在差異，可能會(huì)造成研究結(jié)果存在差異;然后就是其中過飽和的鈣離子多數(shù)沉積到了牙釉質(zhì)表面。

有研究結(jié)果表明，不同濃度下五倍子溶液對(duì)釉質(zhì)進(jìn)行再礦化之間無差異性，其中濃度最低的為1mg/ml，所以本文在實(shí)驗(yàn)中選擇濃度最低的五倍子溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[8]。從文章的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，使用五倍子溶液作為釉質(zhì)再礦化處理的溶液，其再礦化能力比較弱。而通過使用生物活性玻璃和五倍子的溶液之后，能夠增強(qiáng)再礦化處理強(qiáng)度，使得釉質(zhì)變得更加光滑平坦，并且顆粒物質(zhì)均勻的沉積在牙齒表面。所以通過使用掃描電鏡再一次證實(shí)了同時(shí)使用五倍子和生物活性玻璃溶液更有利于乳牙的再礦化效果。

（3）鈣離子溶出量的分析。上面兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中能夠得到使用生物活性玻璃和五倍子溶液在礦化處理上具有最好的效果。然后文章還對(duì)再脫礦進(jìn)行分析。從結(jié)果中可以看出，4組脫礦液中的A組的鈣離子濃度大于C組大于B組大于D組，即生物活性玻璃和五倍子溶液組中具有最好的抑制脫礦效果。在4組樣本中C組在再礦化方面最低，但是其抑制脫礦的效果優(yōu)于B組，可能是因?yàn)槲灞蹲尤芤褐械牡V物質(zhì)屬于病損深層，所以當(dāng)再次受到人工脫礦液的侵蝕時(shí)會(huì)比較困難。所以，通過使用D組樣本更有利于抑制牙齒脫礦，對(duì)乳牙的齲治療效果將會(huì)更好。

4 結(jié)語(yǔ)

乳牙容易發(fā)生齲病，需要對(duì)其進(jìn)行重視和及時(shí)治療，對(duì)早期齲病進(jìn)行治療，其效果將會(huì)更好。文章分析多樂氟、生物活性玻璃溶液、五倍子溶液及生物活性玻璃和五倍子結(jié)合溶液這4組對(duì)乳牙齲齒治療進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從結(jié)果中可以看出兩者的結(jié)合溶液具有更好的再礦化效果和抑制牙齒脫礦作用，所以將其應(yīng)用于乳牙釉質(zhì)早期齲齒治療中具有不錯(cuò)的臨床效果。

參考文獻(xiàn)

[1]王冬梅.CaO-PO-NaO-BO玻璃-陶瓷的制備及體外生物活性研究[D].天津：天津大學(xué)， 2009.

[2]方謙，穆玉，周雪，等.生物活性玻璃對(duì)體外脫礦釉質(zhì)再礦化的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2016（2）：263-266.

[3]遲惠文，陶文韜，王子璇，等.中藥防齲的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2019（9）：131-134.

[4]汪大照，余志芬，張向宇.五倍子提取物對(duì)牙釉質(zhì)脫礦和再礦化作用的影響[J].江蘇中醫(yī)藥，2011，43（4）：85-87.

[5]何曉玲，陳丹，顏志玲，等.成都市低齡兒童乳牙患齲及齲易感性調(diào)查[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020，46（01）：34-37.

[6]鄭樹國(guó)，鄧輝.發(fā)育不全乳牙釉質(zhì)的化學(xué)成分和晶體結(jié)構(gòu)的初步研究[J].中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，1997，032（06）：366-368.

[7]梁向陽(yáng)，孔晶晶，李春年，等.不同材料在碳酸飲料所致脫礦釉質(zhì)再礦化中的作用[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2017（12）：1274-1277.

[8]李文娟，方謙.生物活性玻璃促進(jìn)釉質(zhì)人工齲再礦化效果的研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志， 2017（33）：734.