蒙文考 黃奕蔓 李宜爽 朱文倩 任立云 廖詠梅

摘 要：田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2020年廣西象州縣百丈鄉(xiāng)砂糖橘上柑橘木虱的發(fā)生有2個高峰期，第1高峰期在夏梢嫩梢期，最高蟲口密度為1330頭/百梢;第2高峰期在秋梢嫩梢期，最高蟲口密度為1050頭/百梢。定期噴施化學(xué)藥劑不能顯著降低柑橘木虱的蟲口密度。2020年柑橘木虱的大發(fā)生與2019年暖冬、2020年暖春及少雨有關(guān)。在3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的9個砂糖橘果園中均有柑橘黃龍病菌陽性樣品，其中失管果園的陽性率最高達(dá)到90 %，但3個黃皮果園的樣品均呈陰性?？梢姡疤情偕诤蜌庀髼l件是柑橘木虱爆發(fā)的重要因素，在田間存在砂糖橘黃龍病的情況下，應(yīng)根據(jù)氣象條件，加強(qiáng)柑橘木虱的發(fā)生預(yù)測與防治，減緩砂糖橘黃龍病的蔓延。

關(guān)鍵詞：柑橘木虱 蟲口密度 砂糖橘 氣象因素 柑橘黃龍病菌

中圖分類號：S436.66? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Cause Analysis of Diaphorina citri Outbreak in Xiangzhou County of Guangxi in 2020 and Detection of Candidatus Liberibacter asiaticus

MENG Wenkao1，HUANG Yiman1，LI Yishuang2，ZHU Wenqian1，

REN Liyun1，LIAO Yongmei1

（1 College of Agriculture， Guangxi University， Nanning， Guangxi 530004，China;

2 Liuzhou Meteorological Bureau，Liuzhou， Guangxi 545001，China）

Abstract： Field investigation showed that there were two occurrence peaks of Diaphorina citri on Citrus reticulata ‘Shatangju in Baizhang Township， Xiangzhou County， Guangxi Zhuang Autonomous Region in 2020. The first peak was at the tender summer shoots stage， with the highest population density of 1330 Diaphorina citri per hundred shoots; the second peak was at the tender autumn shoots stage， with the highest population density of 1050 Diaphorina citri per hundred shoots. Regular spraying of chemicals could not significantly reduce the population density of Diaphorina citri. The outbreak of Diaphorina citri in 2020 was related to warm winter in 2019， warm spring and less rain in 2020. The positive samples of Candidatus Liberibacter asiaticus were found in 9 Shatangju orchards in 3 towns， and the highest positive rate was up to 90% in orchards without management， but all samples from 3 orchards of Clausena lansium were negative. Growth period of Shatangju and meteorological conditions contributed to the outbreak of Diaphorina citri. Aiming at the Candidatus Liberibacter asiaticus in the field， the occurrence prediction and control strategy of Diaphorina citri should be strengthened according to the meteorological conditions to slow the spread of the disease.

Key words： Diaphorina citri; population density; Citrus reticulata ‘Shatangju; meteorological factors; Candidatus Liberibacter asiaticus

柑橘是廣西的重要經(jīng)濟(jì)作物。據(jù)報道，2019年廣西柑橘栽培面積55.5萬hm2，產(chǎn)量1124.52萬t[1]。象州縣是廣西的柑橘新興產(chǎn)區(qū)，柑橘面積由2016年前的266.7 hm2發(fā)展至2019年的2.7萬hm2，其中3-5年樹齡的面積占50 %，3年以下樹齡占40 %，5年內(nèi)樹齡的種植面積總計占比達(dá)90 %[2]。據(jù)報道，2020年廣西柑橘木虱（Diaphorina citri）的發(fā)生量同期相比偏高，其中桂北、桂中地區(qū)發(fā)生較重，正常管理果園多為中等偏重發(fā)生，失管果園多為大發(fā)生;桂南地區(qū)同期相比稍重;桂東地區(qū)中等發(fā)生，局部中等偏重發(fā)生;桂西地區(qū)發(fā)生同期相比持平[3]。桂中地區(qū)的鹿寨縣、武宣縣、象州縣的正常果園中柑橘木虱偏重發(fā)生，局部大發(fā)生，蟲株率7.1 %～60 %，同比增長3.1 %～12 %，蟲口量0.4～221頭/百梢，同比增長14.3 %～38 %;失管果園柑橘木虱大發(fā)生，蟲株率72 %～90 %，同比增長2.8 %～39 %，蟲口量30～2168頭/百梢，同比增長8 %～1950 % [4]。柑橘木虱是柑橘黃龍病的重要傳播介體，如果柑橘種植區(qū)存在黃龍病植株，柑橘木虱的大發(fā)生勢必引起黃龍病的快速蔓延。為了預(yù)測柑橘新區(qū)—象州縣砂糖橘黃龍病的發(fā)生趨勢，本文選擇象州縣百丈鄉(xiāng)為調(diào)查點，系統(tǒng)調(diào)查柑橘木虱的發(fā)生動態(tài);同時，下載近3年的氣象資料，分析柑橘木虱發(fā)生與氣象因素的相關(guān)性;同時在百丈鄉(xiāng)及其相鄰的寺村鎮(zhèn)和中平鎮(zhèn)采集砂糖橘黃化植株葉片及與砂糖橘園鄰近的黃皮果樹葉片，檢測柑橘黃龍病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus）的攜帶情況，為提出控制砂糖橘黃龍病進(jìn)一步蔓延的方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 柑橘木虱的系統(tǒng)調(diào)查

在象州縣百丈鄉(xiāng)長安村一果農(nóng)的砂糖橘園（約0.07 hm2）開展柑橘木虱的系統(tǒng)調(diào)查。于2020年5月下旬夏梢期開始調(diào)查，至11月下旬秋梢老熟期。用五點取樣法進(jìn)行調(diào)查，每點調(diào)查1株，每株調(diào)查2個新梢，調(diào)查每個新梢上的所有成蟲和若蟲數(shù)量。每10 d左右調(diào)查1次。調(diào)查期間正常管理，按計劃噴施農(nóng)藥。

1.2 砂糖橘黃化植株和黃皮果植株葉片的采集

于2020年11月24日分別在象州縣百丈鄉(xiāng)、寺村鎮(zhèn)和中平鎮(zhèn)各選擇3個黃化植株較多的砂糖橘果園，每個果園采用五點取樣法取樣，每點選擇2株砂糖橘黃化植株，在每1株的東西南北四個方向各采集2個梢，每個梢上選擇1-2張葉片用于柑橘黃龍病菌的檢測。同時在每1個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的砂糖橘采樣果園附近選擇1個黃皮果園，按同樣的方法采集10株黃皮果的葉片用于柑橘黃龍病菌的檢測。

1.3 柑橘黃龍病菌的檢測

用Biospin Plant Genomic DNA Extraction Kit（杭州博日科技有限公司），根據(jù)其說明書提取樣品葉片總DNA，用柑橘黃龍病菌的特異引物HLBF468/ HLBR877[5]進(jìn)行PCR檢測。引物的核苷酸序列為：HLBF468（5-GCGATTAAGTTAGAGGTGA-3），HLBR877（5-TACCATCTCTGATATCGTCCTATA -3），預(yù)期擴(kuò)增片段長度為433 bp。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，其中DNA模板2.0 μL（30 ng/μL）、正反向引物各0.5 μL（10 μmol/L）、Dream Taq Green PCR Master Mix（2×）10 μL、ddH2O補(bǔ)足至20 μL。PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)：預(yù)變性95 ℃ 3 min，變性95 ℃ 30 s，55 ℃退火30 s，延伸72 ℃ 30 s，40個循環(huán)，終延伸72 ℃ 5 min，4 ℃保存。陽性對照模板為經(jīng)PCR檢測已確定柑橘黃龍病菌為陽性的砂糖橘葉片的總DNA。PCR擴(kuò)增完成后，取5.0 μL PCR產(chǎn)物，用1 %瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)下觀察。

1.4 氣象資料的獲取

由廣西柳州市氣象局提供象州縣2018～2020年的氣溫、雨日、雨量、相對濕度及日照時數(shù)的數(shù)據(jù)。

1.5 數(shù)據(jù)整理

采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理及繪制柱狀圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 柑橘木虱的發(fā)生動態(tài)

自夏梢期開始至秋梢老熟期，調(diào)查點砂糖橘上的柑橘木虱蟲口密度有2個高峰期，第1高峰期在7月下旬至8月上旬，其中7月28日的蟲口密度達(dá)到1330頭/百梢，8月9日的蟲口密度為1180頭/百梢，第2高峰期在9月中下旬，9月16日的蟲口密度為1050頭/百梢，9月27日的蟲口密度為880頭/百梢（圖1）。

在柑橘木虱蟲口密度調(diào)查期間，砂糖橘果園噴施殺蟲劑情況見表1。

表1可見，果園中大約每月噴施殺蟲劑1次，防治對象包括繡線菊蚜（Aphis citricola）、柑橘薊馬（Scirtothrips citri）、柑橘潛葉蛾（Phyllocnistis ctrella）、柑橘全爪螨（Panonychus citri）、柑橘木虱、稻棘緣蝽（Cletus punctiger）、堆蠟粉蚧（Nipaecoccus vastalor）、星天牛（Anoplophora chinensis）、柑橘鳳蝶（Papilio xuthus）、棉鈴實夜蛾（Helicoverpa armigera）等，但每次噴施農(nóng)藥的重點防治對象不同，表1的防治對象一欄中，排在前面的是防治的重點對象。結(jié)合圖1可見，柑橘木虱的發(fā)生高峰期和嫩梢期關(guān)系密切，和是否施用化學(xué)藥劑關(guān)系不大。在調(diào)查點中，柑橘木虱的第1個高峰期為7月28日至8月9日，該時期為夏梢嫩梢期;第2高峰期為9月16-27日，為秋梢嫩梢期，盡管該時期也噴施化學(xué)藥劑，但并不能顯著降低柑橘木虱的蟲口密度。

2.2 氣候條件與柑橘木虱蟲口密度的關(guān)系分析

2019年12月日平均氣溫高于2018年同期，2020年1-2月的日平均氣溫高于2018年和2019年同期，說明暖冬和次年暖春利于柑橘木虱成蟲的越冬（圖2）。

除了2月和6月，2020年度的10個月的雨日均少于2018年同期;除了9月份，2020年11個月的雨日均少于2019年同期。說明少雨利于柑橘木虱的活動和繁殖（圖3）。

2020年7-8月是調(diào)查點柑橘木虱發(fā)生的第1個高峰期，日雨量低于2018年及2019年同期，2020年9月是調(diào)查點柑橘木虱發(fā)生的第2個高峰期，日雨量雖與2019年基本持平，但明顯低于2018年同期。由于有7-8月的蟲口基礎(chǔ)，9月的秋梢期遇上少雨天氣，導(dǎo)致柑橘木虱的大發(fā)生（圖4）。

2.3 柑橘黃龍病菌的檢測

用柑橘黃龍病菌的特異引物對HLBF468/ HLBR877擴(kuò)增砂糖橘和黃皮果葉片樣品總DNA，感染黃龍病菌的樣品可擴(kuò)增出433 bp的特異條帶（圖5）。圖5為寺村鎮(zhèn)砂糖橘葉片樣品的PCR電泳圖，其中第1果園的10個樣品中有3個呈陽性，第2果園有1個樣品呈陽性，第3果園有9個樣品呈陽性。第3果園為失管果園，共13.3 hm2。黃皮果的10個葉片樣品均呈陰性。

Maker：2000 bp DNA分子標(biāo)記;S1-1～S1-10：寺村鎮(zhèn)砂糖橘第1果園的1～10號樣品;S2-1～S2-10：寺村鎮(zhèn)砂糖橘第2果園的1～10號樣品;S3-S10：寺村鎮(zhèn)砂糖橘第3果園的1～10號樣品;SH1～SH10：寺村鎮(zhèn)黃皮果園的1～10號樣品;陽性：柑橘黃龍病菌陽性對照。

B1-2：百丈鄉(xiāng)第1果園第2株砂糖橘，黃龍病菌呈陰性;B1-5：百丈鄉(xiāng)第一果園第5株砂糖橘，黃龍病菌呈陽性;S1-3：寺村鎮(zhèn)第1果園第3株砂糖橘，黃龍病菌呈陰性;S1-9：寺村鎮(zhèn)第1果園第9株砂糖橘，黃龍病菌呈陽性;Z1-9：中平鎮(zhèn)第一果園第9株砂糖橘，黃龍病菌呈陰性;Z1-10：中平鎮(zhèn)第1果園第10株砂糖橘，黃龍病菌呈陽性;BH2：百丈鄉(xiāng)第2株黃皮果;SH2：寺村鎮(zhèn)第2株黃皮果;ZH4：中平鎮(zhèn)第4株黃皮果。

圖6可見，柑橘黃龍病菌PCR檢測呈陽性的樣品和呈陰性的樣品的癥狀并無明顯差異。在表現(xiàn)黃化癥狀的黃皮果葉片中均未檢測到柑橘黃龍病菌。

采自3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的砂糖橘及黃皮果葉片樣品中柑橘黃龍病菌的PCR檢測結(jié)果見表2。

所采集樣品的9個砂糖橘果園中均有黃化現(xiàn)象，其中寺村鎮(zhèn)的砂糖橘果園3（第3果園）為失管果園，黃化植株比例最高，達(dá)到66.7 %;中平鎮(zhèn)砂糖橘果園3（第3果園）的黃化植株比例為62.5 %，百丈鄉(xiāng)砂糖橘果園1（第1果園）的黃化植株比例為50.0 %。在9個砂糖橘黃化果園中，有7個果園檢測到黃龍病菌，其中寺村鎮(zhèn)失管果園（砂糖橘果園3）的黃龍病菌檢出率最高，達(dá)到90 %，其次是中平鎮(zhèn)砂糖橘第3果園（砂糖橘果園3），黃龍病菌的檢出率為80 %。在3個黃皮果果園中所采集的葉片樣品均未檢測到黃龍病菌。

3 小結(jié)與討論

3.1 小結(jié)

田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2020年廣西象州縣和廣西其他縣市一樣，是柑橘木虱的爆發(fā)年，在定期噴灑殺蟲劑的情況下，柑橘木虱蟲口密度最高峰仍達(dá)到1000頭/百梢以上。柑橘木虱的發(fā)生與夏梢秋梢的嫩梢期關(guān)系密切。對照近3年的氣象條件，2020年柑橘木虱爆發(fā)和氣溫、雨日和雨量關(guān)系密切，上1年暖冬及當(dāng)年暖春利于柑橘木虱成蟲的越冬;在柑橘生長季節(jié)，少雨利于柑橘木虱的生長與繁殖。經(jīng)PCR檢測，象州縣3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的砂糖橘果園均檢測到柑橘黃龍病菌，在9個果園中，有7個果園檢測到黃龍病菌，樣品陽性率在20 %～90 %之間，其中寺村鎮(zhèn)1個13.3 hm2失管果園的樣品陽性率達(dá)到90 %。但3個黃皮果園的黃皮果葉片樣品均未檢測到黃龍病菌。

3.2 討論

近年來由于柑橘的盲目擴(kuò)種，導(dǎo)致柑橘果品價格逐年下降，加上2019年底及2020年初，因為新冠病毒疫情而導(dǎo)致的物流不暢，使成熟果實滯銷，果農(nóng)沒有收益，失管果園面積不斷加大。廣西象州縣雖是柑橘的新區(qū)，但柑橘黃化現(xiàn)象較普遍，砂糖橘黃化植株的黃龍病菌的檢出率也較高，因此，如何控制柑橘黃龍病的進(jìn)一步蔓延，是目前迫在眉睫需要解決的問題。

廣西象州縣2019年12月至2020年1-2月屬于暖冬暖春型氣候，利于柑橘木虱成蟲的越冬;同時，2020年度10個月以上的雨日和日雨量均低于2018年及2019年同期，少雨利于柑橘木虱的活動和繁殖。暖冬暖春及少雨是與柑橘木虱大發(fā)生相關(guān)的重要?dú)庀笠蛩?。生產(chǎn)上應(yīng)該結(jié)合氣象條件，加強(qiáng)柑橘木虱發(fā)生的預(yù)測預(yù)報，提前做好防治工作。

在所檢測的葉片樣品中，黃龍病菌陽性樣品和陰性樣品的癥狀差異并不顯著。張培等（2011）報道[6]，利用 TaqMan 實時熒光定量 PCR 技術(shù)對砂糖橘斑駁葉片和黃化葉片進(jìn)行黃龍病菌檢測。結(jié)果表明，斑駁癥狀葉片的黃龍病菌陽性檢出率為 91.8 %，而黃化葉片黃龍病菌陽性檢出率為 52.0 %，但斑駁葉片往往表現(xiàn)在老熟葉片上。本文所檢測樣品均為剛成熟的新梢黃化葉片，未出現(xiàn)典型的斑駁癥狀，如果黃化葉片的陽性檢出率僅為50 %左右，那么本文中采樣地的黃龍病植株可能在數(shù)量上還會偏多，因此需要更廣泛地開展調(diào)研，同時采用有效措施控制柑橘黃龍病的蔓延。

針對柑橘黃龍病的防控，目前主要推行的措施是“三板斧”，即種植無病苗木，防控柑橘木虱和砍伐病樹。其中防控柑橘木虱是控制已發(fā)病果園中病害蔓延的重要措施。僅依靠噴施農(nóng)藥并不能完全控制柑橘木虱，如本文調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，9月5日噴施農(nóng)藥后，9月16日又出現(xiàn)1次蟲口高峰期，該時期是象州縣砂糖橘的秋梢嫩梢期，利于柑橘木虱的產(chǎn)卵繁殖，同時由于9月5日所施農(nóng)藥主要防治柑橘全爪螨，兼防柑橘木虱，因此未能有效控制柑橘木虱的蟲口密度。柑橘木虱在南寧地區(qū)九里香植株上1年可繁殖11代，有世代重疊現(xiàn)象，完成1個世代的發(fā)育只需15～20 d，以第11代成蟲越冬（黎海霖，2019）[7]。因此，果園中只要有嫩梢存在，就可以觀察到柑橘木虱。生產(chǎn)上應(yīng)配合其他的措施防控柑橘木虱，如在果園中掛黃板。趙政等（2018）報道[8]，黃板對柑橘木虱有很好的誘集效果，以南面方位、高150 cm處及間距4～5 m為誘集柑橘木虱的最佳懸掛方式。本文作者在溫室懸掛黃板誘集柑橘木虱，在成蟲羽化期，誘集效果達(dá)到90 %以上（未發(fā)表資料）。

張艷璇等（2013）報道[9]，捕食螨（胡瓜新小綏螨Neoseiulus cucumeirs）可以捕食柑橘木虱的卵和低齡若蟲，并具備搜尋柑橘木虱的能力。2007年張艷璇等[9]在廣東省高要市、德慶縣、封開縣等地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，連續(xù)釋放胡瓜小綏螨3 年以上的柑橘園，黃龍病的發(fā)病率低于常規(guī)的化學(xué)防治果園，同時發(fā)現(xiàn)不少健康樹與相鄰黃龍病樹相處幾年也不被感染。在開展“以螨治螨”（捕食螨防治柑橘全爪螨）生物防治的果園，農(nóng)藥使用次數(shù)減少了60 %～70 %，改善了柑橘園的生態(tài)環(huán)境、自然天敵生存條件得到明顯改善，柑橘木虱在自然天敵控制下不發(fā)生或少發(fā)生，從而減緩柑橘黃龍病蔓延的速度。

廣西象州縣百丈鄉(xiāng)、寺村鎮(zhèn)和中平鎮(zhèn)是傳統(tǒng)的黃皮果種植區(qū)，發(fā)展柑橘產(chǎn)業(yè)后，仍繼續(xù)保留黃皮果種植習(xí)慣，柑橘與黃皮果均是柑橘木虱的寄主，調(diào)查發(fā)現(xiàn)柑橘與黃皮果混種現(xiàn)象較普遍，也觀察到黃皮果上有柑橘木虱為害;雖然所采集的黃皮果葉片樣品均未檢測到柑橘黃龍病菌，生產(chǎn)上仍應(yīng)加強(qiáng)黃皮果上柑橘木虱的防治。

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