陳童 吐來力江·哈木太 阿依努爾·亞森 羅永明*

（1，新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所 830011；2，伊犁州畜牧總站 835000）

在哈薩克羊與特克賽爾羊雜交改良中，雜交優(yōu)勢在雜交后代中得到良好的體現(xiàn)。為了提高凍精的受胎率、較少凍精用量、降低成本，借助內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)進行雜交改良。綿羊腹腔內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)是澳大利亞在20 世紀80 年代初最先使用的一種打破綿羊傳統(tǒng)人工輸精的繁殖技術(shù)，該技術(shù)通過腹腔內(nèi)窺鏡手術(shù)操作將精子直接注入母羊子宮角，與傳統(tǒng)人工授精相比，精子避開了通過子宮頸口才能進入子宮內(nèi)的路線，從而使進入子宮的精子更多，受胎率得到顯著提高[1]。利用腹腔內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)具有劑量低、精度高、效率高的繁殖生產(chǎn)優(yōu)勢，發(fā)揮優(yōu)秀種公畜利用率，提高繁殖生產(chǎn)效率增加養(yǎng)殖收益，對加速推動良種化產(chǎn)業(yè)進程，實現(xiàn)工廠化、專業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義[2]。

1 材料與方法

1.1 時間地點

本次輸精工作于2019 年9 月底在新疆伊犁昭蘇縣軍馬場肉羊繁育中心開展。

1.2 儀器設(shè)備

卡爾史托斯內(nèi)窺鏡頭、便攜光源、穿刺套管針（德國）、卡蘇輸精槍（法國）、羊胚胎移植架、顯微鏡、恒溫水浴鍋、液氮罐。

1.3 動物

放牧飼養(yǎng)的哈薩克母羊，年齡在2～5 歲，膘情中上等，健康無繁殖疾病。

1.4 藥品

羊用陰道海綿栓（澳大利亞）、孕馬血清促性腺激素（寧波市三生藥業(yè)有限公司）、促排卵素3 號（寧波市三生藥業(yè)有限公司）、酒精、碘酒。

1.5 凍精

進口特克賽爾羊細管凍精（0.25ml/支）。

2 方法

2.1 同期發(fā)情

海綿栓經(jīng)過抗生素處理后，用海綿鉗或埋拴器將海綿栓放入母羊陰道中，放置時注意控制好深度。放置12～13d 后取出海綿栓，同時肌肉注射PMSG 400IU/只，撤栓后分別在24、36、48 和60h 用公羊進行試情，做好發(fā)情記錄和標記，8～10h后對發(fā)情羊進行輸精。

2.2 母羊準備

試情前對羊群控制飲食，接受輸精前發(fā)情羊禁食斷水12h以上。在輸精時將母羊保定在羊胚胎移植架上，對乳房向下20cm 腹中線兩側(cè)3～4cm 區(qū)域進行刮毛并消毒，鋪墊創(chuàng)布遮擋羊毛避免污染。

2.3 精液準備

將室溫控制在18～25℃，把細管凍精放置在39℃的水浴鍋中，在水浴中擺動細管10～15s 進行解凍，解凍完成后從水浴鍋中取出，快速將細管上殘留的水珠擦干，剪去封口端，取少量精液在顯微鏡下檢查精液活力，精子活力高于0.3 才可用于輸精，綿塞端安裝在內(nèi)窺鏡輸精搶鋼芯上，備用。同批次精液在輸精過程中隨時抽檢精液活力。

2.4 輸精狀態(tài)

將準備好的羊胚胎移植架傾斜45～60°。手握緊羊皮將皮膚與肌肉層錯位，選擇在乳房向下10cm 左右的位置將穿刺針尖頂住皮膚持續(xù)用力，向?qū)?cè)斜下方刺穿皮膚層與肌肉層，抽出穿刺針，使用外套管鈍性穿破腹膜。放入內(nèi)窺鏡鏡頭和撥棒相互配合，觀察子宮角的充血狀況與卵巢上卵泡情況，翻動子宮動作要輕緩，參見圖1～2。此時發(fā)情良好的母羊子宮角會有充血情況，卵巢上會有一個大的卵泡，少數(shù)會出現(xiàn)兩個較大卵泡，感觀卵泡處在透亮即將排卵狀態(tài)或有新生排卵點。在此時實施輸精可以獲得較為理想的受胎率。如果看到子宮角顏色蒼白無充血狀態(tài)，形態(tài)卷縮，卵巢無明顯優(yōu)勢卵泡，說明該母羊并沒有處于發(fā)情期，不滿足輸精條件的母羊不予以輸精操作[3]。

2.5 輸精位置

用撥棒把子宮調(diào)整到合適位置，在子宮角正面上1/3 處刺入輸精針，輸精槍的針尖刺入子宮角時要掌握好位置和刺入力度。把精液緩慢打入子宮角，注意刺入深度和輸精時子宮的變化，避免精液被打入子宮壁。無法在子宮正面進行刺入時可選擇側(cè)面，避開皺褶多的位置，盡量確定針頭在子宮腔內(nèi)。采用雙側(cè)子宮角輸精的方式，完成一側(cè)子宮角的輸精后可使用同樣手法對另一側(cè)子宮角進行輸精。每只母羊使用1 支細管凍精，單側(cè)子宮角精液量約0.1ml。輸精后肌注促排卵素3 號，整個輸精過程盡快完成，未見優(yōu)勢卵泡的羊不做輸精。一般來說，青年母羊的子宮角比較細而且硬，針頭容易刺入；母羊隨著年齡和產(chǎn)羔次數(shù)的增加，子宮角會逐漸變大變軟，輸精槍針尖扎入難度就會增大。

2.6 輸精后護理

在完成輸精處理后，由于創(chuàng)口比較小，可以不進行縫合，用碘酒對穿刺部位進行消毒處理。放牧過程中跟隨觀察，避免采食過多，以半飽為宜，2d 后可正常飲食。

3 結(jié)果統(tǒng)計

由附表可知，將581 只哈薩克羊分成4 組進行同期發(fā)情處理，共發(fā)情532 只，發(fā)情率91.6%，輸精過程中淘汰無優(yōu)勢卵泡的母羊54 只，實際完成腹腔鏡輸精478 只。35d 后對輸精羊群進行B 超早期妊娠診斷，確定懷孕322 只，總體受胎率為67.4%。

附表 內(nèi)窺鏡輸精情況統(tǒng)計

4 討論

（1）在1987 年我國首次引入和應(yīng)用腹腔內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)，由于當(dāng)時國內(nèi)肉羊養(yǎng)殖方式和產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)相對落后，不適宜該技術(shù)的推廣和應(yīng)用，造成技術(shù)擱置[3]。近些年，肉羊規(guī)模化養(yǎng)殖程度不斷擴大和提高，引種成本提高，難度加大。羊腹腔鏡輸精技術(shù)運用已逐步成熟，能熟練掌握操作的技術(shù)人員越來越多，此技術(shù)的使用在本地綿羊品種雜交改良和肉羊生產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化等方面做出了很大貢獻。雖然采用子宮角輸精技術(shù)能有效減少凍精使用量且能較大幅度提高母羊受胎率，但受到場地條件、羊群集中情況、設(shè)備購買、技術(shù)熟練程度、勞動力成本及思想理念等因素的阻礙和限制，該技術(shù)在條件有限的情況下僅適合在管理規(guī)范的種畜場和規(guī)?；庋驁鲋惺褂茫蠓秶茝V應(yīng)用依存在一定難度[3]。

（2）腹腔內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)能成功避開復(fù)雜的羊子宮頸口結(jié)構(gòu)阻擋精子通過，縮短了精子在子宮內(nèi)的運行距離，增加了精子通過數(shù)量，降低了精子損耗，提高了母羊受胎率。在輸精過程中，發(fā)情母羊子宮角和卵巢的情況可用內(nèi)窺鏡觀察，在一定程度上可以避免羊假發(fā)情或安靜發(fā)情造成的鑒定失誤現(xiàn)象[4]。

（3）子宮角內(nèi)膜肌層通常的厚度大約為2～3mm，輸精針頭刺入正確時會有進入空腔的手感。操作時輸精槍的針頭不能進入過淺或過深，針頭停留在子宮角肌層不能順利完成輸精。針頭刺入子宮角后可試探著輸入精液，在內(nèi)窺鏡視野中觀察針頭周圍是否有白色突起或精液溢出。此種情況表明針頭沒有準確刺入子宮角的腔體，精液注入受阻，應(yīng)重新選擇位置再刺入[5]。

圖2 輸精操作

（4）在集約化、規(guī)?；潭雀叩酿B(yǎng)殖場中能減少勞動力，提高工作效率的技術(shù)才能得到推廣應(yīng)用。在內(nèi)窺鏡輸精工作中，利用公羊試情確定發(fā)情后再輸精，需要投入大量人力、時間，而且不能保證試情結(jié)果完全準確，輸精時觀察卵巢進行發(fā)情鑒定，不但會延長輸精時間，而且會造成應(yīng)激，影響排卵與卵子接收，造成整體受胎率下降[6]。在使用鮮精進行內(nèi)窺鏡輸精時，可以同期處理撤栓后48h 進行定時輸精。不進行試情將大幅降低勞動力和時間投入，使內(nèi)窺鏡輸精工作效率更高。