牛芊　邢文龍　劉紅旭　王雨桐　朱彥

摘要 目的：觀察丹紅注射液對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛（Unstable Angina Pectoris，UA）血瘀證患者擇期經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（Percutaneous CoronaryIntervention，PCI）圍手術(shù)期血清代謝組學(xué)的影響。方法：采用前瞻性、隨機(jī)、對(duì)照、單盲的臨床研究方法，選取2018年7月至2019年1月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院行PCI的中醫(yī)證屬血瘀證的UA患者61例作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為丹紅組（n=31）和對(duì)照組（n=30）。丹紅組采用西醫(yī)規(guī)范治療+丹紅注射液治療，對(duì)照組采用西醫(yī)規(guī)范治療+生理鹽水，納入健康志愿者10例。應(yīng)用非靶向代謝組學(xué)方法對(duì)丹紅組、對(duì)照組治療前、PCI術(shù)后5 d及健康志愿者血清代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析。結(jié)果：治療前，丹紅組與對(duì)照組血清代謝產(chǎn)物譜比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療前，丹紅組及對(duì)照組與健康組有較大的差異，差異代謝物包括甘油磷脂代謝、鞘脂代謝、嘌呤代謝、氨基酸代謝等代謝通路中相關(guān)代謝產(chǎn)物;PCI術(shù)后5 d，丹紅組與對(duì)照組患者的血清代謝物譜均趨向健康組，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;術(shù)后丹紅組患者的血清代謝物譜較對(duì)照組更接近健康組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：在西醫(yī)規(guī)范治療基礎(chǔ)上使用丹紅注射液，可使患者血清代謝產(chǎn)物水平更接近健康人群。

關(guān)鍵詞 不穩(wěn)定型心絞痛;血瘀證;丹紅注射液;代謝組學(xué);代謝通路;經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療;圍手術(shù)期;臨床研究;心肌保護(hù)

Effects of Danhong Injection on Perioperative Metabolomics in Patients with Unstable Angina Pectoris

NIU Qian1，XING Wenlong2，LIU Hongxu2，WANG Yutong3，ZHU Yan4

（1 Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Capital Medical University，Beijing，100010，China; 3 Capital Medical University，Beijing 100069，China; 4 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 301617，China）

Abstract Objective：To observe the effects of Danhong Injection on perioperative serum metabonomics in patients with blood stasis syndrome of unstable angina pectoris（UA）by using percutaneous coronary intervention（PCI） in a certain period.Methods：A prospective，randomized，controlled，single blind clinical trial was conducted.A total of 61 UA patients with TCM blood stasis syndrome undergoing elective PCI were selected as the research objects and were randomly divided into a Danhong group（n=31） and a control group（n=30），and 10 healthy volunteers were included as baseline.Danhong group received Western medicine+DHI treatment，the control group received Western medicine+saline.Non-targeted metabolomics methods were used to analyze the serum metabolites of Danhong group，and control group before treatment，5 days after PCI and serum metabolites of healthy volunteers.Results：Before treatment，there was no significant difference in serum metabolites between the Danhong group and the control group.Before treatment，there was significant difference among the above 2 groups and the healthy group.Differential metabolites mainly included glycerophospholipid，sphingolipid，purine，and amino acid groups，which were generated in their metabolic pathways.After 5 days of PCI，the profiles of serum metabolites were significantly closer to the healthy group.Compared with before treatment，there was a statistical difference; the serum metabolite profile of patients in the Danhong group was closer to the level of the healthy group than the control group，and the difference was statistically significant.Conclusion：The use of Danhong Injection on the basis of Western medicine standard treatment can make the patient′s serum metabolite level closer to healthy people.

Keywords Unstable angina pectoris; Prethrombotic state; Danhong Injection; Metabolomics; Metabolic pathway; Perioperative PCI; Perioperative period;Clinical research; Myocardial protection

中圖分類號(hào)：R289.5;R541文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.12.023

近年來(lái)，隨著我國(guó)冠心病發(fā)病率不斷升高，經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（Percutaneous Coronary Intervention，PCI）已成為冠心病的重要治療方式之一，2018年，中國(guó)大陸PCI年手術(shù)量已經(jīng)超過(guò)91萬(wàn)例，其中不穩(wěn)定型心絞痛（Unstable Angina Pectoris，UA）患者占PCI總數(shù)的66.73%。伴隨PCI的增多，與之相關(guān)的臨床問(wèn)題，如：無(wú)復(fù)流與慢血流、圍手術(shù)期心肌損傷（Perioperative Myocardial Injury，PMI）、再灌注損傷等越來(lái)越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。

PMI是指PCI術(shù)后心肌損傷相關(guān)生物標(biāo)志物水平的升高，有著復(fù)雜的發(fā)生機(jī)制。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的干預(yù)尚不能避免PMI的發(fā)生，這為中醫(yī)藥防治提供了空間[1]，有研究顯示丹紅注射液具有潛在的PCI圍手術(shù)期心肌保護(hù)作用，針對(duì)丹紅注射液PCI圍手術(shù)期心肌保護(hù)作用機(jī)制的研究也在不斷展開(kāi)，其抗炎、改善微循環(huán)、抗氧化應(yīng)激、抗凝以及促血管新生等藥理作用被陸續(xù)揭示[2-5]。但由于中醫(yī)藥作用機(jī)制存在多靶點(diǎn)、多重機(jī)制的復(fù)雜性，從單一角度探索，在解釋丹紅注射液作用機(jī)制方面尚存在局限性。代謝組學(xué)作為一種從整體上研究生物體代謝產(chǎn)物和代謝途徑的變化，進(jìn)而探尋其病理生理變化過(guò)程的研究方法，具有整體性、動(dòng)態(tài)性、即時(shí)性的特點(diǎn)[6]。基于此，本研究應(yīng)用非靶向代謝組學(xué)方法對(duì)丹紅注射液PCI圍手術(shù)期心肌保護(hù)機(jī)制進(jìn)行探索?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年7月至2019年1月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院行PCI的中醫(yī)證屬血瘀證的UA患者61例作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為丹紅組（n=31）和對(duì)照組（n=30）。2組患者性別、年齡、危險(xiǎn)因素等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;另選取2018年6月至2018年12月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院體檢中心體檢的健康志愿者10例作為健康組，3組一般資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本項(xiàng)目經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（20171020）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：1）UA診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)急診醫(yī)師分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)等在2016年頒布的《急性冠脈綜合征急診快速診療指南》及中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)《非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南（2016）》[7-8]。2）PCI按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)介入心臟病學(xué)組發(fā)布的《中國(guó)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療指南（2016）》[9]。3）PMI診斷標(biāo)準(zhǔn)依照2018年ESC/ACC/AHA/WHF聯(lián)合發(fā)布的第四版《全球心肌梗死新定義》[10]。

中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：中醫(yī)胸痹心痛病血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)證候部分》制定[11]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 1）符合UA診斷標(biāo)準(zhǔn)者;2）符合中醫(yī)胸痹心痛病血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)者;3）年齡18～86歲者;4）擬行PCI者;5）入院前2周未規(guī)律服用任何中藥制劑者;6）受試者或其法定代理人對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1）合并急性腦卒中者，有腦出血史者，有肝腎及造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)疾病者，有精神疾病的患者;2）合并其他能引起肌酶或心肌酶水平升高疾病者，如心肌炎、心力衰竭、骨骼肌損傷等;3）有慢性心功能不全且左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）<40%者;4）嚴(yán)重感染性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤患者;5）已知對(duì)丹紅注射液過(guò)敏者;6）觀察期間要求應(yīng)用含有活血化瘀成分中藥制劑者。

1.5 脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn) 1）納入后發(fā)現(xiàn)不符合UA診斷標(biāo)準(zhǔn)或冠脈影像學(xué)標(biāo)準(zhǔn)而被誤納入者;2）納入后冠脈造影顯示血管病變需行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)，或術(shù)者判斷無(wú)需進(jìn)行PCI手術(shù)，或拒絕接受PCI者;3）試驗(yàn)過(guò)程中服用其他中成藥或中藥湯劑者。因故剔除的病例應(yīng)記錄剔除原因，保留相關(guān)記錄，不做療效統(tǒng)計(jì)分析。但接受過(guò)治療，且有安全性記錄者，可視情況納入安全性分析。

1.6 中止試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) 1）出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，考慮為試驗(yàn)藥物所致者;2）出現(xiàn)重大的突發(fā)病情變化，需要重新調(diào)整治療方案者;3）出現(xiàn)其他不可預(yù)知的緊急情況者。

1.7 終止試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) 1）試驗(yàn)中發(fā)生嚴(yán)重安全性問(wèn)題;2）有證據(jù)證明試驗(yàn)藥物無(wú)效，不具有臨床價(jià)值，應(yīng)終止試驗(yàn)，避免延誤受試者的有效治療，同時(shí)避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失;3）因故無(wú)法保證試驗(yàn)受試者安全;4）在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)該方案有重大失誤，難以評(píng)價(jià)藥物效應(yīng);或者該方案在實(shí)施中發(fā)生了重大偏差，再繼續(xù)下去，難以評(píng)價(jià)藥物療效。

1.8 研究方法

1.8.1 隨機(jī)與盲法 采用前瞻性、隨機(jī)、對(duì)照、單盲的臨床試驗(yàn)方法，設(shè)定隨機(jī)種子數(shù)字，選取由隨機(jī)種子產(chǎn)生的180個(gè)隨機(jī)數(shù)字（預(yù)存120個(gè)補(bǔ)充量）。將180個(gè)隨機(jī)數(shù)字排定秩次，按編定秩次的奇偶進(jìn)行分組，數(shù)值為奇數(shù)者分配至丹紅組中，偶數(shù)者分配至對(duì)照組中。編制分配序列表，即隨機(jī)數(shù)字對(duì)應(yīng)的秩次與試驗(yàn)分組相對(duì)應(yīng)。對(duì)患者實(shí)施盲法試驗(yàn)干預(yù)，符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者，由主管醫(yī)師按照入組時(shí)間的先后領(lǐng)取編號(hào)（由小到大）及相應(yīng)編號(hào)的試驗(yàn)藥物，記錄每個(gè)受試對(duì)象的個(gè)人信息及其獲取的藥物編號(hào)。由護(hù)士負(fù)責(zé)藥物使用，每次使用后均記錄備案。2組均采用棕色套袋遮蔽輸液瓶，使用棕色輸液器進(jìn)行滴注，使受試者處于盲態(tài)。

1.8.2 治療方法 2組患者均按照《非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南（2016）》進(jìn)行西醫(yī)規(guī)范治療。在此基礎(chǔ)上，丹紅組予以丹紅注射液40 mL+生理鹽水250 mL，靜脈滴注，滴速控制在100 mL/h左右，2次/d。術(shù)前應(yīng)用2～3 d;冠脈造影穿刺成功后，靜脈滴注1次;術(shù)后應(yīng)用不少于5 d。對(duì)照組于同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用生理鹽水40 mL+生理鹽水250 mL，靜脈滴注。

1.8.3 血清樣本采集與初步處理 采集健康組受試者空腹血清樣本，采集丹紅組及對(duì)照組患者治療前和PCI術(shù)后5 d的血清樣本。所有入選患者和健康組受試者血清樣本的采集均要求空腹?fàn)顟B(tài)下（餐后8 h以上）。室溫下，促凝管采集靜脈血4 mL，血液樣本在室溫下自然靜置1 h，4 ℃下3 000 r/min離心10 min（離心半徑10 cm），收集上清液，置于-80 ℃冰箱凍存待測(cè)。

1.9 觀察指標(biāo)

1.9.1 PCI圍手術(shù)期CK-MB水平的變化及PMI的發(fā)生率 對(duì)2組患者PCI圍手術(shù)期心肌損傷標(biāo)志物CK-MB的變化進(jìn)行觀察，比較分析2組患者PMI的發(fā)生情況。

1.9.2 術(shù)后30 d主要心血管事件（MACE事件） 采用電話隨訪、微信隨訪、門診隨訪等方式，記錄患者術(shù)后30 d內(nèi)MACE事件發(fā)生情況，本研究MACE事件包括：導(dǎo)致再次住院的再發(fā)心絞痛、再發(fā)心肌梗死、冠脈血管重建、非致死性腦卒中、全因死亡。

1.9.3 代謝組學(xué)指標(biāo)分析 通過(guò)對(duì)治療前后丹紅組、對(duì)照組和健康組的血清代謝產(chǎn)物及代謝途徑進(jìn)行比較分析，探討丹紅注射液對(duì)UA血瘀證患者PCI圍手術(shù)期代謝組學(xué)可能的影響。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 療效學(xué)指標(biāo)采用SPSS 15.0（PN：32119001，SN：5045602）統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組呈正態(tài)分布且方差齊性的連續(xù)性變量組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)術(shù)前術(shù)后比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.11 代謝組學(xué)方法 采用超高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-Q/TOF-MS）對(duì)樣本進(jìn)行非靶向代謝組學(xué)分析。

1.11.1 血清樣本制備 1）將待測(cè)樣品從-80 ℃冰箱中取出，置于4 ℃的冰水中融化30～60 min;2）取100 μL血清至標(biāo)記好標(biāo)簽的1.5 mL離心管中，加入200 μL的乙腈;3）充分振蕩10 min，進(jìn)行蛋白沉淀。12 000 r/min，4 ℃，離心半徑10 cm，離心10 min，取上層溶液100 μL，置于200 μL內(nèi)襯管中，待測(cè)。

1.11.2 色譜條件及反相色譜分離條件 色譜分離采用Thermo Scientific的U3000超快速液相色譜使用反相色譜對(duì)樣本進(jìn)行分析。梯度系統(tǒng)的條件分別見(jiàn)表1。反相色譜分離條件：色譜柱Waters UPLC HSS T3（1.8 μm 2.1 mm×100 mm）;流動(dòng)相：A（甲醇，0.1%甲酸，10 mmol/L乙酸銨）和B（水，0.1%甲酸，10 mmol/L乙酸銨）;洗脫程序見(jiàn)表1，流速：0.3 mL/min;進(jìn)樣量為1.0 μL;柱溫：50 ℃。

1.11.3 親水色譜分離條件 色譜柱Waters UPLC BEH Amide（1.7 μm 2.1 mm×100 mm）;流動(dòng)相：A（乙腈，0.1%甲酸，10 mmol/L乙酸銨）和B（水，0.1%甲酸，10 mmol/L乙酸銨）;洗脫程序見(jiàn)表2。流速：0.3 mL/min;進(jìn)樣量為1 μL;柱溫：40 ℃。

1.11.4 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜分析使用裝備熱電噴霧離子源的四極桿軌道離子阱質(zhì)譜儀（Q Exactive，ThermoFisher Scientific）。正離子離子源電壓分別為3.7 kV。毛細(xì)管加熱溫度320 ℃。翹氣壓力30 psi，輔助氣壓力10 psi。容積加熱蒸發(fā)溫度300 ℃。翹氣、輔助氣及碰撞氣均為氮?dú)狻Ｅ鲎矚鈮毫?.5 mTorr。一級(jí)全掃描參數(shù)為：分辨率70 000，自動(dòng)增益控制目標(biāo)為1×106，最大隔離時(shí)間50 ms，質(zhì)荷比掃描范圍50～1 500 Da。液質(zhì)系統(tǒng)由Xcalibur 2.2 SP1.48軟件控制。

1.11.5 差異代謝標(biāo)志物的鑒定 根據(jù)初步所篩選出的差異物一級(jí)精確分子量和對(duì)質(zhì)控樣本進(jìn)行MS/MS二級(jí)掃描得到的二級(jí)質(zhì)譜圖，搜索在線數(shù)據(jù)庫(kù)HMDB，比較質(zhì)譜的質(zhì)荷比m/z或者精確分子質(zhì)量Mass，誤差限制0.01 Da。對(duì)應(yīng)代謝物的二級(jí)圖譜及碎片分子量，經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)推導(dǎo)得出初步結(jié)果，最后通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品的MS/MS質(zhì)譜圖比較進(jìn)行鑒定。

1.11.6 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法 對(duì)采集好的液相-質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用Progenesis QI軟件處理，依次進(jìn)行導(dǎo)入原始數(shù)據(jù)、峰對(duì)齊、峰提取、歸一化處理，形成保留時(shí)間、質(zhì)荷比和峰強(qiáng)度的表格。反相色譜和親水色譜提取峰的時(shí)間分別為1～18 min和1～12 min。各種添加劑離子均去卷積到每一個(gè)離子特征。

分別取各組所有樣品各5 μL混合均勻，經(jīng)前處理作為質(zhì)控樣品（前處理方法和其他樣品一樣）。首先采用5個(gè)空白樣本平衡色譜柱，再采用3個(gè)質(zhì)控樣本平衡柱條件。然后每間隔6～8個(gè)樣本插入1個(gè)質(zhì)控樣本用于監(jiān)測(cè)整個(gè)液質(zhì)系統(tǒng)的穩(wěn)定性和重復(fù)性。計(jì)算質(zhì)控樣本中提取的代謝特征的變異系數(shù)值，變異系數(shù)超過(guò)15%的代謝特征被刪除。

應(yīng)用SIMCA14.1（Umetrics）進(jìn)行主成分分析（PCA），偏最小二乘法判別分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA），單樣本方差分析和t檢驗(yàn);采用PLS-DA模型的VIP值（閾值>1），并結(jié)合t檢驗(yàn)的P值（P<0.05），以及組間倍率變化（Fold Change）值（FC值<0.75，1.3

2 結(jié)果

2.1 療效指標(biāo)

2.1.1 2組患者PMI發(fā)生率比較 61例中有6例發(fā)生了PMI，總發(fā)生率為9.83%，丹紅組PMI發(fā)生率為3.32%，對(duì)照組為16.67%，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.1.2 2組患者PCI圍手術(shù)期CK-MB水平的動(dòng)態(tài)變化比較 手術(shù)前，2組CK-MB水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.83），具有可比性。手術(shù)后，丹紅組24 h CK-MB、5 d CK-MB均升高，與手術(shù)前比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.36，P=0.78）;對(duì)照組術(shù)后24 h的CK-MB和術(shù)后5 d的CK-MB均升高，與手術(shù)前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01，P=0.04）;2組術(shù)后5 d的CK-MB均較術(shù)后24 h回落，同組比較，丹紅組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.23），對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04）。

手術(shù)后2組間比較，丹紅組術(shù)后24 h的CK-MB水平較對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04），術(shù)后5 d 2組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.38）。見(jiàn)表4。

2.1.3 2組患者PCI術(shù)后30 d內(nèi)MACE發(fā)生率的比較 對(duì)61例進(jìn)行了術(shù)后30 d的隨訪工作。結(jié)果顯示，2組共5例受試者發(fā)生了再發(fā)心絞痛，其中丹紅組1例，對(duì)照組4例（3.2%比13.3%），丹紅組及對(duì)照組術(shù)后30 d內(nèi)MACE總發(fā)生率為8.3%，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2組未失訪患者，未出現(xiàn)死亡、再發(fā)心肌梗死、冠脈血管重建及非致死性腦卒中。

2組患者在試驗(yàn)過(guò)程中均未出現(xiàn)藥疹、出血等表現(xiàn)，血尿便常規(guī)、肝腎功能、血凝系列等未見(jiàn)因試驗(yàn)用藥引起的異常。2組患者試驗(yàn)過(guò)程中一般體格檢查均未見(jiàn)明顯異常。試驗(yàn)期間無(wú)丹紅注射液相關(guān)的不良反應(yīng)發(fā)生，安全性良好。

2.2 代謝組學(xué)分析結(jié)果

2.2.1 圖1A、1B依次為試驗(yàn)樣本的反相色譜正離子總離子流圖（TIC）以及親水色譜正離子TIC。結(jié)果發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物得到了良好分離，且組間存在差異。主成分分析（PCA）模型參數(shù)見(jiàn)表5，反向色譜正離子圖及親水色譜正離子圖見(jiàn)圖2。

2.2.2 丹紅組術(shù)前和對(duì)照組術(shù)前PCA及OPLS-DA分析 分析模型參數(shù)分別見(jiàn)表6、表7。

采用置換驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)行模型過(guò)擬合評(píng)價(jià)。見(jiàn)圖3E、圖4F。R2X代表模型對(duì)樣本在X軸上的解釋率，Q2表示模型對(duì)樣本的預(yù)測(cè)率，分析結(jié)果顯示丹紅組術(shù)前和對(duì)照組術(shù)前OPLS-DA模型的R2X較小，Q2小于0，提示該模型未過(guò)度擬合，說(shuō)明丹紅組術(shù)前和對(duì)照組術(shù)前血清中代謝物在種類和數(shù)量上沒(méi)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異，術(shù)前2組血清樣本的代謝輪廓較為接近，具有可比性。

2.2.3 丹紅組術(shù)前和對(duì)照組術(shù)前與健康組的PCA及OPLS-DA分析 3組分析模型參數(shù)分別見(jiàn)表8、表9。

在PCA得分圖中可以看出，術(shù)前的丹紅組和對(duì)照組與健康組有明顯的分離，結(jié)合分析結(jié)果提示疾病組的代謝網(wǎng)絡(luò)相對(duì)于健康組發(fā)生紊亂，患者與健康者血清中代謝物在種類及數(shù)量上存在明顯的差異。

2.2.4 丹紅組術(shù)后及對(duì)照組術(shù)后與健康組的PLS-DA分析 分析模型參數(shù)分別見(jiàn)表10、圖5。

從代謝輪廓的相對(duì)位置上看，丹紅組術(shù)后的代謝輪廓更接近于健康組。丹紅注射液對(duì)疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物起到了一定的回調(diào)作用。相關(guān)差異代謝物鑒別結(jié)果。見(jiàn)表11、表12。

3 討論

本研究顯示，在丹紅組和對(duì)照組受試者基本情況一致的情況下，丹紅組PMI發(fā)生率有低于對(duì)照組的趨勢(shì)，丹紅組PCI術(shù)后CK-MB升高程度低于對(duì)照組，且丹紅組術(shù)后CK-MB的回落時(shí)間早于對(duì)照組，提示UA血瘀證患者PCI圍手術(shù)期應(yīng)用丹紅注射液可以對(duì)心肌損傷標(biāo)志物的升高起到抑制作用，具有一定的圍手術(shù)期心肌保護(hù)作用。丹紅組PMI的發(fā)生率、術(shù)后30 d MACE事件發(fā)生率均低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。綜上所述，丹紅注射液對(duì)UA血瘀證患者PCI圍手術(shù)期具有一定的心肌保護(hù)作用。本研究屬于探索性試驗(yàn)，納入樣本量較小，期待更大規(guī)模的隨機(jī)對(duì)照研究及相關(guān)基礎(chǔ)研究的進(jìn)一步證實(shí)。

代謝組學(xué)分析鑒定顯示，丹紅組、對(duì)照組與健康組的血清代謝物譜存在著顯著差異，這些差異代謝產(chǎn)物涵蓋了甘油磷脂代謝、鞘脂代謝、嘌呤代謝、氨基酸代謝等多個(gè)代謝通路。脂質(zhì)代謝紊亂在冠心病發(fā)病過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色[12-13]。在甘油磷脂代謝途徑中，術(shù)前患者的血清樣本中C18∶1、C18∶2溶血磷脂酰膽堿以及C18∶0、C18∶1溶血磷脂酰乙醇胺水平較健康者有明顯降低，上述代謝產(chǎn)物與機(jī)體脂質(zhì)代謝密切相關(guān)，與胰島素抵抗水平指數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)[14];術(shù)前患者的甘油磷脂酰膽堿、C18∶3/C16∶0、C22∶6/C14∶0、C20∶4/C16∶1以及C20∶4/C16∶0磷脂酰膽堿等的水平較健康者也有著明顯的下降;C14∶0溶血磷脂酰膽堿與胰島素抵抗水平指標(biāo)呈顯著正相關(guān)，術(shù)前患者血清中C14∶0溶血磷脂酰膽堿含量較健康組上升[15]。鞘脂類物質(zhì)與冠心病關(guān)系密切，鞘氨醇的蓄積與心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)，并在冠心病的發(fā)生、發(fā)展方面扮演著重要角色，術(shù)前患者SM（d18∶1/22∶1（13Z））水平較健康者有明顯升高[16]。以上代謝產(chǎn)物水平的異常，提示術(shù)前患者發(fā)生了脂質(zhì)代謝紊亂。在經(jīng)過(guò)規(guī)范的藥物及PCI后，患者的上述指標(biāo)均趨近健康組的水平，提示規(guī)范治療改善了UA患者脂質(zhì)代謝紊亂;而術(shù)后丹紅組的水平較對(duì)照組更接近健康組，提示在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)規(guī)范治療的基礎(chǔ)上加用丹紅注射液，可以更好地調(diào)控UA血瘀證患者的脂質(zhì)代謝紊亂，這可能是丹紅注射液治療UA血瘀證的作用機(jī)制之一。

支鏈氨基酸（BCAA）作為人體必需氨基酸，在生理狀態(tài)下可以發(fā)揮多種重要的生理作用，如作為信號(hào)分子調(diào)節(jié)糖脂代謝、細(xì)胞凋亡及線粒體自噬等[17-18]。但當(dāng)其代謝出現(xiàn)紊亂時(shí)，則可能會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗、糖耐量異常及糖尿病的發(fā)生，且與動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生密切相關(guān)，高水平的BCAA是心肌梗死和冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[19-23]。本研究顯示術(shù)前患者血清樣本中L-亮氨酸水平較健康者有顯著升高，提示UA血瘀證發(fā)病過(guò)程中可能存在BCAA代謝異常，而經(jīng)過(guò)治療后的丹紅組和對(duì)照組的血清L-亮氨酸水平較前下降;與對(duì)照組比較，丹紅組的下降水平更趨近于健康組，提示丹紅注射液在UA血瘀證患者機(jī)體BCAA代謝過(guò)程中起到較好的調(diào)節(jié)作用。

PCI術(shù)前，丹紅組和對(duì)照組的L-Octanoylcarnitine、Hypoxanthine、Decanoylcarnitine、9-Decenoylcarnitine、DL-2-Aminooctanoic Acid、L-苯丙氨酸、L-色氨酸等代謝成分較健康組均有顯著的升高，提示在UA的發(fā)病過(guò)程中伴隨著嘌呤代謝、肉堿、氨基酸代謝的紊亂。肉堿在機(jī)體的脂肪代謝和能量產(chǎn)生中起著重要作用，它可以轉(zhuǎn)運(yùn)脂酰輔酶A通過(guò)線粒體內(nèi)膜進(jìn)入線粒體基質(zhì)進(jìn)行供能，可以改善機(jī)體能量供應(yīng)，并促進(jìn)缺血心肌脂肪代謝[24]。本研究中患者肉堿水平較健康者升高，其代謝過(guò)程可能為UA血瘀證患者長(zhǎng)期存在著葡萄糖及脂肪利用的異常，使得肝臟脂肪合成增加，分解代謝減少，體內(nèi)游離肉堿水平代償性增加。在經(jīng)過(guò)藥物治療及PCI術(shù)后，以上代謝產(chǎn)物的水平均較之前降低，丹紅組的降低趨勢(shì)則更接近健康組的水平。

綜上所述，通過(guò)應(yīng)用非靶向代謝組學(xué)的方法對(duì)PCI圍手術(shù)期UA血瘀證患者及健康者之間的血清差異代謝物進(jìn)行分析，我們發(fā)現(xiàn)了與UA血瘀證病理生理過(guò)程有強(qiáng)關(guān)聯(lián)的潛在生物標(biāo)志物，這為從整體水平探索UA病理生理機(jī)制及尋求新的治療途徑提供了依據(jù)。研究也提示丹紅注射液通過(guò)在甘油磷脂代謝、鞘脂代謝、嘌呤代謝、氨基酸代謝等多個(gè)代謝通路上的調(diào)節(jié)，起到對(duì)UA血瘀證患者PCI圍手術(shù)期心肌保護(hù)的作用。代謝組學(xué)方法在現(xiàn)代中醫(yī)藥研究方面有較大的優(yōu)勢(shì)，而更進(jìn)一步的研究可在目前研究的基礎(chǔ)上聯(lián)合多種組學(xué)技術(shù)，采用多種技術(shù)方法融合和多層面交叉研究，從而更深入、更全面地揭示丹紅注射液心肌保護(hù)作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)

[1]劉紅旭，吳永健，王顯，等.經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療圍手術(shù)期心肌損傷中醫(yī)診療專家共識(shí)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017，37（4）：389-393.

[2]付長(zhǎng)庚，劉龍濤，王躍飛，等.丹紅注射液臨床應(yīng)用中國(guó)專家共識(shí)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2018，38（4）：389-397.

[3]Gao LN，Cui YL，Wang QS，et al.Amelioration of Danhong injection on the lipopolysaccharide-stimulated systemic acute inflammatory reaction via multi-target strategy[J].J Ethnopharmacol，2013，149（3）：772-782.

[4]Chen PL，Li WT，Wang J，et al.Association between MTHFR gene polymorphisms（C677T，A1298C）and genetic susceptibility to prostate cancer：a meta-analysis[J].Genet Mol Res，2015，14（4）：19191-19202.

[5]He S，Zhao T，Guo H，et al.Coordinated activation of VEGF/VEGFR-2 and PPARδ pathways by a multi-component chinese medicine DHI accelerated recovery from peripheral arterial disease in type 2 diabetic mice[J].PLoS One，2016，11（12）：e0167305.

[6]趙琳琳，邱新建，李若夢(mèng)，等.代謝組學(xué)在冠心病及中醫(yī)證候中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2018，38（9）：1143-1147.

[7]費(fèi)菲，趙海.急性冠脈綜合征概念更新帶來(lái)診療新變化——傅國(guó)勝教授解讀急性冠脈綜合征急診快速診治指南（2019）[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2019，9（22）：1-3.

[8]中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南（2016）[J].中華心血管病雜志，2017，45（5）：359-376.

[9]中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)介入心臟病學(xué)組，中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)心血管內(nèi)科醫(yī)師分會(huì)血栓防治專業(yè)委員會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).中國(guó)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療指南（2016）[J].中華心血管病雜志，2016，44（5）：382-400.

[10]Birnbaum Y，F(xiàn)iol M，Nikus K，et al.A counterpoint paper：comments on the electrocardiographic part of the 2018 fourth universal definition of myocardial infarction endorsed by the international society of electrocardiology and the international society for holter and noninvasive electrocardiology[J].Ann Noninvasive Electrocardiol，2020，25（5）：e12786.

[11]國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局.《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)證候部分》GB/T 16751.2-1997[S].北京：中華人民共和國(guó)：國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局，1997.

[12]張蕾，張琪，游云，等.基于代謝組學(xué)技術(shù)探討高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化痰瘀證候的演變規(guī)律[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（7）：823-833.

[13]師帥，胡元會(huì).冠心病痰濁證與脂蛋白代謝的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（12）：5529-5532.

[14]Wallace M，Morris C，O′Grada CM，et al.Relationship between the lipidome，inflammatory markers and insulin resistance[J].Mol Biosyst，2014，10（6）：1586-1595.

[15]Rauschert S，Uhl O，Koletzko B，et al.Lipidomics reveals associations of phospholipids with obesity and insulin resistance in young adults[J].J Clin Endocrinol Metab，2016，101（3）：871-879.

[16]朱黎霞，張英豐.基于鞘脂組學(xué)的冠心病痰瘀互結(jié)證證本質(zhì)研究思路探討[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（7）：2959-2963.

[17]Newgard CB，An J，Bain JR，et al.A branched-chain amino acid-related metabolic signature that differentiates obese and lean humans and contributes to insulin resistance[J].Cell Metab，2009，9（4）：311-326.

[18]Zhou M，Lu G，Gao C，et al.Tissue-specific and nutrient regulation of the branched-chain α-keto acid dehydrogenase phosphatase，protein phosphatase 2Cm（PP2Cm）[J].J Biol Chem，2012，287（28）：23397-23406.

[19]Sas KM，Karnovsky A，Michailidis G，et al.Metabolomics and diabetes：analytical and computational approaches[J].Diabetes，2015，64（3）：718-732.

[20]Newgard CB.Interplay between lipids and branched-chain amino acids in development of insulin resistance[J].Cell Metab，2012，15（5）：606-614.

[21]Shah SH，Crosslin DR，Haynes CS，et al.Branched-chain amino acid levels are associated with improvement in insulin resistance with weight loss[J].Diabetologia，2012，55（2）：321-330.

[22]馮禹楠，劉浩林，汪欽，等.支鏈氨基酸及其臨床應(yīng)用[J].心臟雜志，2019，31（2）：232-237.

[23]Shah SH，Bain JR，Muehlbauer MJ，et al.Association of a peripheral blood metabolic profile with coronary artery disease and risk of subsequent cardiovascular events[J].Circ Cardiovasc Genet，2010，3（2）：207-214.

[24]楊瑞鋒，李志艷，徐國(guó)賓，等.肉毒堿的生物學(xué)特性及其與臨床疾病的關(guān)系[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2005，9（2）：310-313.

（2020-06-08收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81273741）;北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（7142077）;許夏基金項(xiàng)目（XX-201710）;北京中醫(yī)醫(yī)院院級(jí)課題暨兩院合作課題（YJ201720）

作者簡(jiǎn)介：牛芊（1991.12—），男，碩士，住院醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合防治心血管病，E-mail：18810550237@163.com

通信作者：劉紅旭（1963.01—），男，本科，主任醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合防治心血管病，E-mail：LHX_@263.net;邢文龍（1988.08—），男，博士，主治醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合防治心血管疾病基礎(chǔ)與臨床研究，E-mail：xingwenlong_00@163.com