陳 俊

（羅山縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽 464200）

高致病性禽流感是由A型流感病毒引起的禽類的一種急性、烈性、高度致死性傳染病。對于養(yǎng)禽業(yè)來說幾乎是毀滅性的，危害巨大。目前，由H5、H7亞型毒株引起的禽流感稱為高致病性禽流感，主要特征是突然死亡，頭部和面部水腫，流淚，呼吸困難，經(jīng)常甩頭，常發(fā)出“咯咯”聲，腳鱗出血，雞冠和肉髯發(fā)紺，有的病雞驚厥、打滾或轉(zhuǎn)圈，發(fā)病率和死亡率可達100%。高致病性禽流感已被我國納入強制免疫計劃，并要求采用重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N1Re—11株和Re—12株，H7N9H7—Re3株）春秋兩季集中強制免疫。為了解羅山縣高致病性禽流感免疫效果，開展疫苗免疫效果評估工作，及時掌握羅山縣高致病性禽流感防控動態(tài)，2020年10月，羅山縣動物疫病預(yù)防控制中心組織開展免疫抗體檢測，以便為羅山縣高致病性禽流感監(jiān)測預(yù)警提供參考。

1 抽樣檢測地點

選取高店、楠桿、周黨、子路、莽張、朱堂、彭新、東卜、廟仙、靈山等10個家禽養(yǎng)殖大鄉(xiāng)作為檢測調(diào)查地點。

2 材料與方法

2.1 采樣材料

采樣箱、5ml采血器、酒精棉球、干棉球、記號筆、采樣單、試管架、密封袋等。

2.2 檢測材料

離心機、離心管、移液槽、移液器、滴頭、1%紅細(xì)胞、一次性微孔板、高致病性禽流感血凝抑制試驗抗原、PBS液等。

2.3 采樣方法

結(jié)合羅山縣春秋兩季強制免疫實際情況，對10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)在集中免疫21d后進行了抽樣抗體檢測，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機抽取3個養(yǎng)殖場、1個散養(yǎng)戶和1個活禽交易市場。采取簡單隨機抽樣方式，每個養(yǎng)殖場和交易市場各抽取30份血樣，散養(yǎng)戶每戶抽取10份血樣。此次監(jiān)測共采集樣品分布如下：30個家禽養(yǎng)殖場900份，10個散養(yǎng)戶100份，10個活禽交易市場300份，在50個場群中共采集樣品1300份。所有樣品嚴(yán)格按照操作規(guī)程采取翅靜脈采集血液，每只1.5～2ml，以3000rpm離心5min，析出血清，完善編號與登記，置于-20℃保存?zhèn)錂z。

2.4 檢測方法及依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)

嚴(yán)格按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）血凝抑制試驗（HI）檢測H5、H7亞型禽流感免疫抗體。判斷標(biāo)準(zhǔn)按照個體HI抗體效價≥24免疫合格個體，群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格群體，H5、H7群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格場群。檢測試劑禽流感H5亞型病毒（Re-11株）、（Re-12株）血凝抑制試驗抗原，批號均為：2019005，H7N9（H7-Re3株）抗原批號：20200901，以上三種抗原試劑均為哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

3 結(jié)果與分析

在50個家禽場群中，使用了重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗的有38個場群，占場群數(shù)量的76%，使用其他禽流感類型疫苗或未免疫的有12個場群。在50個場群的1300份檢測樣品中，H5亞型病毒（Re-11株）個體抗體合格率為84.1%（1093/1300）；H5亞型病毒（Re-12株）個體抗體免疫合格率為83.8%（1090/1300）；H7N9（H7-Re3株）個體抗體免疫合格率為82.5%（1072/1300）。在采用（H5+H7）三價滅活疫苗免疫的38個場群中（包括30個家禽養(yǎng)殖場、7個活禽交易市場、1個散養(yǎng)戶共1120份血樣），H5亞型病毒（Re-11株）個體抗體合格率為90.3%（1011/1120）；H5亞型病毒（Re-12株）個體抗體免疫合格率為89.6%（1004/1120）；H7N9（H7-Re3株）個體抗體免疫合格率為89.5%（1002/1120）。通過檢測結(jié)果顯示，對于使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗的養(yǎng)殖場群體合格率和個體合格率均高于使用其他疫苗和未免疫的場群，且差異較大（具體比率詳見表1至表3）。

表1 免疫場群比例

表2 50個場群樣品抗體合格率

表3 38個免疫場群樣品抗體合格率

在50個場群的1300份樣品中，雞樣品為1117份，鴨樣品為155份，鵝樣品為28份。其中雞、鴨、鵝H5亞型病毒（Re-11株）個體抗體合格率分別為85.6%（956/1117）、78.7%（122/155）、53.6%（15/28）；H5亞型病毒（Re-12株）個體抗體免疫合格率分別為84.9%（948/1117）、83.2%（129/155）、46.4%（13/28）；H7N9（H7-Re3株）個體抗體免疫合格率為83.2%（929/1117）、84.5%（131/155）、42.9%（12/28）。結(jié)果顯示，雞、鴨、鵝個體抗體合格率依次降低，雞、鴨抗體合格率明顯高于鵝。（個體免疫合格率見下表4）

表4 雞、鴨、鵝個體免疫合格率

4 小結(jié)與討論

此次共抽查羅山縣10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)50個家禽養(yǎng)殖場，通過血清學(xué)檢測結(jié)果表明，家禽養(yǎng)殖場使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗完全可以達到免疫保護水平，而且效果顯著。羅山縣大多數(shù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)普遍免疫較好，H5、H7亞型場群合格率和個體合格率均高于70%，僅個別場、戶未檢測到H7亞型禽流感免疫抗體。

從此次檢測數(shù)據(jù)和調(diào)查情況來看，羅山縣秋防場群免疫密度未達到100%。究其原因是個別家禽養(yǎng)殖戶對該病重視程度不夠，防控力度不強，有一些養(yǎng)殖場、戶沒有替換使用（H5+H7）三價滅活疫苗，甚至個別散養(yǎng)戶根本就未免疫。建議畜牧部門加大宣傳力度，普及家禽養(yǎng)殖場、戶嚴(yán)格按照免疫程序，使用重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗進行春秋兩季集中強制免疫，同時做好抽樣檢測工作，對免疫不合格的場群及時進行補免，確保羅山縣家禽養(yǎng)殖業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展。