唐 娟，俸瑞發(fā),伍金鳳

(桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 a.病理科；b. 乳腺甲狀腺外科，廣西 桂林 541199)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是內(nèi)分泌系統(tǒng)常見惡性腫瘤，也是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種類型，占所有甲狀腺惡性腫瘤的80%～90%，發(fā)病率逐年升高，該類腫瘤在中青年女性中的發(fā)生率較高[1]。大部分甲狀腺乳頭狀癌的生物學(xué)行為相對惰性，患者10年生存率超過90%[2]，國內(nèi)研究揭示，患者術(shù)后10年生存率可高達96%[3-4]，早期明確診斷對甲狀腺乳頭狀癌患者有重要意義。甲狀腺乳頭狀癌患者臨床通常表現(xiàn)為無癥狀的頸部腫塊或甲狀腺結(jié)節(jié)，與甲狀腺良性病變不能區(qū)分。近年隨著影像技術(shù)的發(fā)展，雖然超聲檢查能在一定程度上區(qū)分良惡性甲狀腺病變，但仍需病理組織學(xué)金標(biāo)準(zhǔn)確診。在病理診斷中，甲狀腺良性增生性病變與一些不典型的甲狀腺乳頭狀癌在組織結(jié)構(gòu)及細胞形態(tài)方面具有相似性，單純依據(jù)形態(tài)學(xué)診斷有困難。近年隨著分子生物學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)一些有助于鑒別甲狀腺良惡性病變的生物分子標(biāo)志物。本研究探討生物分子標(biāo)志物CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌病理診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年12月本院收治的甲狀腺乳頭狀癌患者202例與甲狀腺良性病變患者51例，所有患者臨床病理資料完整，均經(jīng)手術(shù)獲取了病灶組織，術(shù)前均未行放化療治療。202例甲狀腺乳頭狀癌患者，男24例，女178例；年齡16～86歲，平均(45.2±12.0)歲。51例甲狀腺良性病變患者，男10例，女41例；年齡19～75歲，平均(52.3±13.1)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)過桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)；患者知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 患者均經(jīng)手術(shù)切除病灶，標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定24 h后，取病灶組織塊，采用全自動組織脫水機進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟，石蠟包埋備用。

1.2.2 免疫組化 均采用EnVision兩步法染色，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO一抗均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。石蠟標(biāo)本連續(xù)切片約4 μm厚，60 ℃烤片1 h以防脫片，切片置入二甲苯脫蠟15 min，重復(fù)2次，再依次置入無水酒精、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10 min，清水沖洗5 min，利用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)3 min，3%過氧化氫液浸泡封閉10 min，滴加一抗37 ℃ 孵育60 min，采用PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，滴加二抗37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。

1.2.3 結(jié)果判讀 由兩位高年資病理診斷醫(yī)師利用光學(xué)顯微鏡獨立閱片，觀察切片內(nèi)病變細胞著色情況，進行免疫組化結(jié)果評估。CK19、TPO陽性染色位于細胞質(zhì)，HBME-1陽性染色位于細胞質(zhì)/膜，Galectin-3陽性染色位于細胞核/質(zhì)/膜，陽性細胞>10%為陽性，陽性細胞≤10%為陰性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n，%表示，采用χ2檢驗；應(yīng)用ROC曲線分析CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達模式

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽性表達，且CK19表現(xiàn)為細胞質(zhì)著色，HBME-1表現(xiàn)為細胞膜及細胞質(zhì)著色，Galectin-3表現(xiàn)為細胞膜、質(zhì)、核均著色，三者在甲狀腺良性病變中多為陰性；TPO的表達情況則相反，在甲狀腺良性病變中呈陽性，表現(xiàn)為細胞質(zhì)著色，而在甲狀腺乳頭狀癌中出現(xiàn)失表達。詳見圖1。

圖1 免疫組織化學(xué)檢測CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達(200×)

2.2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達情況

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中的表達陽性率分別為99.01%、92.57%、98.02%，高于在甲狀腺良性病變中的表達54.90%、21.57%、31.37%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的表達陽性率為8.42%低于甲狀腺良性病變中的表達90.20%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺良性病變組織中的表達(n，%)

2.3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移患者中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，他們的表達與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。詳見表2。

表2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析(n，%)

2.4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯的相關(guān)性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯與無侵犯患者中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，他們的表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯無相關(guān)性。詳見表3。

表3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯的相關(guān)性分析(n，%)

2.5 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值分析

ROC曲線分析表明，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO聯(lián)合檢測與任意單一檢測在甲狀腺乳頭狀癌患者中的診斷靈敏度及特異性均較高。詳見表4和圖2。

表4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能

圖2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷ROC曲線

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌的診斷主要依據(jù)其典型、明確的核特征，如核拉長重疊、核溝、核內(nèi)假包涵體等，然而，在某些病例中，典型核特征不明確時，準(zhǔn)確的診斷變得困難。同時，一些甲狀腺良性病變也可出現(xiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)和核的形態(tài)變化，形態(tài)學(xué)與甲狀腺乳頭狀癌高度相似，這使兩者的鑒別極具挑戰(zhàn)。因此，運用有效的分子生物學(xué)方法輔助診斷是十分必要的。

CK19是一種低分子量細胞角蛋白，由KRT19基因編碼，在各種上皮組織和腫瘤中表達。研究結(jié)果顯示，CK19在甲狀腺乳頭狀癌中通常呈現(xiàn)彌漫的強表達，而在甲狀腺良性病變中也可有一定程度表達[5]。HBME-1即人骨髓內(nèi)皮細胞標(biāo)記物，是間皮細胞表面微絨毛表面特異性標(biāo)記物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[6]。近年來，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌的研究逐漸增多，有研究顯示，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中陽性率較高，在良性病變中僅少數(shù)表達[7-8]。Galectin-3即半乳糖凝集素-3，是β-半乳糖苷結(jié)合蛋白動物凝集素家族成員之一，其編碼基因位于1p13。目前研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在多種癌組織中的表達顯著高于正常組織，如甲狀腺乳頭狀癌、喉癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌[9]等。研究證實Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤的診斷中有較高的價值，特別是在甲狀腺乳頭狀癌有較高表達[10-11]。TPO是一種合成甲狀腺激素所必需的膜結(jié)合蛋白，它催化酪氨酸殘基的碘化和偶聯(lián)于甲狀腺球蛋白，形成甲狀腺激素T3和T4，被認(rèn)為是甲狀腺分化標(biāo)記物，在甲狀腺癌中表達降低[12]。CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的研究均顯示此4項生物分子標(biāo)記物在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中的表達存在顯著差異，提示他們可能成為診斷甲狀腺乳頭狀癌的有效參考標(biāo)記物，但對其診斷敏感度和特異性的報道不一，仍存在爭議。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭狀癌中CK19、HBME-1、Galectin-3的陽性率分別為99.01%、92.57%、98.02%，明顯高于甲狀腺良性病變組的54.90%、21.57%、31.37%，而TPO的陽性率8.42%則明顯低于甲狀腺良性病變組的90.20%，與Sanuvada等[11]和Huang等[13]的研究結(jié)果相似，表明以上4項指標(biāo)對甲狀腺乳頭狀癌均具有良好的提示作用，在鑒別甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中具有較高的應(yīng)用價值。本研究ROC曲線分析顯示CK19、HBME1、Galectin3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷靈敏度分別為0.990、0.926、0.980、0.916，特異性分別為0.451、0.784、0.686、0.902，與多項研究結(jié)果顯示的 CK19具有高靈敏度低特異性，HBME-1、Galectin-3靈敏度和特異性居中一致[10-11，13-14]。本研究結(jié)果顯示，TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷特異性最高，4項指標(biāo)聯(lián)合檢測靈敏度為0.990、特異性為0.902。雖然聯(lián)合檢測的靈敏度和特異性沒有明顯優(yōu)于任何單一指標(biāo)檢測，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但在實際工作中聯(lián)合檢測仍能避免因?qū)嶒炚`差造成的風(fēng)險，為甲狀腺病變的準(zhǔn)確診斷提供更多保障。

盡管甲狀腺乳頭狀癌通常分化良好，生長緩慢，并且局限在原發(fā)部位，但長期得不到處理的甲狀腺乳頭狀癌也可以發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和被膜侵犯，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和被膜侵犯與腫瘤遠處轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)關(guān)系密切，且對甲狀腺乳頭狀癌分期及手術(shù)范圍也有影響[15]。近期一項針對55歲以下甲狀腺乳頭狀癌患者的研究顯示，復(fù)發(fā)率與診斷時的年齡、腫瘤大小、甲狀腺被膜侵犯、多灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是較高復(fù)發(fā)率的獨立危險因素，年齡越小，復(fù)發(fā)率越高[16]，故淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和被膜侵犯均是甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后不良的影響因素。本研究結(jié)果顯示，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和被膜侵犯沒有相關(guān)性，即以上4項指標(biāo)不能作為甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后評估指標(biāo)。

綜上所述，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中的表達均具有顯著差異，CK19、HBME-1、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中高表達，TPO在甲狀腺乳頭狀癌中低表達或不表達，且該4項指標(biāo)對甲狀腺乳頭狀癌均具有較高的診斷價值，可作為病理診斷的有效輔助方法。