鄧偉，蘆永福，王學(xué)紅

1青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，西寧 810001

2成都大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，成都 610000

盡管近年來手術(shù)治療、放化療和免疫治療等方法不斷發(fā)展，但胃癌（gastric cancer，GC）仍是全球惡性腫瘤死亡的第二大原因，全球每年新發(fā)GC 病例約120 萬(wàn)例，而中國(guó)每年新發(fā)GC 病例達(dá)41 萬(wàn)例，每年死亡病例約為30 萬(wàn)例。全球GC 的流行病學(xué)存在極大的地理差異和人群分布差異，韓國(guó)、日本、中國(guó)等東亞國(guó)家GC 發(fā)病率和病死率明顯高于北美、西歐及非洲地區(qū)的國(guó)家。青海地處青藏高原，自然條件差，經(jīng)濟(jì)滯后，是中國(guó)GC 的高發(fā)區(qū)之一，GC 的檢出率高達(dá)8.49%，同時(shí)青海是一個(gè)多民族聚居的省份，研究表明GC 在不同民族間的檢出率存在明顯差異，藏族GC 檢出率（6.13%）高于漢族（5.96%），但具體機(jī)制不明。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)基因（transforming growth factor β induced gene，TGFBI）在不同腫瘤微環(huán)境中與整合素結(jié)合而發(fā)揮促進(jìn)或抑制腫瘤的作用，但具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。TGFBI 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于TGFBI 在GC 中具體作用的研究較少且仍存在爭(zhēng)議，此外尚未查到TGFBI 在不同民族間表達(dá)情況的相關(guān)文獻(xiàn)。因此，本研究采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)漢族、藏族患者GC 組織、癌旁組織、慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）和慢性非萎縮性胃炎（chronic non-atrophic gastritis，CNAG）組織中

TGFBI

的表達(dá)情況，探討其在早期檢測(cè)及診斷GC 中的價(jià)值，了解其在兩個(gè)民族間的表達(dá)是否具有差異性，為揭示GC 高發(fā)及漢族、藏族GC 檢出率差異的可能原因積累資料，為進(jìn)一步探討不同民族GC 高發(fā)的原因及GC 預(yù)防、早期診治和預(yù)后判斷提供一定的參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2017 年11 月至2018 年11 月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院經(jīng)胃鏡檢查及病理活檢確診的60 例GC患者（漢族30 例，藏族30 例）、60 例CAG 患者（漢族30 例，藏族30 例）及60 例CNAG 患者（漢族30例，藏族30 例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡為18～80 歲，性別不限；②長(zhǎng)期（＞20 年）生活于青海的漢族或藏族居民；③經(jīng)胃鏡檢查及病理活檢確診為GC、CAG 或CNAG。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有其他惡性腫瘤病史；②合并消化性潰瘍、胃腸穿孔、消化道大出血等；③正在服用阿司匹林、華法林等抗凝藥物或存在凝血功能障礙；④近1 個(gè)月接受過質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI）、抑酸藥和保護(hù)胃黏膜的藥物治療；⑤近1 個(gè)月進(jìn)行過抗幽門螺桿菌（helicobacter pylori，Hp）治療；⑥合并肝功能衰竭、心力衰竭、腎功能衰竭；⑦合并嚴(yán)重的神經(jīng)病變或精神疾病；⑧接受過放療或化療；⑨妊娠期；⑩酒精依賴。收集漢族GC 組織及其癌旁組織（距離腫瘤＞5 cm 的組織）、藏族GC 組織及其癌旁組織、漢族CAG 組織、藏族CAG 組織、漢族CNAG 組織、藏族CNAG 組織各30 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過，所有患者及家屬均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑與儀器

4S Red Plus 核酸染色劑（10 000×水溶液）購(gòu)自加拿大BBI 公司，Maxima Reverse Transcriptase 及GeneRuler DNA Ladder Mix 均購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific 公司，SMA4000 微量分光光度計(jì)購(gòu)自美林恒通（北京）儀器有限公司，LightCycler480 Ⅱ型熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀購(gòu)自瑞士Roche 公司，UNIQ-10 柱式Trizol總RNA 抽提試劑盒購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.3 RNA 提取及RT-PCR

嚴(yán)格按照Trizol 試劑盒提取各組織中的RNA，采用SMA4000 微量分光光度計(jì)檢測(cè)各組織中總RNA 濃度與純度，采用瓊脂糖凝膠電泳顯示RNA的完整性。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，PCR 反應(yīng)條件：94 ℃3 min；94 ℃5 s，57 ℃15 s，72 ℃30 s，共45 個(gè)循環(huán)。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計(jì)并合成，以甘油醛-3-磷酸脫氫 酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作為內(nèi)參基因。

GAPDH

正向引物5'-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3'，反 向 引 物5'-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3'；

TGFBI

正向引物5'-GGGACATGCTCACTATCAACG-3'，反向引物5'-TGGCTGAGTCTGGGATGAGTA-3'。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)3 次，取平均值為Ct 值。采用2法計(jì)算

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

1.4 觀察指標(biāo)

分析漢族、藏族患者不同胃黏膜組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量，比較漢族、藏族間同一類型胃黏膜組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量，比較不同臨床特征GC 患者GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)）[

M

（

P

，

P

）]表示，兩組間比較采用Mann-Whitney

U

檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis

H

檢驗(yàn)，多組間兩兩比較采用Nemenyi 檢驗(yàn)。以

P

＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漢族不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

漢族GC 組織、癌旁組織、CAG 組織及CNAG組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

H

=35.765，

P

＜0.01）；GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于癌旁組織、CAG 組織、CNAG 組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于CNAG 組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織和CAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）；CAG 組織和CNAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。（表1）

表1 漢族不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較[M（P25，P75）]

2.2 藏族不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

藏族GC 組織、癌旁組織、CAG 組織及CNAG組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

H

=35.494，

P

＜0.01）；GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于癌旁組織、CAG 組織、CNAG 組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于CNAG 組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織和CAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）；CAG 組織和CNAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。（表2）

表2 藏族不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較[M（P25，P75）]

2.3 漢族、藏族間同一類型胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

漢族、藏族間同一類型胃黏膜組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。（表3）

表3 漢族、藏族間同一類型胃黏膜組織中TGFBI mRNA的相對(duì)表達(dá)量[M（P25，P75）]

2.4 不區(qū)分民族的情況下不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

不區(qū)分民族的情況下，GC 組織、癌旁組織、CAG 組織及CNAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

H

=70.623，

P

＜0.01）；GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于癌旁組織、CAG 組織、CNAG 組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織和CAG 組織中

TGFBI

mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于CNAG 組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織和CAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。（表4）

表4 不區(qū)分民族的情況下不同胃黏膜組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較[M（P25，P75）]

2.5 不同臨床特征GC 患者GC 組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況的GC 患者GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。浸潤(rùn)深度為T～T、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期的GC 患者GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量分別高于浸潤(rùn)深度為T～T、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的GC 患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表5）

表5 不同臨床特征GC 患者GC 組織中TGFBI mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較（n=60）

3 討論

GC 的發(fā)病率較高，其早期常無明顯癥狀，缺乏有效的早期診斷方法，確診時(shí)往往處于晚期，因此成為全球發(fā)病率和病死率最高的腫瘤之一。自從Skonier 等發(fā)現(xiàn)TGFBI 后，其研究不斷深入，目前認(rèn)為TGFBI 可能通過多種通路和自身途徑參與調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、遷移、增殖、凋亡及炎性反應(yīng)，從而發(fā)揮促癌或抑癌作用。

本研究檢測(cè)了漢族、藏族不同胃黏膜組織中

TGFBI

mRNA 的表達(dá)情況，結(jié)果顯示漢族GC 組織、癌旁組織、CAG 組織及CNAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量逐漸降低，GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于癌旁組織、CAG 組織、CNAG 組織，癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于CNAG 組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；癌旁組織和CAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。同時(shí)在藏族胃黏膜組織中及不分民族的情況下也得到了相似的結(jié)果，與Han 等采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)GC 患者血清中TGFBI 呈高表達(dá)的結(jié)果一致，與尹青香的研究結(jié)果有不同之處。提示TGFBI 與GC的發(fā)生密切相關(guān)，但尚需加大樣本量進(jìn)一步研究。癌旁組織與GC 組織同處于一個(gè)內(nèi)外環(huán)境中，癌旁組織常常被認(rèn)為是腫瘤易發(fā)組織。本研究結(jié)果顯示，在漢族、藏族或不分民族的情況下，癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量均介于GC 組織與CNAG 組織之間，提示癌旁組織處于GC 和CNAG 的中間狀態(tài)，因此推斷TGFBI 逐漸累積到一定水平可導(dǎo)致GC 的發(fā)生，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TGFBI 可能有助于GC 的早期篩查。雖然癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于CAG 組織，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）?？赡艿脑蛉缦拢孩贅颖玖刻?，尚需加大樣本量進(jìn)一步研究；②CAG 作為一種癌前疾病，其基因?qū)用嬉寻l(fā)生改變，改變后的CAG與腫瘤易發(fā)組織無太大差異，但仍需進(jìn)一步研究。漢族、藏族間同一類型胃黏膜組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05），提示漢族、藏族間的TGFBI 表達(dá)無明顯差異，TGFBI 可能不是兩個(gè)民族間GC 檢出率不同的原因，漢族、藏族間GC 檢出率不同可能與漢族、藏族不同的生活飲食習(xí)慣有關(guān)，其次本研究并未進(jìn)行基因測(cè)序，基因多態(tài)性是否為導(dǎo)致漢族、藏族間GC 檢出率不同的原因尚待進(jìn)一步研究，這也是接下來研究的新方向。本研究進(jìn)一步比較了不同臨床特征GC 患者GC組織中

TGFBI

mRNA相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示，浸潤(rùn)深度為T～T的GC患者GC組織中

TGFBI

mRNA相對(duì)表達(dá)量高于浸潤(rùn)深度為T～T的患者（

P

＜0.05），與Li 等研究中TGFBI 高表達(dá)與GC 腹膜轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的結(jié)果相似，提示TGFBI 參與GC 腹膜轉(zhuǎn)移。GC 腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵在于腫瘤細(xì)胞附著到腹膜，TGFBI 有助于成纖維細(xì)胞的黏附和擴(kuò)展，成纖維細(xì)胞可通過膜上的糖蛋白與腫瘤細(xì)胞進(jìn)行選擇性黏附。本研究結(jié)果顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的GC患者GC組織中

TGFBI

mRNA相對(duì)表達(dá)量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，與Li等研究中TGFBI 在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的GC患者中表達(dá)升高的結(jié)果相似。與之相反，Holmberg 等研究指出轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白通過激活p42/44激酶抑制胰島素樣生長(zhǎng)因子2刺激的腫瘤相關(guān)肌成纖維細(xì)胞的增殖和遷移，從而減慢GC細(xì)胞生長(zhǎng)和GC進(jìn)展。因此，TGFBI表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但在GC 患者同一種腫瘤內(nèi)環(huán)境中TGFBI是否扮演著不同的作用，尚待加大樣本量研究。TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期的GC 患者GC 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者（

P

＜0.05），與Ma等研究結(jié)果相似，可能的原因是TGFBI 通過激活整合素ανβ5-Src 信號(hào)通路誘導(dǎo)血管內(nèi)皮鈣黏蛋白分離，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮滲透性增加，腫瘤細(xì)胞外滲有助于腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，但在GC中是否有著相同的機(jī)制尚待研究，因此高表達(dá)的TGFBI 可能參與GC 細(xì)胞的遷移及侵襲，可用于評(píng)估GC預(yù)后。綜上所述，漢族、藏族GC 患者間

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量無明顯差異，TGFBI 可能不是漢族和藏族間GC 檢出率不同的原因，但本研究?jī)H檢測(cè)

TGFBI

mRNA 的表達(dá)情況，并未進(jìn)一步對(duì)基因進(jìn)行測(cè)序，基因多態(tài)性是否為導(dǎo)致漢族、藏族間GC 檢出率不同的原因尚待進(jìn)一步研究。癌旁組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量介于GC 組織與CNAG 組織間，提示TGFBI 逐漸累積到一定水平可導(dǎo)致GC 的發(fā)生，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。此外GC 組織、癌旁組織、CAG 組織、CNAG 組織中

TGFBI

mRNA 相對(duì)表達(dá)量逐漸下降，且TGFBI 表達(dá)情況與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期有關(guān)，因此動(dòng)態(tài)檢測(cè)TGFBI 對(duì)GC 患者的早期診斷、治療及預(yù)后評(píng)估具有一定的幫助。