黃萍 曾白林 童黃錦 徐夢(mèng)丹 朱立忠

摘 要 目的：建立色差法測(cè)定藥用植物蠟葉標(biāo)本顏色的方法，研究溫度和壓力對(duì)蠟葉標(biāo)本葉片顏色的影響，優(yōu)化標(biāo)本保色工藝。方法：色差法測(cè)定6種藥用植物蠟葉標(biāo)本葉顏色值，統(tǒng)計(jì)分析不同溫度、不同壓力總色差ΔE大小。結(jié)果：色差法測(cè)出的結(jié)果客觀(guān)精確，6種藥用植物標(biāo)本色差冷藏加壓優(yōu)于常溫加壓（P<0.05）；壓力大小對(duì)6種藥用植物標(biāo)本葉片色差影響不同，石榴葉加壓100 kg、桔梗葉加壓300 kg、凌霄葉、射干葉、菊葉、月季葉加壓500 kg條件色差最小下保色最好。結(jié)論：色差法可應(yīng)用于藥用植物蠟葉標(biāo)本顏色測(cè)定，冷藏加壓法可應(yīng)用于蠟葉標(biāo)本保色研究。

關(guān)鍵詞 藥用植物 蠟葉標(biāo)本 工藝優(yōu)化

中圖分類(lèi)號(hào)：R281 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2021）15-0043-04

Determination of the color difference of wax leaf specimen of medicinal plants and the optimization of color preservation technology

HUANG Ping， ZENG Bailin， TONG Huangjin， XU Mengdan， ZHU Lizhong

（Department of Pharmacy， the Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine； Department of Pharmacy， Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210028， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of the color of medicinal plant wax leaf specimens by color difference method， to study the influence of temperature and pressure on the color of wax leaf specimens and to optimize the color preservation technology. Methods： The color values of six kinds of medicinal plant wax leaf samples were measured by color difference method， and the total color difference ΔE value at different temperatures and pressures was statistically analyzed. Results： The results measured by color difference method were objective and accurate， and the color difference of six kinds of medicinal plant specimens under cold storage and pressure was better than that under normal temperature （P<0.05）. The influence of pressure on the color difference of six kinds of medicinal plant specimens was different and the color was the best and the color difference was the smallest when the pomegranate leaves were pressurized under 100 kg， platycodon grandiflorum leaves under 300 kg， Chinese trumpet creeper leaves， belamcanda leaves， chrysanthemum leaves and rose leaves under 500 kg， respectively. Conclusion： The color difference method can be used for the determination of the color of medicinal plant wax leaf specimens， and the cold storage and pressure method can be used for the study of color retention of wax leaf specimens.

KEY WORDS medicinal plants； wax leaf specimen； process optimization

藥用植物標(biāo)本在科研和教學(xué)中有重要的作用，是藥用植物鑒別的永久性查考資料[1]。蠟葉標(biāo)本因?yàn)橛胁僮骱?jiǎn)便、成本低、環(huán)保、易于查閱、便攜等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用，但由于長(zhǎng)期暴露在空氣中，藥用植物色素對(duì)光、熱、氧、微生物等變化敏感，穩(wěn)定性差，顏色變枯黃，與鮮品色差大，失去了標(biāo)本最直觀(guān)的特征[2-3]，因此，標(biāo)本保色研究是標(biāo)本制作工藝中需要解決的難題。目前對(duì)標(biāo)本顏色沒(méi)法做到客觀(guān)量化研究，實(shí)驗(yàn)者主要通過(guò)眼睛主觀(guān)評(píng)判色差，評(píng)分誤差大。課題組經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期反復(fù)實(shí)踐，優(yōu)化傳統(tǒng)的綁扎帶捆扎標(biāo)本制作方法，采用三角鐵和螺絲加固標(biāo)本，給標(biāo)本夾施以重壓，最高壓力可達(dá)500 kg，將壓制好的標(biāo)本夾貯藏在冷藏室和常溫室，通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察六種藥用植物蠟葉標(biāo)本在不同溫度、不同壓力下的保色情況，并嘗試用色差計(jì)測(cè)量蠟葉標(biāo)本色度值，進(jìn)一步優(yōu)化標(biāo)本保色工藝。

1 材料與方法

1.1 藥用植物

石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季六種藥用植物標(biāo)本葉。

1.2 儀器

SBT710-1000 kg壓力傳感器（廣州市斯巴拓電子科技有限公司）；SBT951-T控制顯示儀表（廣州市斯巴拓電子科技有限公司）；JZ-350色彩色差計(jì)（深圳市金準(zhǔn)儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 蠟葉標(biāo)本色差測(cè)量方法

1）色差測(cè)定方法 測(cè)定前對(duì)儀器進(jìn)行零位和白板較準(zhǔn)，較準(zhǔn)完畢后進(jìn)入測(cè)試。選擇光源條件D65/10°，色彩空間選擇數(shù)據(jù)L*a*b值。在每片葉片正面中間葉肉部分中心位置重復(fù)掃描3次，取平均值。

1.3.2 色差測(cè)定的方法學(xué)考察

1）精密度考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季葉各1片，在相同測(cè)定條件下，連續(xù)測(cè)量6次，記錄顏色值L、a、b。六種葉片L、a、b值的RSD<3%，儀器精密度良好。

2）穩(wěn)定性考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季葉各1片，在相同測(cè)定的條件下，每隔10 min測(cè)1次，每次重復(fù)掃描3次，取平均值，記錄顏色值L、a、b。六種葉片L、a、b值的RSD<3%，標(biāo)本葉片在測(cè)量的1 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3）重復(fù)性考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季葉各1片，在相同測(cè)定條件下，測(cè)量6個(gè)點(diǎn)，每次重復(fù)掃描3次，以平均值為測(cè)定結(jié)果記錄顏色值L、a、b。六種葉片L、a、b值的RSD<3%，該方法重復(fù)性良好。

1.4 蠟葉標(biāo)本的制作

采集的新鮮標(biāo)本經(jīng)清理、定型、整形后，分別放入8個(gè)標(biāo)本夾中，采用傳統(tǒng)綁扎帶捆綁法，測(cè)得受力值10 kg（以下簡(jiǎn)稱(chēng)10 kg標(biāo)本夾）。將標(biāo)本夾改良，使用螺絲和三角鐵加固，設(shè)定壓力分別為100、300、500 kg，每個(gè)壓力值的標(biāo)本夾做2個(gè)。將10、100、300、500 kg標(biāo)本夾分別放置常溫（10～30 ℃）和冷藏庫(kù)（2～10 ℃）保存，剛壓制的標(biāo)本每天換紙1次，3～4 d后隔天換紙，直至標(biāo)本壓制成功[5]。

1.5 蠟葉標(biāo)本色差測(cè)定

壓制標(biāo)本設(shè)定的八種方案，即常溫條件下壓力分別為10、100、300、500 kg，冷藏條件下壓力分別為10、100、300、500 kg，每種方案均壓制標(biāo)本石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季葉3株，標(biāo)本壓制24 h后每種植物標(biāo)本取中段葉片10片，將測(cè)量的葉片做好標(biāo)記并編號(hào)，按照“1.3.2”項(xiàng)下藥材色差測(cè)定方法對(duì)樣品葉進(jìn)行顏色值的測(cè)定，計(jì)算標(biāo)本葉片總色差ΔE。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)本色差均值描述

通過(guò)方差分析結(jié)果可以看出，八種實(shí)驗(yàn)條件下六種藥用植物標(biāo)本色差均值間均有差異（表1）。從標(biāo)本色差的均值描述，石榴葉加壓100 kg、桔梗葉加壓300 kg、凌霄葉、射干葉、菊葉、月季葉加壓500 kg條件色差最小，六種藥用植物標(biāo)本色差最大均為常溫加壓500 kg。

2.2 溫度對(duì)標(biāo)本色差的影響

考察溫度對(duì)標(biāo)本色差影響，用t檢驗(yàn)分析冷藏和常溫兩條件下色差均值差異，六種藥用植物冷藏加壓和常溫加壓條件下色差差異顯著（P<0.05），標(biāo)本色差冷藏加壓比常溫加壓顯著偏小（表2）。

2.3 壓力對(duì)標(biāo)本色差

考察壓力對(duì)標(biāo)本色差影響，用方差分析多重比較，分別將冷藏和常溫加壓10 kg這兩種條件作為對(duì)照進(jìn)行分析。在冷藏條件下，與冷藏加壓10 kg比較，石榴葉加壓100 kg、凌霄葉加壓500 kg、月季葉加壓500 kg標(biāo)本色差明顯偏?。≒<0.05），桔梗葉、菊葉加壓100、300、500 kg標(biāo)本色差均明顯偏?。≒<0.05），射干葉在不同壓力下標(biāo)本色差并無(wú)顯著差異（P>0.05）。在常溫條件下，石榴葉、凌霄葉、桔梗葉加壓500 kg時(shí)標(biāo)本色差明顯偏大（P<0.05），射干葉、菊葉、月季葉在不同壓力下標(biāo)本色差并無(wú)顯著差異（P>0.05）。

3 討論

傳統(tǒng)評(píng)價(jià)蠟葉標(biāo)本顏色的方法是目測(cè)法或者采用比色卡判定，受個(gè)人主觀(guān)因素影響大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度有偏差。采用色差計(jì)法對(duì)標(biāo)本顏色進(jìn)行測(cè)定，操作簡(jiǎn)便直觀(guān)準(zhǔn)確，可將標(biāo)本顏色進(jìn)行量化研究，定量判斷結(jié)果客觀(guān)、精準(zhǔn)可靠，規(guī)避傳統(tǒng)目視法定性判斷的主觀(guān)性大的問(wèn)題，所以此方法值得推廣。色差計(jì)測(cè)定蠟葉標(biāo)本顏色葉有它的缺點(diǎn)，色差計(jì)精密度高反應(yīng)靈敏，測(cè)得數(shù)據(jù)誤差大，在測(cè)量時(shí)需要多次測(cè)量取平均值來(lái)減少誤差，并且只可用于色澤均勻葉片直接測(cè)量，課題組將嘗試用色差法測(cè)定藥用植物花的顏色，進(jìn)一步研究標(biāo)本花的保色。

藥用植物蠟葉標(biāo)本在制作過(guò)程中，影響藥用植物標(biāo)本保色的因素很多，有內(nèi)在因素和外在因素。標(biāo)本快速失水，有利于標(biāo)本保色，一般標(biāo)本含水量越低，成品率越高[6]，冷藏加壓后標(biāo)本葉片組織被壓平破壞，導(dǎo)致其水分快速流出，縮短標(biāo)本干燥時(shí)間[7]，課題組使用三角鐵和螺絲固定標(biāo)本夾，可將整理好的標(biāo)本夾厚度縮小，使標(biāo)本完全貼合于吸水紙，最大化的減少標(biāo)本與吸水紙之間的空氣含量，降低標(biāo)本色素的氧化速度，使成品標(biāo)本色澤保存得更好。在常溫條件下加壓到500 kg，標(biāo)本內(nèi)部不透氣并不利于水分蒸散，反而影響標(biāo)本保色。

色差法可應(yīng)用于藥用植物蠟葉標(biāo)本顏色測(cè)定，冷藏加壓保色優(yōu)于常溫加壓，石榴葉加壓100 kg、桔梗葉加壓300 kg、凌霄葉、射干葉、菊葉、月季葉加壓500 kg條件下保色最好。溫度是影響藥用植物標(biāo)本保色的一個(gè)關(guān)鍵因素，壓力大小對(duì)不同植物影響作用不同。不同藥用植物品種，都可以采用冷藏加壓的方法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)選擇最佳的條件組合來(lái)保證標(biāo)本色澤最佳，實(shí)驗(yàn)考察顏色值的時(shí)間相對(duì)較短，可以在今后的實(shí)驗(yàn)中延長(zhǎng)標(biāo)本顏色考察時(shí)間，使實(shí)驗(yàn)更加完善。

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