李子葉

【摘要】目的：分析在幼兒呼吸道合胞病毒感染中采用間接免疫熒光法的結(jié)果，為臨床幼兒呼吸道合胞病毒感染的治療提供臨床治療依據(jù)。方法：選取本院于2018年12月至2019年12月收治的80例呼吸道合胞病毒感染患兒作為觀察對象，采用間接免疫熒光法檢測，分析患兒的呼吸道合胞病毒感染情況。結(jié)果：采用間接免疫熒光法檢測患兒的感染情況，具有較高的敏感度及特異性，且未與其他呼吸道病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，且此檢查方式敏感率為98.75%。按照患兒的年齡不同進行比較，發(fā)現(xiàn)臨床上年齡<6個月的患兒具有較高的感染率。經(jīng)檢測后給予患兒對癥治療，患兒的臨床治療效率達到96.25%，臨床治療效率較高。結(jié)論：應(yīng)用間接免疫熒光法檢測幼兒呼吸道合胞病毒感染情況，檢測更加方便，且其敏感度及特異性均較高，患兒經(jīng)及時診斷并及時開展對癥治療后，臨床治療效率較高。

【關(guān)鍵詞】呼吸道合胞病毒；間接免疫熒光法檢測；幼兒；感染情況

【中圖分類號】R725.6 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）10-0161-02

臨床上，嬰幼兒發(fā)生下呼吸道感染的主要因素之一就是受到呼吸道合胞病毒的感染，該病毒是一種單股負鏈RNA病毒[1]。呼吸道合胞病毒感染在世界各地都曾爆發(fā)過。當嬰幼兒在受到呼吸道合胞病毒的感染后還可能發(fā)生肺炎，出現(xiàn)氣促、呼吸困難、咳嗽、低熱等癥狀，對嬰幼兒的健康影響較大[2]。臨床上，早期診斷是治療患兒的關(guān)鍵，只有明確患兒的感染情況才能及時為患兒進行對癥治療。過去臨床上診斷呼吸道合胞病毒感染通常是通過對培養(yǎng)的敏感細胞系中的具有特征性的致細胞病變效應(yīng)來診斷的，但在這種診斷方式下，需要花費較多的時間去培養(yǎng)，且診斷中還容易受到其他因素的影響，診斷的靈敏度較低。隨著我國醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，在分子生物學(xué)技術(shù)方面的研究也不斷加深，間接免疫熒光法檢測是一種新型的檢測技術(shù)，也是目前臨床上常用的一種檢測方式。本研究選取本院于2018年12月至2019年12月收治的呼吸道合胞病毒感染患兒80例，應(yīng)用間接免疫熒光法檢測，探究其臨床檢測效果，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取本院于2018年12月至2019年12月收治的80例呼吸道合胞病毒感染患兒，作為觀察對象。所有患兒均采用間接免疫熒光法進行檢測，分析患兒的呼吸道合胞病毒感染情況。在收治的這些患兒中，有37例患兒為女性，43例患兒為男性。年齡0～12（6.03±1.21）月。將這些患兒的鼻咽分泌物采集起來，送往實驗室檢測。

納入標準：（1）參考《急性上呼吸道感染基層合理用藥指南》[3]，研究對象均符合呼吸道合胞病毒感染診療標準；（2）患兒均在監(jiān)護人陪同及簽字同意下參與。

排除標準：（1）患兒有其他嚴重感染性或傳染性疾?。唬?）患兒有嚴重先天性疾病，如先天性心臟病等。

1.2 方法

在采集標本時，需嚴格按照無菌條件下進行，采用離心機（莫賽菲爾世，型號Pico-17），將標本放置其中，調(diào)節(jié)離心機轉(zhuǎn)速為1500 r/ min，共離心10 min。將上清液吸取出來，接種于HeLa細胞管中。每份標本都接種2管。將Hep-2細胞上接種標本上清液0.1 mL，接種好后，將其放置于溫度為35 ℃的溫箱中進行培養(yǎng)。病毒的存在以細胞病變?yōu)榕袛嘀笜?；若在進行培養(yǎng)的2周后，細胞培養(yǎng)皿中仍未出現(xiàn)細胞病變的情況，再進行2代盲傳，繼續(xù)觀察細胞皿情況，若仍無病變情況發(fā)生，則代表檢測結(jié)果為陰性。

涂片的制備：將收集的患兒鼻咽分泌物放置于Hank’s溶液2 mL中，采用離心機調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至1500 r/ min，進行10 min的離心，將上清液去除，留少量液體。取出沉渣將其制備成懸液，采用載玻片，涂上懸液，采集的1份標本采用4張載玻片涂抹，并分別在每一片上涂4個小圓點，并將其吹干。采用冷丙酮將載玻片于4 ℃下固定10 min后取出，將其放置于干燥處備用。選取未接接種感染細胞的HeLa細胞以及受到呼吸道合胞細胞Long株制備為陰性及陽性涂片以作對照。免疫血清的處理：采用PH值為7.4，0.01 M的PBS，將血清稀釋1倍。加入HeLa細胞并混勻，將細胞濃度稀釋至6×106 / mL。然后進行水浴，調(diào)節(jié)溫度為37 ℃，將樣本水浴1 h，在水浴期間將樣本進行間接搖動。水浴結(jié)束后，采用離心機離心10 min，轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)為2500 r/ min。將上清液收集起來，調(diào)節(jié)冰箱溫度為4 ℃。將上清液保存其中備用。

采用間接免疫熒光法將收集的鼻咽分泌物脫落細胞中的呼吸道合胞病毒進行抗原檢測。兔抗呼吸道合胞病毒免疫血清（效價1∶80）為一抗；辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體及異硫氰酸熒光黃標記的羊抗兔抗體（效價1∶20）為二抗；以3.3-二氨基聯(lián)苯胺作為底物。根據(jù)盲法進行間接免疫熒光法檢測結(jié)果的判斷，呼吸道合胞病毒抗原陽性以出現(xiàn)2個及2個以上的典型陽性細胞為標準。

在完成對患兒的診斷后，為患兒開展對癥治療。在確診患兒感染呼吸道合胞病毒后，給予患兒更昔洛韋（國藥準字H20043752 規(guī)格：0.25 g；生產(chǎn)廠家：上海新亞藥業(yè)有限公司名生產(chǎn)）進行治療，為患兒每日進行靜脈注射，每次滴注5 mg/ kg，滴注時間應(yīng)超過1 h，每日為患兒滴注2次。

1.3 觀察指標

觀察檢測的特異性與敏感度，不同年齡患兒的呼吸道合胞病毒感染率。

觀察患兒的臨床治療情況。以患兒的肺部啰音消失、咳嗽、憋喘等臨床癥狀消失為顯效；以患兒的臨床癥狀較治療前有較明顯改善為有效；以患兒經(jīng)治療后癥狀改善不明顯為無效。總有效率=（顯效+有效）/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 特異性與敏感度

采用間接免疫熒光法檢測發(fā)現(xiàn)，在建立的體系中，呼吸道合胞病毒呈現(xiàn)出較好的S型擴增曲線，且采用該檢測法檢測Hep-2細胞以及其他呼吸道病原陽性標本，檢測結(jié)果均呈現(xiàn)為陰性，并未有交叉反應(yīng)出現(xiàn)，表明間接免疫熒光法檢測呼吸道合胞病毒，具有較強的特異性。經(jīng)檢測，發(fā)現(xiàn)該檢測法在呼吸道合胞病毒感染中，靈敏度為5 pfu，呼吸道合胞病毒感染敏感率為98.75%（79/80），可作為金標準診斷。

2.2 檢測結(jié)果

根據(jù)患兒月齡的不同，分為0～6個月、7～12個月組，進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)在幼兒呼吸道合胞病毒感染中，0～6個月的嬰幼兒感染率最高（χ2=60.500，P<0.05）。見表1。

2.3 臨床治療效果

本次收治的患兒經(jīng)診斷后確診為呼吸道合胞病毒感染患兒，經(jīng)確診后立即為這些患兒開展治療，其中顯效的患兒有35例，有效患兒例數(shù)為42例，無效有3例。患兒的臨床治療效率為96.25%（77/80），臨床治療效率較高。

3 討論

據(jù)臨床研究發(fā)現(xiàn)，呼吸道合胞病毒感染是造成嬰幼兒發(fā)生下呼吸道急性感染的主要病因，也是導(dǎo)致嬰幼兒出現(xiàn)流行性憋喘性肺炎的重要原因[4]。臨床上，呼吸道合胞病毒能通過單克隆抗體被分為兩種亞型。A亞型為病情較重，起病較急的一類患者；B亞型為病情較輕的一類。隨著臨床上對呼吸道合胞病毒研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)，在呼吸道合胞病毒的薄膜表面，有2種糖蛋白的存在，分別為F與G蛋白[5]。G蛋白的存在有較強地吸附宿主細胞能力。在呼吸道合胞病毒感染時，這兩種蛋白都是其重要免疫原。有部分研究學(xué)者認為，G蛋白是A型、B型2種亞型間，氨基酸序列及抗原性差異所在，在不同亞型中的G蛋白抗體，無法提供2種亞型間的交叉保護作用[6]。在通常情況下，將呼吸道合胞病毒接種至敏感細胞的1周內(nèi)，細胞皿中即會出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)，這種效應(yīng)能作為呼吸道合胞病毒的診斷依據(jù)，但研究的深入發(fā)現(xiàn)這種驗證病毒的方式下，需要耗費較長的時間，無法實現(xiàn)對患兒的早診斷、早治療。而間接免疫熒光法檢測是一種新型的檢測方式，這種檢測方式下，對于病毒的敏感性更高，能在獲取患兒的標本內(nèi)當天完成對呼吸道合胞病毒的檢測，能有效實現(xiàn)對患兒的早期診療，對于患兒的恢復(fù)臨床意義重大[7-8]。

本次研究選取本院于2018年12月至2019年12月收治的80例呼吸道合胞病毒感染患兒，所有患兒均采用間接免疫熒光法進行檢測，分析患兒的呼吸道合胞病毒感染情況。結(jié)果顯示：采用間接免疫熒光法檢測呼吸道合胞病毒感染，并未發(fā)現(xiàn)該檢測方法會與其他呼吸道病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，因此采用該種檢測方式具有較高的特異性；經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，間接免疫熒光法在該病毒的檢測下，敏感度達到5 pfu，具有較高的敏感度。對比在不同年齡段患兒的感染情況，發(fā)現(xiàn)臨床上年齡小于6個月的患兒具有較高的感染率，感染率為77.5%，可能與患兒年齡越小，免疫力較低有關(guān)，患兒的各項功能未發(fā)育成熟，因此更易受到病毒的感染。本次收治的患兒的臨床治療效率為96.25%，臨床治療效率較高。表明經(jīng)有效地診斷方式明確患兒的疾病感染情況后，為患者及時開展對癥治療能有效促進患兒的恢復(fù)，臨床效果較好。

綜上所述，在呼吸道合胞病毒感染患兒的檢測中，應(yīng)用間接免疫熒光法檢測，檢測方式更加方便，具有較高的敏感度及特異度。間接免疫熒光法的應(yīng)用不會與其他呼吸道病菌發(fā)生交叉反應(yīng)，經(jīng)該種檢測方式能及時了解患兒的呼吸道合胞病毒感染情況，及時為患兒進行相應(yīng)的治療，臨床治療效率高，臨床價值高，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻

[1] 姜梨梨，王瑞芳，周海群，等.亳州地區(qū)2846例兒童急性呼吸道感染病原體IgM抗體檢測結(jié)果分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（25）：3569-3570.

[2] 周亮，劉宗泰，葛勝旺，等.2015年至2016年河北省兒童醫(yī)院兒童常見呼吸道病毒感染病原學(xué)分析[J].國際兒科學(xué)雜志，2017，44（12）：907-908.

[3] 中華醫(yī)學(xué)會，中華醫(yī)學(xué)會臨床藥學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會雜志社，等.急性上呼吸道感染基層合理用藥指南[J].中華全科醫(yī)師雜志，2020，19（8）：689-697.

[4] 李林瑞，楊敏，陳艷萍.嬰幼兒呼吸道合胞病毒與非合胞病毒感染毛細支氣管炎臨床特征比較[J].實用檢驗醫(yī)師雜志，2017，9（4）：230-233.

[5] 張莉，馬琳，安會波，等.2017-2018年河北省石家莊地區(qū)10155例急性呼吸道感染患兒病毒病原學(xué)研究[J].國際呼吸雜志，2019，39（3）：207-209.

[6] 趙莉，李貴霞，趙民，等.多重熒光定量PCR方法在呼吸道合胞病毒和腺病毒檢測中的Meta分析[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2018，32（5）：548-552.

[7] 周海瀾.白細胞介素-8基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒誘發(fā)的小兒急性支氣管炎發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報，2019，25（4）：559-562.

[8] 馬艷華，丁殿帥，全守東，等.病原體特異性IgM抗體檢測在兒童呼吸道急性感染病原快速診斷中的價值研究[J].國際呼吸雜志，2021，41（3）：191-195.