王發(fā)英 吳查青 陳張金 劉敏 余華麗 王偉影

(麗水市質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，浙江 麗水 323000)

麝香壯骨膏是由八角茴香、山柰、生川烏、生草烏、麻黃、白芷、蒼術(shù)、當(dāng)歸和干姜提取而制成浸膏、再取麝香、薄荷腦、水楊酸甲酯、豹骨、硫酸軟骨素、冰片、鹽酸苯海拉明與樟腦八味藥物組成的一種外用橡膠膏劑，具有鎮(zhèn)痛、消炎的功效，臨床上用于風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛、腰痛、神經(jīng)痛、肌肉酸痛、扭傷和挫傷[1]。通過(guò)國(guó)家局網(wǎng)站批準(zhǔn)文號(hào)查詢，全國(guó)范圍內(nèi)麝香壯骨膏的生產(chǎn)企業(yè)共58家，批準(zhǔn)文號(hào)61個(gè)?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)有《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊(cè)[2]和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2268-96-2[3]。本文擬通過(guò)法定標(biāo)準(zhǔn)與含量測(cè)定(樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯和鹽酸苯海拉明)對(duì)市售麝香壯骨膏進(jìn)行質(zhì)量調(diào)研，為麝香壯骨膏的質(zhì)量評(píng)價(jià)與臨床應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent7890B氣相色譜儀；H-Class Waters超高效液相色譜儀；XS105DU、XS104電子天平(瑞士梅特勒公司)；UNE400自然對(duì)流烘箱(德國(guó)Memmert公司)、Milli-Q Advantage A10超純水儀。

1.2試劑 樟腦對(duì)照品(批號(hào)：110747-201409)、薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)：110728-200506)、冰片對(duì)照品(批號(hào)：110743-200905)、水楊酸甲酯對(duì)照品(批號(hào)：110707-201112)、萘對(duì)照品(批號(hào)：111673-200803)、鹽酸苯海拉明對(duì)照品(批號(hào)：100066-200807)、烏頭堿對(duì)照品(批號(hào)：110720-201111)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙酸乙酯(色譜純，上海展云化工有限公司)；甲醇(色譜純，默克)，其余試劑均為分析純，水為自制超純水。

麝香壯骨膏，市場(chǎng)隨機(jī)購(gòu)入50批次，涉及20家生產(chǎn)企業(yè)，生產(chǎn)企業(yè)所在省市包括浙江、安徽、江西、海南、吉林、桂林、江蘇、重慶、河南、湖北、湖南、山東等地，具有一定的地域差異性，樣品具有良好代表性。樣品信息見(jiàn)表1。

表1 麝香壯骨膏基本信息

2 方法與結(jié)果

2.1法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn) 現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊(cè)，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括性狀、含膏量、耐熱性和微生物限度；現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2268-96-2(樣品中僅公司F執(zhí)行此標(biāo)準(zhǔn))，比《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊(cè)多了樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯氣相色譜鑒別，鹽酸苯海拉明薄層鑒別，樟腦、水楊酸甲酯、鹽酸苯海拉明的含量測(cè)定和烏頭堿限量的薄層檢查。按照法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批樣品均符合所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，合格率為100%，其中含膏量結(jié)果見(jiàn)表2和圖3。

2.2含量測(cè)定 鹽酸苯海拉明(高效液相色譜法)。

2.2.1色譜條件[4-9]Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱 (美國(guó)安捷倫公司)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm；流動(dòng)相：甲醇-1%硫酸銨水溶液(47∶53)；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 取樣品70 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，精密加入80%甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取“2.2.2、2.2.3”項(xiàng)下溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，在該色譜條件下，鹽酸苯海拉明與相鄰雜質(zhì)峰均達(dá)到良好分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)均在10000以上，具有良好的分離效果。

圖1 HPLC圖

2.2.5樣品含量測(cè)定 取公司F生產(chǎn)的6批次樣品，其他生產(chǎn)企業(yè)各1批，總共25批樣品，各平行2份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸苯海拉明的含量，結(jié)果見(jiàn)表2和圖4。

2.3含量測(cè)定 樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯(氣相色譜法)。

2.3.1色譜條件[10-16]phenomen ZB-WAX毛細(xì)管柱，0℃～250℃(250℃):60 m×320 μm×0.5 μm；檢測(cè)器：FID；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；柱溫：150 ℃，維持23 min；流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL；分流比：15∶1。

2.3.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取萘適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含5.000mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3.3混合對(duì)照品貯備液的配制 精密稱取樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯對(duì)照品適量,加乙酸乙酯溶解，配制成每1 mL含各對(duì)照品分別為5.2850 mg，5.4750 mg，5.2750 mg， 6.2000 mg的混合液，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。

2.3.4供試品溶液的配制 取本品175 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，置250 mL燒瓶中，加水100 mL，照揮發(fā)油測(cè)定法，自測(cè)定器上端加水充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，再加甲苯2 mL，加熱回流3 h，放冷，將揮發(fā)油測(cè)定器中的液體轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分取有機(jī)溶劑層，置預(yù)先精密加入5 mL內(nèi)標(biāo)溶液的25 mL量瓶中，以適量乙酸乙酯分次洗滌冷凝管、揮發(fā)油測(cè)定器及分液漏斗，洗滌液并入上述量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.5系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 精密量取混合對(duì)照品貯備液與內(nèi)標(biāo)溶液適量，加乙酸乙酯稀釋至一定的濃度，分別精密吸取上述溶液與供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。由圖2可見(jiàn)，在該色譜條件下，樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯、萘與其他成分可達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)均在50000以上，具有良好的分離效果。

圖2 GC圖

2.3.6線性關(guān)系考察 精密量取混合對(duì)照品貯備液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以各峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)，待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)(X，mg·mL-1)進(jìn)行線性回歸，得樟腦回歸方程為Y=0.7297X+0.0199，r=0.9999，薄荷腦回歸方程為Y=0.7005X+0.0459，r=0.9998，冰片回歸方程為Y=0.7516X+0.0041，r=0.9999，水楊酸甲酯回歸方程為Y=0.4627X-0.0021，r=0.9998。結(jié)果表明：在樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯分別在0.261～4.172 mg·mL-1、0.274～4.380 mg·mL-1、0.258～4.136 mg·mL-1、0.309～4.944 mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.7方法學(xué)考察 經(jīng)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》收載的“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”的要求。

2.3.8回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的麝香壯骨膏(編號(hào)39)，共6份，各取本品90 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，置250 mL燒瓶中，濃度為樟腦8.943 mg·mL-1、薄荷腦12.98 mg·mL-1、冰片10.85 mg·mL-1、水楊酸甲酯9.168 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液1 mL，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果其回收率平均值依次為樟腦97.12%(RSD=1.37%，n=6)、薄荷腦97.02%(RSD=1.35%，n=6)、冰片96.89%(RSD=1.24%，n=6)、水楊酸甲酯96.45%(RSD=1.46%，n=6)。

2.3.9樣品含量測(cè)定 取公司F生產(chǎn)的6批次樣品，其他生產(chǎn)企業(yè)各1批，總共25批樣品，各平行2份，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的含量，結(jié)果見(jiàn)表2和圖5。

圖3 含膏量分布圖

圖4 鹽酸苯海拉明含量分布圖

圖5 樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量分布圖

表2 麝香壯骨膏中含膏量、鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的測(cè)定結(jié)果(n=2)

續(xù)表2 麝香壯骨膏中含膏量、鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果 按照現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批樣品均符合所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

20個(gè)生產(chǎn)廠家50批樣品含膏量范圍1.6～2.3 g，平均值為1.8 g，RSD為8.4%，相差較大；同個(gè)企業(yè)不同批號(hào)的含膏量相對(duì)比較穩(wěn)定，不同企業(yè)的含膏量差別較大，可能與生產(chǎn)工藝中的涂膏有關(guān)系，各個(gè)企業(yè)間涂膠工藝的差別引起含膏量的差異。除涂膠工藝外，含膏量也可能與膏體表面有無(wú)孔有一定的關(guān)系，兩個(gè)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)都未對(duì)膏體的是否有孔及孔面積大小進(jìn)行規(guī)定，也未說(shuō)明計(jì)算含膏量是否要扣除孔面積[17-18]。

公司F生產(chǎn)的6批次樣品，100 cm2含樟腦為18.19～19.64 mg，平均值為19.08 mg，RSD為2.6%；含水楊酸甲酯為15.50～17.43 mg，平均值為16.85 mg，RSD為4.6%；含鹽酸苯海拉明為5.95～7.31 mg，平均值為6.70 mg，RSD為8.1%。樟腦、水楊酸甲酯的含量RSD均小于5%，含量差異較小，說(shuō)明不同批次投料情況穩(wěn)定，工藝對(duì)兩者含量影響較小；而鹽酸苯海拉明的含量差異較大，如投料情況穩(wěn)定，則生產(chǎn)工藝對(duì)該成分存在一定影響，生產(chǎn)過(guò)程容易造成損失。生產(chǎn)企業(yè)需要把握好膏劑生產(chǎn)工藝，保持處方工藝穩(wěn)定，最終保證藥品質(zhì)量均一、可控。

3.2揮發(fā)性成分(樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯)的含量測(cè)定 麝香壯骨膏中的揮發(fā)油類成分為其主要有效成分，其主要鎮(zhèn)痛消炎成分為樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯，本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定麝香壯骨膏中該4種有效成分含量的方法。所抽取的25批樣品，每100 cm2含樟腦為7.44～30.71 mg，平均值為17.07 mg，最大值與最小值相差4倍多；含薄荷腦為4.33～49.28 mg，平均值為27.53 mg，最大值與最小值相差11倍多；含冰片為9.09～33.34 mg，平均值為20.17 mg，最大值與最小值相差3倍多；含水楊酸甲酯為6.22～25.62 mg，平均值為15.57 mg，最大值與最小值相差4倍多。公司F生產(chǎn)的6批次樣品標(biāo)準(zhǔn)方法以外兩種成分含量為每100 cm2含冰片平均值為23.63 mg，RSD為2.0%，含薄荷腦平均值為32.31 mg，RSD為2.2%；其他生產(chǎn)企業(yè)的19批樣品每100 cm2含樟腦平均值為16.44 mg，RSD為40.2%，含水楊酸甲酯為平均值為15.16 mg，RSD為40.4%，含冰片平均值為19.08 mg，RSD為35.6%，含薄荷腦平均值為26.02 mg，RSD為48.1%。

從樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯這4種揮發(fā)性成分含量測(cè)定結(jié)果可以看出，不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品差別甚大，質(zhì)量參差不齊；公司F生產(chǎn)的麝香壯骨膏質(zhì)量較為穩(wěn)定，揮發(fā)性成分含量控制的較好。這與企業(yè)投料的量和生產(chǎn)工藝有關(guān)，假設(shè)企業(yè)的投料量均符合要求，如果企業(yè)采用溶劑法生產(chǎn)橡膠膏劑，工藝中由于要加熱，許多揮發(fā)性藥物就會(huì)隨溶媒一起蒸發(fā)而損失掉。因此其成分含量較低的企業(yè)要控制好投料的量，重點(diǎn)要改善其生產(chǎn)工藝，減少揮發(fā)性成分在生產(chǎn)過(guò)程中的損失[19]。項(xiàng)目組認(rèn)為有必要對(duì)麝香壯骨膏種該4種揮發(fā)性成分進(jìn)行質(zhì)控，以提高該產(chǎn)品的質(zhì)量，確保不同生產(chǎn)企業(yè)之間產(chǎn)品的均一性、穩(wěn)定性。建議樟腦和水楊酸甲酯的含量限度采用現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2中的規(guī)定(每100 cm2含樟腦限度為不得少于12.0 mg、含水楊酸甲酯限度為不得少于9.0 mg)；從現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2可以看出，樟腦和水楊酸甲酯的含量限度值約為投料的40%，參照該要求，建議每100 cm2含冰片限度為不得少于12.0 mg和含薄荷腦限度為不得少于16.0 mg。4種揮發(fā)性成分按照建議執(zhí)行的限度標(biāo)準(zhǔn)，25批樣品中樟腦含量低于12.0 mg的有5批，水楊酸甲酯含量低于9.0 mg的有2批，冰片含量低于12.0 mg的有2批，薄荷腦含量低于16.0 mg的有4批。

3.3鹽酸苯海拉明的含量測(cè)定 麝香壯骨膏處方中含有的鹽酸苯海拉明可緩解患者在使用過(guò)程中出現(xiàn)的過(guò)敏癥狀。所抽取的25批樣品，每100 cm2含鹽酸苯海拉明為0.13～10.11 mg，平均值為5.42 mg，最大值與最小值相差77倍。公司F生產(chǎn)的6批次樣品鹽酸苯海拉明含量的平均值為6.70 mg，RSD為8.1%，其他19批平均值為5.02 mg，RSD為48.6%。

鹽酸苯海拉明含量測(cè)定結(jié)果表明不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品中鹽酸苯海拉明含量差別極大，質(zhì)量情況不容樂(lè)觀；相比較，公司F生產(chǎn)的麝香壯骨膏對(duì)鹽酸苯海拉明含量控制較好，質(zhì)量更為穩(wěn)定。個(gè)別生產(chǎn)企業(yè)鹽酸苯海拉明的含量與處方量極不匹配，項(xiàng)目組認(rèn)為在企業(yè)投料都符合要求的前提下，可能與生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)工藝有關(guān)，鹽酸苯海拉明在光、濕、熱和酸堿條件下，容易氧化降解生成二苯酮等物質(zhì)，生產(chǎn)企業(yè)在控制其投入的量的同時(shí)，也要防止鹽酸苯海拉明在生產(chǎn)過(guò)程中被破壞[20]。建議鹽酸苯海拉明的含量限度采用現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2中的規(guī)定(每100 cm2含鹽酸苯海拉明限度為4.8～7.4 mg)。按照此標(biāo)準(zhǔn)，25批樣品中有3批超出限度上限7.4 mg、8批低于限度下限4.8 mg。

3.4小結(jié) 按照所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批麝香壯骨膏的合格率為100%，顯示市售麝香壯骨膏的質(zhì)量情況較好。但是，項(xiàng)目組通過(guò)對(duì)其中25批樣品的鹽酸苯海拉明和4種揮發(fā)性成分(樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯)含量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)不同生產(chǎn)企業(yè)的麝香壯骨膏質(zhì)量差異甚大，產(chǎn)品穩(wěn)定性、均一性較差，其中執(zhí)行較高標(biāo)準(zhǔn)的公司F所生產(chǎn)的麝香壯骨膏質(zhì)量較為穩(wěn)定。為了更好控制麝香壯骨膏的質(zhì)量，建議該品種執(zhí)行統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，并增加鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量測(cè)定。