任金萍 赫嘉偉

摘要：建立基于QuEChERS-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）快速檢測(cè)香菇中13種農(nóng)藥殘留的分析方法。香菇樣品經(jīng)前處理后，氣相色譜分離，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，用外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在0.01、0.10、0.50 mg/kg三個(gè)添加水平下，回收率范圍為75.4%～110.6%。用重復(fù)性限反映精密度，均符合標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.113—2018的要求。QuEChERS-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速、高效、可靠，適用于香菇樣品中的農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：香菇;農(nóng)藥殘留;QuEChERS;氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類(lèi)號(hào)：S481? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ?文章編號(hào)：1001-1463（2021）09-0046-05

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2021.09.011

Determination of 13 Pesticide Residuesin Lentinus edodes by QuEChERS-GC-MS/MS

REN Jinping 1， HE Jiawei 2

（1. Pingliang Center for Quality and Safety of Agricultural Products， Pingliang Gansu 744000; 2. School of Mathematics and Computer Science， Shaanxi University of Technology， Hanzhong Shaanxi 723000， China）

Abstract：A rapid method for the determination of 13 pesticide residues in Lentinus edodes was established based on QuEChERS-gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS/MS）. After pretreatment， the Lentinus edodes samples were separated by gas chromatography， detected by mass spectrometry in the multi-reaction ion monitoring mode（MRM）， and quantitatively analyzed with the external standard method. The results showed that the 13 pesticides had good linearity in the range from 0.01 μg/mL to 0.8 μg/mL， and the correlation coefficients R2>0.99. The average recovery ranges were mainly from 75.4% to 110.6% at the three spiked concentration levels（0.01、0.10、0.50 mg/kg）. The repeatability limit is used to reflect the precision， which all were accepted the requirements of standard GB 23200.113 — 2018. The method is rapid， efficient and reliable， which is suitable for the detection of pesticide residues in Lentinus edodes samples.

Key words：Lentinus edodes;Pesticide residues;QuEChERS;GC-MS/MS

香菇又稱“中國(guó)蘑菇”，是我國(guó)著名的食用菌之一，被譽(yù)為“菇中皇后”，兼具食用和藥用價(jià)值[1 - 4 ]，是目前市場(chǎng)上主要的食用菌品種。香菇從生產(chǎn)到餐桌，可能會(huì)產(chǎn)生農(nóng)藥殘留問(wèn)題[5 - 8 ]。常用的農(nóng)藥殘留分析前處理技術(shù)主要有固相萃取（SPE）、固相微萃?。⊿PME）、凝膠滲透色譜（GPC）、微波輔助萃?。∕AE）、超臨界流體萃取（SFE）等[9 - 12 ]，但這些方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合大批量樣品的快速檢測(cè)。而QuEChERS法作為近些年來(lái)被廣泛推廣應(yīng)用的農(nóng)殘前處理技術(shù)， 因其快速、簡(jiǎn)單、高效、環(huán)保等優(yōu)勢(shì)，得到檢驗(yàn)檢測(cè)工作者的一致認(rèn)可。平?jīng)鍪修r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與檢驗(yàn)檢測(cè)中心科技人員以QuEChERS 方法作為前處理手段，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），建立了鮮香菇中13種殘留農(nóng)藥快速、準(zhǔn)確的分析方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? ?材料與方法

1.1? ?供試材料

1.1.1? ?試劑耗材? ?提取包（4.0 g MgSO4、1.0 g NaCl、1.0 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉）、陶瓷均質(zhì)子、凈化管（150 mg PSA、900 mg MgSO4），均購(gòu)于深圳逗點(diǎn)生物公司;乙腈、乙酸乙酯均為色譜級(jí)試劑，0.2 μm有機(jī)相微孔濾膜（美國(guó)安捷倫）。

1.1.2? ?儀器設(shè)備? ?氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫7000C）、高速冷凍離心機(jī)（湖南赫西HR/T20MM）、水浴氮吹儀（美國(guó)Organomation公司N-EVAP7M112）、天平（梅特勒PL602E）、漩渦混合器（寧波新芝生物XW-80A）。

1.1.3? ?標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)? ?13種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所（天津），濃度均為100 μg/mL。

1.1.4? ?檢測(cè)對(duì)象? ?試驗(yàn)選取的香菇樣品來(lái)源于例行監(jiān)測(cè)中未檢出農(nóng)藥殘留的樣品。

1.2? ?試驗(yàn)方法

1.2.1? ?樣品的前處理? ?稱取10 g香菇樣品于50 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈、提取包和1粒陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min后4 200? r/min離心5 min。吸取6 mL上清液加到凈化管中，渦旋混勻1 min，4 200 r/min離心5 min，準(zhǔn)確吸取1 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵羶舾?。加? mL乙酸乙酯復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，用于測(cè)定。

1.2.2? ?儀器條件? ?色譜柱為DB-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;色譜柱溫度先以40 ℃保持1 min，然后以40 ℃/min程序升溫至120 ℃，再以5 ℃/min升溫至240 ℃，再以12 ℃/min升溫至300 ℃，保持6 min;載氣為氦氣，純度≥99.999%，流速1.0 mL/min;進(jìn)樣口溫度為280 ℃;進(jìn)樣量為1 μL;進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣;電子轟擊源為70 eV;離子源溫度為280 ℃;傳輸線溫度為280 ℃;溶劑延遲3 min;采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。13種農(nóng)藥的保留時(shí)間、定性離子對(duì)、定量離子對(duì)等見(jiàn)表1。

1.2.3? ?標(biāo)準(zhǔn)曲線? ?把香菇未檢出農(nóng)藥殘留樣品按1.2.1進(jìn)行前處理，得到香菇空白基質(zhì)溶液，配制成系列農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)，得到峰面積與質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，在0.01～0.80 μg/mL線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。設(shè)置3個(gè)添加水平，分別為0.01、0.10、0.50 mg/kg，在香菇空白樣品中添加13種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，同樣按照1.2.1對(duì)每個(gè)水平進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定，分別計(jì)算得到回收率平均值。在重復(fù)性條件下，精密度用重復(fù)性限（r）表示，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)重復(fù)性限（r），r值由標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.113 — 2018附錄D中查詢而得[13 ]。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?前處理過(guò)程及質(zhì)譜條件優(yōu)化

試驗(yàn)前處理方法參考GB 23200.113—2018中QuEChERS前處理的步驟[13 ]，樣品加入乙腈后，先超聲5 min，使得目標(biāo)物與乙腈充分接觸以增加提取率，隨后加入提取包按1.2.1進(jìn)行前處理。由于香菇中色素較少，使用淺色凈化管（不含GCB粉末），以避免石墨炭黑對(duì)目標(biāo)物的吸附作用而降低回收率。氮吹過(guò)程也是影響回收率的關(guān)鍵步驟，氮?dú)饩従復(fù)ㄈ耄舭l(fā)凈干后蓋上塞子，放置至室溫后迅速用乙酸乙酯定容，及時(shí)裝瓶上樣。

質(zhì)譜條件的優(yōu)化主要包括母離子、子離子、碰撞能量、掃描時(shí)間的選擇和優(yōu)化。本研究在GB 23200.113 — 2018的基礎(chǔ)上，對(duì)個(gè)別農(nóng)藥離子對(duì)和碰撞能量進(jìn)行了優(yōu)化，以進(jìn)一步增加農(nóng)藥?kù)`敏度，降低干擾因素，提高檢測(cè)效率。

2.2? ?香菇空白基質(zhì)和香菇空白基質(zhì)中13種農(nóng)藥總離子流色譜

從圖1、圖2可以看出，香菇空白樣品中的基質(zhì)干擾較大，有較多的雜峰。用香菇空白基質(zhì)配制的13種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液峰型較好，各農(nóng)藥化合物均分離。

2.3? ?回收率與精密度

由表2可知，13種農(nóng)藥在香菇中的平均回收率為75.4%～110.6%，3個(gè)添加水平下2次結(jié)果的絕對(duì)差值均小于其對(duì)應(yīng)的重復(fù)性限r(nóng)，符合標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.113 — 2018的要求[13 ]。

2.4? ?基質(zhì)效應(yīng)

香菇樣品中含有大量的多糖、嘌呤、核酸等物質(zhì)，基質(zhì)比較復(fù)雜，定量時(shí)用基質(zhì)標(biāo)定量，13種農(nóng)藥的回收率均在正常范圍內(nèi)?；|(zhì)配制的混標(biāo)有一些雜峰的干擾，若只用氣相色譜分析會(huì)影響定性定量的準(zhǔn)確性[14 - 16 ]。本研究采用多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，有效地避免了香菇基質(zhì)中的假陽(yáng)性。

3? ?結(jié)論與討論

13種農(nóng)藥在香菇中的平均回收率為75.4%～110.6%，均符合方法要求。在3個(gè)添加水平重復(fù)性條件下，2次平行結(jié)果的絕對(duì)值差均小于相對(duì)應(yīng)的重復(fù)性限（r）。日常檢測(cè)工作中不可能每一個(gè)樣品去做6個(gè)以上的重復(fù)性檢測(cè)，本研究采用重復(fù)性限表示精密度，方便準(zhǔn)確，有效地提高了工作效率。在農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作中，最重要的環(huán)節(jié)就是樣品前處理過(guò)程，直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[17 ]，QuEChERS 法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、高效，適合大批量樣品的檢測(cè)。采用QuEChERS 方法與氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀相結(jié)合，運(yùn)用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，可有效地降低香菇中的基質(zhì)干擾，定性準(zhǔn)確，檢測(cè)效率進(jìn)一步提高。

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（本文責(zé)編：鄭立龍）

收稿日期：2021 - 02 - 25;修訂日期：2021 - 06 - 16

作者簡(jiǎn)介：任金萍（1986 — ），甘肅靖遠(yuǎn)人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與檢驗(yàn)檢測(cè)工作。聯(lián)系電話：（0）15249343657。Email：784209489@qq.com。