白小英 王雪華/內(nèi)蒙古通遼市科左中旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 029300

楊鳳梅/內(nèi)蒙古通遼市科左中旗畜牧工作站 029300

由于養(yǎng)牛業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，由原始散養(yǎng)模式向集約舍飼模式轉(zhuǎn)變，飼養(yǎng)過程中也隨之出現(xiàn)很多問題，如飼養(yǎng)密度過大、環(huán)境衛(wèi)生差、日糧飼喂不合理、飼喂方式不科學(xué)等，這些問題解決不好，就會(huì)發(fā)生各種疾病。魏氏梭菌病就是其中較高發(fā)的一種疾病。魏氏梭菌病病原為產(chǎn)氣莢膜梭菌，正常情況下，土壤、污水、飼料、糞便及腸道中均存在一定數(shù)量的病原菌，屬于條件性致病菌。引起發(fā)病一是外源性感染，通過消化系統(tǒng)或接觸感染。二是牛體免疫力下降或胃腸環(huán)境特別是胃腸酸度發(fā)生明顯改變時(shí)引起自體感染。體內(nèi)病原菌大量繁殖后，釋放大量?jī)?nèi)毒素進(jìn)入血液，引起牛發(fā)病急劇死亡。此類病多感染青壯年牛，常呈急性經(jīng)過，來不及用藥治療即死亡。少數(shù)有臨床經(jīng)過的慢性病牛，可用10%～25%葡萄糖、維生素C、生理鹽水、碳酸氫鈉液等靜脈注射，樟腦磺酸鈉、硫酸鎂等肌肉注射，進(jìn)行對(duì)癥治療。同時(shí)加強(qiáng)對(duì)病牛護(hù)理。對(duì)其他同群健康?？刹捎们嗝顾?、鏈霉素、磺胺嘧啶等藥物進(jìn)行肌肉注射，實(shí)施預(yù)防性治療。也可將土霉素粉、氟苯尼考粉等加入水中飲服或飼料里喂服，起到預(yù)防作用。另外，要及時(shí)找出發(fā)病原因，采取消毒、隔離病牛、緊急免疫注射、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合性措施，進(jìn)一步將疫情的影響降到最低，保障養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

1 牛魏氏梭菌病發(fā)病原因分析

1.1 外源性感染因素由于圈舍環(huán)境衛(wèi)生不好，糞便、污水、墊草等長(zhǎng)期得不到清理，大量病原菌污染飼草、飼料、飲水等造成感染；初春秋末，放牧場(chǎng)地低洼潮濕，土壤中存在病原菌，家畜采食污染牧草、水源而引起感染。

1.2 飼養(yǎng)管理不當(dāng)引發(fā)的內(nèi)源性感染因素突然變換飼料或長(zhǎng)期飼喂劣質(zhì)飼草料及精飼料比例過大等，如突然或大量飼喂青嫩多汁、蛋白質(zhì)含量豐富、酸性較大的青貯和黃干貯等飼料，牛胃腸道pH 值發(fā)生急劇變化，酸度增高，引起腸道正常消化機(jī)能紊亂或破壞，腸道內(nèi)固有病原菌加速大量繁殖，產(chǎn)生毒素經(jīng)腸壁吸收到血液而引起發(fā)病。另外，飼喂保存不當(dāng)?shù)拿棺兦噘A、黃干貯、秸稈干草等飼草料也會(huì)引起發(fā)病。

1.3 氣候環(huán)境因素牛魏氏梭菌病一年四季均可發(fā)生。但以早春、秋末等季節(jié)多發(fā)。此季節(jié)溫度高低變化幅度大，致使牛體自身免疫力隨之下降；圈舍、環(huán)境、草場(chǎng)等濕度大，特別是秋雨大的年份，病原菌活躍，繁殖生長(zhǎng)加快，更易引起發(fā)病。

1.4 藥物不合理使用因素在飼養(yǎng)過程中，治療和預(yù)防各種疾病時(shí)，長(zhǎng)期大量使用抗生素藥物，對(duì)牛產(chǎn)生嚴(yán)重影響，導(dǎo)致牛腸道內(nèi)菌群失調(diào)，造成正常消化機(jī)能紊亂而感染發(fā)病。

2 臨床診斷

2.1 流行特點(diǎn)產(chǎn)氣莢膜梭菌根據(jù)產(chǎn)生外毒素的種類差別，本菌可分成A、B、C、D、E 五個(gè)血清型。本病發(fā)病急、死亡快、死亡率高，以全身實(shí)質(zhì)器官出血，尤以心臟出血明顯，膽囊充盈體積變大、小腸部出血等為特征。此病原菌能使不同年齡、不同品種的牛發(fā)病，四季均可發(fā)生，臨床以初春、秋末時(shí)節(jié)多發(fā)。繁殖母牛以4～6 月份發(fā)病較多，犢牛以4～5 月份、10～11 月份發(fā)病較多，病程長(zhǎng)短不一，短則數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)，長(zhǎng)則3～4d 或更長(zhǎng)；病死率可達(dá)93%～100%，發(fā)病牛多為青壯年體格強(qiáng)壯、膘情較好者。

2.2 臨床癥狀病程短，一般看不到任何癥狀，突然發(fā)病，死亡快。發(fā)病牛精神不振，口流清涎，腹痛，急劇腹痛；體溫增高或正常，少部分牛病初糞便呈水樣，之后排帶血、膠凍樣或黑褐色水樣糞便，糞便有時(shí)呈噴射狀，有特殊的腥臭味，頻頻努責(zé)，呈里急后重；呼吸促迫，結(jié)膜發(fā)紺，全身肌肉震顫；行走不穩(wěn)，時(shí)有驚恐表現(xiàn)，隨后狂叫倒地，四肢滑動(dòng)，繼而死亡。有的當(dāng)天晚上飲食均正常，第二天早上發(fā)現(xiàn)已經(jīng)死亡，有的放牧歸來途中突然死亡。死后腹部迅速膨大，從口腔流出大量泡沫樣液體，舌伸出口外，肛門外翻。

2.3 病理剖檢變化以全身實(shí)質(zhì)性器官出血為主要特征，胃粘膜脫落，瓣胃最明顯，腸管大面積出血，空腸最明顯，場(chǎng)管內(nèi)充滿大量氣體，外表呈紅褐色，腸黏膜脫落呈彌漫性出血。膽囊充盈，體積變大。病程長(zhǎng)的可見小腸結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍，有出血。腸系膜淋巴結(jié)充血腫大或有出血，心臟質(zhì)地變軟，心耳及心外膜有大量出血點(diǎn)或出血斑，心臟橫徑變大。肝腫大。肺水腫，呈鮮紅色。腎瘀血，腫脹。脾腫脹，有出血斑，呈紫黑色。淋巴結(jié)腫大，呈大理石樣。

2.4 實(shí)驗(yàn)室診斷方法

2.4.1 樣品采集采集病死牛實(shí)質(zhì)器官（心、肝、脾、肺、腎）等分別接種到血瓊脂平皿和厭氧肉肝湯中進(jìn)行細(xì)菌學(xué)分離。采集發(fā)病動(dòng)物的腸管，尤其是小腸的回腸部位，兩端分別用繩扎緊，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行毒素檢測(cè)。

2.4.2 通用檢測(cè)技術(shù)

2.4.2.1 涂片和鏡檢 采集病死牛實(shí)質(zhì)器官心、肝、脾、肺、腎、空腸腸壁，無菌操作抹片，進(jìn)行革蘭氏染色并鏡檢，當(dāng)發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽性、兩端鈍園、邊緣整齊有莢膜的大桿菌，單個(gè)或成雙排列，偶見有芽孢時(shí)可初步疑為產(chǎn)氣莢膜梭菌病。

2.4.2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定

（1）活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)（根據(jù)GB/T4789.13—2003 進(jìn)行）無菌操作稱取食品檢樣25g（25mL）放入均質(zhì)器中，加0.1%蛋白胨水225mL，低速攪動(dòng)1～2min，使之均質(zhì)化，作為1:10稀釋液。將上述1:10 稀釋液按1mL 加0.1%蛋白胨水9mL，作10-2～10-6系列稀釋液。吸取各稀釋液1mL，分別放入兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)平皿內(nèi)澆注約50℃的SPS 瓊脂15～20mL，仔細(xì)轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使稀釋液和瓊脂充分混合均勻。上述瓊脂平板凝固后，倒置于厭氧培養(yǎng)裝置內(nèi)，于（36±1）℃培養(yǎng)24h。選取長(zhǎng)有30～300 個(gè)菌落的平板，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

（2）鑒定試驗(yàn)由平板上任取10 個(gè)黑色菌落，分別接種FT 培養(yǎng)基，于（36±1）℃培養(yǎng)18～24h，用上述培養(yǎng)液涂片，革蘭染色鏡檢。產(chǎn)氣莢膜桿菌為革蘭陽性粗大桿菌，其耐熱菌株可能形成卵形芽孢，位于菌體中央或近端，其寬度一般不大于菌體。用接種環(huán)穿刺接種動(dòng)力—硝酸鹽培養(yǎng)基，于（36±1）℃培養(yǎng)24h，觀察接種線的生長(zhǎng)情況，判斷有無動(dòng)力，然后滴加甲萘胺液和對(duì)對(duì)氨基苯磺酸液各0.5mL，觀察硝酸鹽是否被還原。產(chǎn)氣莢膜梭菌無動(dòng)力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。取生長(zhǎng)旺盛FT 培養(yǎng)液1mL 接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基，在46℃水浴中培養(yǎng)24h后觀察有無“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，5h 內(nèi)不發(fā)酵者為陰性。產(chǎn)氣莢膜梭菌發(fā)酵乳糖，凝固酪蛋白并大量產(chǎn)氣，呈現(xiàn)“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，但培養(yǎng)基不變黑。用接種環(huán)取FT 培養(yǎng)液點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板（每張平板可至少接種10 點(diǎn)），于（36±1）℃厭氧培養(yǎng)24h，觀察接種點(diǎn)變化。產(chǎn)氣莢膜桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵黃中的卵磷脂，接種點(diǎn)的底部及周圍形成乳白色渾濁帶。

（3）菌數(shù)計(jì)算根據(jù)菌落的計(jì)數(shù)和確證試驗(yàn)的結(jié)果，計(jì)算每克（毫升）食品檢樣的含菌數(shù)。

3 防治措施

3.1 加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生和消毒工作養(yǎng)殖戶要嚴(yán)格消毒制度。應(yīng)用物理、化學(xué)、生物等消毒手段，定期開展消毒工作。通過消毒可抑制或殺滅產(chǎn)氣莢膜梭菌，達(dá)到消滅傳染源，切斷傳播途徑的目的，有效控制牛魏氏梭菌病的發(fā)生與流行。此外，通過消毒也可殺滅其他病原微生物及寄生蟲卵等，有效防控其他各種疫病。消毒藥使用時(shí)要注意藥物種類選擇和濃度劑量的配比，根據(jù)消毒對(duì)象選擇適宜的消毒方法。消毒藥使用宜遵從高效、低毒、廉價(jià)、操作方便的原則。同時(shí)養(yǎng)殖戶要定期更換消毒藥種類，以免病原微生物產(chǎn)生耐藥性，影響消毒效果。消毒時(shí)要注意環(huán)境因素影響，糞污墊草等有機(jī)物的存在、刮風(fēng)、下雨、冰凍等均會(huì)影響消毒效果。消毒一定要徹底，不能留死角，包括圈舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地、飼槽、水槽、周圍環(huán)境、運(yùn)輸車輛、工作服及其他相關(guān)用具和物品。消毒藥宜現(xiàn)配現(xiàn)用，配完后不宜放置過久，影響消毒效果。開展消毒工作時(shí)要注意人畜安全。對(duì)新購進(jìn)的牛要單獨(dú)隔離飼養(yǎng)2～3 周，觀察是否有異常，確認(rèn)健康后方可混群飼養(yǎng)，以免疫病侵入傳染給其他健康牛。要經(jīng)常清理圈舍內(nèi)墊草糞便及周圍雜物，夏季做好驅(qū)殺環(huán)境中有害昆蟲，減少疫病傳播。

3.2 科學(xué)飼養(yǎng)管理在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，特別是舍飼方式飼養(yǎng)，要科學(xué)合理飼喂全價(jià)飼料，特別要添加足夠的維生素、礦物質(zhì)等飼料。精粗飼料配比要適宜，嚴(yán)禁精飼料超量。在更換飼料或飼喂精飼料、青貯飼料、黃干貯等飼料初期，要控制飼喂量，不要喂的太多，一般要求有2～3 周時(shí)間的過度階段，才能飼喂到正常量。飼喂青貯、黃干貯飼料期間，特別初期階段，要給牛添加小蘇打或熟石灰水，調(diào)整胃腸內(nèi)酸度。不同日齡、不同生產(chǎn)階段的牛要分群飼養(yǎng)，隨時(shí)調(diào)整添加或減少精飼料數(shù)量，避免采食不均?？捎胮H 試紙監(jiān)測(cè)尿樣，正常草食性牛pH 值尿液為8.0～8.2 呈弱堿性，若發(fā)現(xiàn)尿樣pH值低于8.0，應(yīng)立即分析飼料結(jié)構(gòu)等問題，立即加以調(diào)整，用小蘇打、熟石灰等。要確保飼料優(yōu)質(zhì)。寒冷季節(jié)，不要飼喂冰凍草料，不要長(zhǎng)時(shí)間飼喂粗纖維、木質(zhì)素含量高的劣質(zhì)飼草，如花生蔓、黃豆秸等。特別是因儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)拿棺兦噘A、黃干貯、秸稈干草等飼料更要慎重。初秋飼喂全株青玉米等青綠飼草時(shí)要注意，飼喂初期不要喂太多太飽，飼喂量應(yīng)慢慢由少到多，最后達(dá)到正常量。早春、秋末季節(jié)多變，加強(qiáng)防范牛群應(yīng)激反應(yīng)，要加強(qiáng)圈舍保暖、通風(fēng)、衛(wèi)生等工作，保證圈舍內(nèi)空氣清新溫暖舒適。放牧要選擇干燥地段，不要到低洼潮濕地段放牧，不要飲泡子水。在飼養(yǎng)過程中，治療和預(yù)防使用抗生素時(shí)，不宜長(zhǎng)時(shí)間過量使用，防止瘤胃正常微生物群紊亂，必要時(shí)，適當(dāng)添加些微生態(tài)制劑。

3.3 提高易感動(dòng)物免疫力對(duì)曾經(jīng)發(fā)生過牛魏氏梭菌病的村屯或場(chǎng)戶，要選擇適宜的疫苗每年定期開展免疫注射。使用的主要是甲醛滅活疫苗，常用的疫苗有兔出血癥—魏氏梭菌病—巴氏桿菌三聯(lián)苗，兔出血癥—巴氏桿菌—A 型魏氏梭菌三聯(lián)苗，A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗，三種疫苗均有很好的保護(hù)率。對(duì)發(fā)生魏氏梭菌病的場(chǎng)戶，要及時(shí)采取隔離病牛、消毒及對(duì)癥治療等措施。對(duì)病害尸體實(shí)施嚴(yán)格無害化處理。同群假定健康牛要采取緊急免疫或用抗生素預(yù)防性治療，查找發(fā)病原因，通過排除病因和改善飼養(yǎng)管理等措施，提高牛群自身免疫力，減少發(fā)病與死亡。

3.4 藥物防治近幾年牛梭菌病頻繁散發(fā)流行，應(yīng)該高度重視。需要做好病原血清型分析，做好防疫接種和藥物治療工作。

通過實(shí)踐表明，癥狀較輕的病牛，應(yīng)用10%～25%葡萄糖、維生素C、生理鹽水、碳酸氫鈉液等靜脈緩慢注射，硫酸鎂、樟腦磺酸鈉等肌肉注射，進(jìn)行對(duì)癥治療有一定療效。對(duì)同群假定健康牛采取青霉素、鏈霉素、磺胺嘧啶等藥物肌肉注射，起到預(yù)防效果，在飲水中放入蘇打或熟石灰，可有效控制該病的繼續(xù)發(fā)生與流行。

4 結(jié)語

近些年在養(yǎng)牛生產(chǎn)中，魏氏梭菌病是多發(fā)的一種疫病，因?yàn)榘l(fā)病突然，病死率高，來不及治療，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，認(rèn)識(shí)了解牛魏氏梭菌病的發(fā)病原因、診斷方法及有效的防治措施是非常必要的。掌握熟悉牛魏氏梭菌病發(fā)生原因、診斷技術(shù)及防治措施，能夠?yàn)轲B(yǎng)牛業(yè)提供相關(guān)的幫助與參考。