聶忠莉，王海龍，王曉玲，高 華，張 勇，蕭茂玲

(1.成都大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，四川 成都 610106； 2.成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041)

0 引 言

他達(dá)拉非是一種口服磷酸二酯酶V型(PDE5)抑制劑，用于治療男性勃起功能障礙(MED).他達(dá)拉非為白色或類白色結(jié)晶性粉末，該化合物的合成路線主要以D-色氨酸和胡椒醛為原料[1]，在合成過程中使用了有機(jī)溶劑，包括異丙醇、乙腈、四氫呋喃和三乙胺.根據(jù)各溶劑性質(zhì)和沸點(diǎn)的不同，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求，本研究采用氣相色譜法及殘留溶劑測定法對異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺在產(chǎn)品中的殘留情況進(jìn)行了研究[2-5].

1 材料與儀器

1.1 儀 器

7890A型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；BP-210D型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司).

1.2 材 料

異丙醇(批號，051180601,HPLC級)，購自上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆灰揖?批號，LH40T105,HPLC級)，購自北京百靈威科技有限公司；四氫呋喃(批號,2017062001,HPLC級)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(批號，2019071001，HPLC級)，購自成都市諾爾施科技有限責(zé)任公司；三乙胺(批號，20170925，HPLC級)，購自天津市密歐化學(xué)試劑有限公司；他達(dá)拉非(批號，190501S、190502S，190503S)，購自旭輝制藥有限公司.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或極性相近)為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱；柱溫在50 ℃保持5min，再以30 ℃/min的速率升至240 ℃，維持5min；檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為260 ℃，進(jìn)樣口溫度為220 ℃；進(jìn)樣體積1 μL.

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液配制

精密稱取異丙醇、乙腈、四氫呋喃和三乙胺適量，用N,N-二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL約含異丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氫呋喃0.072 mg和三乙胺0.032 mg的溶液，作為對照品溶液.

2.2.2 供試品溶液配制

取他達(dá)拉非適量，精密稱定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋制成每1 mL約含100 mg的溶液，作為供試品溶液.

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密稱取他達(dá)拉非約500 mg，加入各有機(jī)溶劑適量，再加N，N-二甲基甲酰胺稀釋制成每1 mL約含他達(dá)拉非100 mg、異丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氫呋喃0.072 mg和三乙胺0.032 mg的混合溶液作為系統(tǒng)適用性溶液.精密量取1 μL直接進(jìn)樣，連續(xù)測定6次，結(jié)果見表1～表4及圖1.

表1 系統(tǒng)適用性試驗的峰保留時間/min

表2 系統(tǒng)適用性試驗的峰面積

表3 系統(tǒng)適用性試驗的分離度

表4 系統(tǒng)適用性試驗的拖尾因子

圖1 系統(tǒng)適用性試驗色譜圖

由表1～表4及圖1可知，在“2.1”色譜條件下重復(fù)測定6次的峰保留時間、峰面積、分離度與拖尾因子的參數(shù)均能到達(dá)驗證要求，表明該條件的系統(tǒng)適用性良好.

2.4 檢測限與定量限

取異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺各適量，分別加乙醇溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，直接進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺的檢測限分別為0.468 ng、0.118 ng、0.034 ng與0.171 ng，定量限分別為1.093 ng、0.665 ng、0.327 ng與0.609 ng.

供試品進(jìn)樣濃度為100 mg/mL，異丙醇的限度濃度(0.5%)約相當(dāng)于其定量限濃度的457倍，乙腈的限度濃度(0.041%)約相當(dāng)于其定量限濃度的62倍，四氫呋喃的限度濃度(0.072%)約相當(dāng)于其定量限濃度的220倍，三乙胺限度濃度(0.032%)約相當(dāng)于定量限濃度的53倍，均滿足檢測靈敏度要求.

定量限濃度連續(xù)進(jìn)樣6次，各溶劑保留時間RSD均小于1.0%，峰面積的RSD均小于10%，表明定量限濃度供試品溶液的精密度實(shí)驗結(jié)果較好.

2.5 線性范圍

精密稱取異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺各適量，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋制成系列濃度的混合供試品溶液，精密量取1 μL直接進(jìn)樣，考察各溶劑濃度與峰面積的線性關(guān)系，并以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，用最小二乘法計算線性回歸圖.結(jié)果表明，在0.07～748.83 μg/mL范圍內(nèi)，異丙醇(Y=0.488 9X-0.882 5，R2=0.997 8)、乙腈(Y=0.437 9X+0.108 7，R2=0.997 1)、四氫呋喃(Y=0.518 4X+0.434 2，R2=0.999 5)與三乙胺(Y=0.630 8X+0.433 2，R2=0.999 0)的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系.

2.6 回收率

分別精密稱取異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺各適量，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋制成每1 mL約含異丙醇5 mg、乙腈0.41 mg、四氫呋喃0.72 mg與三乙胺0.32 mg的混合儲備液.

精密稱取他達(dá)拉非約500 mg，稱取9份，分成3組，每組分別精密加入混合儲備液適量，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至5mL，制成各溶劑限度濃度50%、100%和150%的供試品溶液各3份，共9份，搖勻即得.

按照“2.1”色譜條件，精密量取上述各溶液1 μL，直接進(jìn)樣，測定各供試品溶液中溶劑的量.扣除他達(dá)拉非原料中溶劑的量，計算測得值與理論值接近的程度(見表5～表8)，結(jié)果表明，殘留溶劑回收率滿足要求.

表5 異丙醇回收率

表6 乙腈回收率

表7 四氫呋喃回收率

表8 三乙胺回收率

2.7 重復(fù)性

分別取6份他達(dá)拉非約500 mg，并分別加“2.6”項下的混合儲備液適量，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋制成每1 mL約含他達(dá)拉非100 mg、異丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氫呋喃0.072 mg與三乙胺0.032 mg的混合溶液，混勻，即得供試品溶液.分別取供試品溶液與“2.2.1”項下的對照品溶液各1 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算出異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺的含量結(jié)果的RSD分別為1.00%、0.92%、0.85%與0.87%，表明方法的重復(fù)性好.

2.8 穩(wěn)定性

使用“2.7”項下供試品溶液分別在0、4、8、12、24h進(jìn)樣，記錄色譜圖，統(tǒng)計異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺的峰面積結(jié)果見表9.

表9 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗結(jié)果

由表9可知，在24h內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣，成分峰面積在24h內(nèi)基本無變化，供試品溶液穩(wěn)定.

2.9 耐用性

取他達(dá)拉非各約500 mg ，共11份，精密稱定，并分別加“2.6”項下的混合儲備液適量，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋制成每1 mL約含他達(dá)拉非100 mg、異丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氫呋喃0.072 mg與三乙胺0.032 mg的混合溶液，混勻，即得供試品溶液.分別取上述供試品溶液與“2.2.1”項下的對照品溶液各1 μL進(jìn)樣，微小改變色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺測得量及回收率，結(jié)果表明此方法耐用，結(jié)果見表10.

表10 耐用性實(shí)驗結(jié)果/%

2.10 樣品測定

分別取3批他達(dá)拉非樣品，按“2.2”項下的方法配制對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行檢測，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算樣品中異丙醇、乙腈、四氫呋喃與三乙胺的殘留量.結(jié)果顯示，批號190501S、190502S、190503S 3批他達(dá)拉非均分別檢出約0.004%的異丙醇，約0.01%的四氫呋喃，乙腈與三乙胺均未檢出.

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，氣相色譜法及殘留溶劑測定法能有效、準(zhǔn)確地測出他達(dá)拉非的殘留溶劑，并規(guī)定他達(dá)拉非中異丙醇、乙腈、四氫呋喃和三乙胺的殘留不得大于0.5%、0.041%、0.072%與0.032%，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定[2].

他達(dá)拉非原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載入《美國藥典》和《歐洲藥典》，但《美國藥典》和《歐洲藥典》中未對他達(dá)拉非殘留溶劑進(jìn)行控制，故在他達(dá)拉非原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定時，建議增加對殘留溶劑的控制.