陶國華，趙 枰，郁 超

(南通市第一人民醫(yī)院 檢驗科,江蘇 南通226001)

非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lunch cancer，NSCLC)是肺癌的主要組織學(xué)亞型，約占所有肺癌病例的80%以上[1]。MicroRNA(miRNA)是一類短單鏈非編碼RNA分子，miRNAs的功能異常對于評估癌癥患者的腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療具有重要的臨床意義，可作為診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。miR-133a最初是在骨骼肌和心肌的發(fā)育和分化過程中被初步鑒定出來，miR-133a有兩個亞型，包括miR-133a-1和miR-133a-2，位于18q11.2、20q13.33染色體上[2]。miR-133a的異常表達(dá)與腎細(xì)胞癌、胃癌等有關(guān)，在腎細(xì)胞癌中，miR-133a可以通過調(diào)節(jié)靶基因transgelin-2(TAGLN2)來抑制細(xì)胞增殖和侵襲[3]；有文獻(xiàn)報道在胃癌組織中，miR-133a的表達(dá)降低[4]。同時，有文獻(xiàn)表明miR-133a通過靶向MMP-14來抑制NSCLC細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲[5]。此外，相對于正?；蜞徑姆谓M織，miR-133a在NSCLC組織中表現(xiàn)出明顯的下調(diào)[5]。miR-133a的低表達(dá)在幾種癌癥中顯示出不良的預(yù)后[6]。本研究檢測了miR-133a在NSCLC患者腫瘤和正常組織中的表達(dá)，探索了miR-133a表達(dá)與NSCLC患者的臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象2017年1月-2019年10月診斷為NSCLC的患者(n=82)為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)通過病理組織學(xué)切片來進(jìn)行診斷，并由至少兩名病理學(xué)家診斷為NSCLC的患者，NSCLC的診斷均符合《NCCN非小細(xì)胞肺癌臨床實踐指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；(2)患者在本院接受手術(shù)切除治療，并知曉手術(shù)風(fēng)險；(3)患者年齡<80歲，一般情況良好，無精神/心理異常，且自愿參加配合。本研究中所有研究對象已簽署臨床研究知情同意書。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較見表1，相較于鄰近正常肺組織而言，NSCLC組織的miR-133a表達(dá)降低(NSCLC：0.25±0.12，鄰近正常肺組織：0.68±0.14；P<0.001)。miR-133a表達(dá)與年齡、性別、抽煙、T分期、血管浸潤、分化程度無關(guān)。隨著腫瘤分期和N分期的加重，miR-133a表達(dá)下降(P=0.005)。有80.49%(66/82)的病例為腺癌，18.29%(15/82)的病例為鱗癌，1.22%(1/82)的病例為大細(xì)胞癌，各種組織學(xué)分型下miR-133a表達(dá)水平顯著不同(P<0.001)。

2.2 miR-133a對NSCLC及病例特點預(yù)測價值的ROC曲線分析如圖1ROC曲線所示，miR-133a對NSCLC預(yù)測價值的ROC曲線下面積為0.747 4(95%CI：0.673 0-0.821 85，P<0.000 1)。miR-133a預(yù)測NSCLC的最佳切點為0.294 3，此時敏感度為77.11%，特異度為63.86%，約登指數(shù)為0.409 7。當(dāng)患者miR-133a<0.294 3時，患者罹患NSCLC風(fēng)險升高2.133倍。miR-133a對腫瘤進(jìn)展到晚期預(yù)測價值的ROC曲線下面積為0.661 3(95%CI：0.579 1- 0.743 6，P=0.000 3)。miR-133a預(yù)測腫瘤分期為3-4期的最佳切點為0.301 4，此時敏感度48.19%，特異度為80.72%，約登指數(shù)為0.289 1。當(dāng)患者miR-133a<0.301 4時，患者處于腫瘤晚期風(fēng)險升高2.500倍。miR-133a對淋巴轉(zhuǎn)移預(yù)測價值的ROC曲線下面積0.653 2(95%CI：0.570 0 to 0.736 5，P<0.000 7)。miR-133a預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的最佳切點為0.273 7，此時敏感度為69.88%，特異度為57.83%，約登指數(shù)為0.277 1。當(dāng)患者miR-133a<0.273 7時，患者有淋巴轉(zhuǎn)移的風(fēng)險升高1.657 0倍。

2.3 miR-133a對NSCLC患者生存時間的影響如圖2所示，在接受隨訪且最終臨床結(jié)局為死亡的51例患者中，有29例患者miR-133a水平相對較低(低于中值0.19)，而22例患者miR-133a表達(dá)水平相對較高(高于中值0.19)。高miR-133a表達(dá)組的生存時間為(19.48±5.48)個月，而低miR-133a表達(dá)組的生存時間為(16.74±4.38)個月，兩組之間的存活率存在2.74個月的差異(P=0.058，圖2)。

表1 NSCLC患者miR-133a水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖1 miR-133a對NSCLC及病例特點預(yù)測價值的ROC曲線分析

3 討論

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，包括小細(xì)胞肺癌和NSCLC。與小細(xì)胞癌相比，NSCLC細(xì)胞生長緩慢，擴散和轉(zhuǎn)移相對較慢。NSCLC是肺癌的主要組織學(xué)亞型，約占所有肺癌病例的80%以上[1]。NSCLC主要分為3類：腺癌(最常見的類型)、鱗癌(約占肺癌的1/4)、大細(xì)胞癌(占大約10%的肺癌)[1]。miRNA是一類短鏈的非編碼RNA，通過其與靶標(biāo)mRNA的3′UTR中的特定區(qū)域結(jié)合來調(diào)節(jié)基因表達(dá)，從而介導(dǎo)它們的翻譯抑制或降解[8]。miRNA的表達(dá)可以是組織特異性的和/或由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的，根據(jù)miRNA的結(jié)構(gòu)和預(yù)測的mRNA靶點，許多miRNA被用于預(yù)測癌癥的發(fā)生和預(yù)后[8]。在NSCLC患者中，有文獻(xiàn)報道了miRNA的不同功能，如，miR-598通過抑制NSCLC中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和Derlin-1來抑制遷移和侵襲；miR-550a-3p通過下調(diào)TIMP2促進(jìn)NSCLC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[9-10]。最近，miR-133a被證明可作為參與人類癌癥發(fā)生的基因表達(dá)調(diào)節(jié)劑。有研究證明miR-133a通過調(diào)節(jié)靶基因MMP-14可抑制NSCLC細(xì)胞的生長和遷移[5]。此外，在多種人類癌癥中也觀察到miR-133a表達(dá)的下降，包括腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌、食道鱗狀細(xì)胞癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、骨肉瘤、宮頸癌、乳腺癌等[11-15]。這表明miR-133a可能在癌癥發(fā)病機理中發(fā)揮抑癌作用。但是，miR-133a與非小細(xì)胞肺癌患者的病理特征和預(yù)后之間的相關(guān)性仍然未知。miR-133a具有潛在的腫瘤抑制作用，miR-133a可以抑制細(xì)胞侵襲性[5,9-13]。因此，miR-133a有望成為NSCLC的診斷生物標(biāo)志物和治療靶點。本研究的主要重點在于miR-133a與NSCLC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。首先，相較于鄰近正常肺組織而言，NSCLC組織的miR-133a表達(dá)明顯降低(P<0.001)，表明miR-133a可作為NSCLC的生物標(biāo)志物。其次，miR-133a在晚期腫瘤患者(腫瘤分期3-4期、N分期2-3期)組織中顯著下降，這表明miR-133a可能與NSCLC中腫瘤的生長呈正相關(guān)。然后，我們探討了miR-133a表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。在有淋巴轉(zhuǎn)移的患者中，miR-133a的水平較低；而在沒有淋巴轉(zhuǎn)移的患者中，其水平較高，且這種差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。上述研究結(jié)果揭示了miR-133a與NSCLC的診斷、腫瘤轉(zhuǎn)移和進(jìn)展之間的關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)在NSCLC中檢測到miR-133a的下調(diào)，并且miR-133a的表達(dá)降低是NSCLC患者獨立不良預(yù)后的重要預(yù)測指標(biāo)。對于NSCLC的組織學(xué)分類，盡管miR-133a的表達(dá)在腺癌、鱗癌大細(xì)胞癌的病例中存在統(tǒng)計學(xué)意義，鑒于該研究中各組織學(xué)分類的病例數(shù)，尤其是大細(xì)胞癌僅有1例，需要更多的研究來證實這一結(jié)論。并且，通過ROC工作曲線分析，miR-133a對NSCLC、患者進(jìn)展至癌癥晚期、患者發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移有一定的預(yù)測價值。當(dāng)患者miR-133a<0.294 3時，患者罹患NSCLC風(fēng)險升高2.133倍；當(dāng)患者miR-133a< 0.301 4時，患者處于腫瘤晚期風(fēng)險升高2.500倍。當(dāng)患者miR-133a<0.273 7時，患者有淋巴轉(zhuǎn)移的風(fēng)險升高1.657 0倍。同時，通過生存分析我們發(fā)現(xiàn)高miR-133a表達(dá)組的生存時間為(19.48±5.48)個月，而低miR-133a表達(dá)組的生存時間為(16.74±4.38)月。雖然統(tǒng)計學(xué)顯示miR-133a表達(dá)水平對NSCLC的存活率無顯著影響(P=0.058)，兩組之間的存活率存在2.74個月的差異。這提示miR-133a表達(dá)的下降對NSCLC患者是一個不良的生物預(yù)測標(biāo)志物，miR-133a潛在腫瘤抑制作用使其可能成為NSCLC的診斷生物標(biāo)記物以及治療NSCLC的靶標(biāo)。

圖2 miR-133a的表達(dá)水平對NSCLC患者生存時間的影響

綜上所述，得到以下結(jié)論：(1)miR-133a是一種腫瘤抑制性miRNA，在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用；(2)miR-133a表達(dá)下調(diào)提示NSCLC患者病情惡化和預(yù)后不良；(3)miR-133a可能是非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測性生物標(biāo)志物和可能的治療靶點。