陳相峰，胡利華，羅 奎，張 敏，冀德偉

(浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，浙江省近岸水域生物資源開(kāi)發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325005)

刀額新對(duì)蝦亦稱(chēng)基圍蝦、泥蝦，隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)、甲殼綱、十足目、對(duì)蝦科、新對(duì)蝦屬，主要分布在中國(guó)東南沿海，是新對(duì)蝦屬中個(gè)體較大的品種。近年來(lái)的大量海底拖網(wǎng)捕撈作業(yè)對(duì)刀額新對(duì)蝦的種質(zhì)資源造成了一定的破壞，刀額新對(duì)蝦的資源量大幅降低。因此，有必要對(duì)刀額新對(duì)蝦進(jìn)行種質(zhì)保護(hù)。

溫度是影響甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)與繁殖的重要因素。趙玉超等(2019)研究顯示，溫度對(duì)凡納濱對(duì)蝦受精卵的孵化率有顯著的影響，隨溫度的上升，平均孵化率呈階梯式上升；而超出孵化適宜溫度，會(huì)導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常甚至死亡(張彬等，2014)。本文以海區(qū)捕撈的自然成熟、性腺飽滿的刀額新對(duì)蝦雌蝦所產(chǎn)的受精卵為實(shí)驗(yàn)材料，研究不同溫度下刀額新對(duì)蝦胚胎及幼體發(fā)育情況，為刀額新對(duì)蝦的人工繁育提供參考，以減少刀額新對(duì)蝦的海捕需求，對(duì)刀額新對(duì)蝦的種質(zhì)資源進(jìn)行保護(hù)。

一、材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)材料

親本取用從廣東饒平外海區(qū)捕撈的自然成熟、卵巢發(fā)育至4期左右的刀額新對(duì)蝦雌蝦，平均規(guī)格(15.0±1.0)克/尾，通過(guò)親蝦袋活水充氧運(yùn)輸?shù)秸憬『Ｑ笏a(chǎn)養(yǎng)殖研究所清江基地暫養(yǎng)。

卵巢發(fā)育期根據(jù)性腺發(fā)育進(jìn)行分期：l期(01)的GSI 值為0.43±O.02，此時(shí)卵巢呈透明細(xì)線狀；2 期(02)的GSI 值為0.89±0.02，卵巢呈白濁色細(xì)帶狀；3 期(03)的GSI 值為2.45±0.33，卵巢體積繼續(xù)增大，呈白色；4 期(04)的GSI 值為6.30±0.31，卵巢體積明顯增大，呈淡黃色；5期(05)的GSI值為8.95±1.75，卵巢體積達(dá)到最大，呈灰綠色(賈錫偉等，2011)。

親蝦暫養(yǎng)：將親蝦放入水泥池中，養(yǎng)殖密度為8 尾/米2。池水為鹽度23 的自然海水經(jīng)過(guò)沉淀、沙濾后用濃縮機(jī)濃縮調(diào)整到所需鹽度28，再用雙層濾水棉袋過(guò)濾入池，然后用消毒劑消毒，曝氣36 小時(shí)后潑灑10 毫克/升EDTA 溶液，絡(luò)合水中重金屬離子，溫度為(30±0.5)℃。

受精卵的獲得：從親蝦池中挑選性腺發(fā)育至5 期的雌蝦，將其放入200 升聚乙烯桶內(nèi)，微充氣，產(chǎn)卵后移走雌蝦。

幼體的獲得及培育：對(duì)在聚乙烯桶內(nèi)的受精卵繼續(xù)培養(yǎng)，到無(wú)節(jié)幼體期后進(jìn)行燈誘收集，用水體比例法定量放入其他200升聚乙烯桶內(nèi)，充氣養(yǎng)殖。所有養(yǎng)殖桶的養(yǎng)殖條件除溫度外均相同，從Z1(溞蝦1 期)開(kāi)始喂食金藻，從M1(糠蝦1 期)開(kāi)始喂食配合飼料，從M2開(kāi)始用輪蟲(chóng)(蛋羹)和配合飼料輪換喂食，日換水1/4，餌料量均為適當(dāng)過(guò)量。

用水體比例法進(jìn)行計(jì)數(shù)：將收集的受精卵放入裝有5升水體的水桶中，用500毫升的玻璃燒杯取樣，每個(gè)桶取兩次計(jì)數(shù)，再取平均值。

2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

(1)不同溫度下受精卵孵化實(shí)驗(yàn)。設(shè)置4 個(gè)溫度梯度(24、27、30、33℃)，同時(shí)設(shè)置3 個(gè)平行，共12 個(gè)實(shí)驗(yàn)組。整個(gè)實(shí)驗(yàn)都在控溫系統(tǒng)中進(jìn)行，溫度誤差在±0.5℃，鹽度均為28。對(duì)移走產(chǎn)卵后雌蝦的養(yǎng)殖桶，每過(guò)1 小時(shí)用攪卵棒輕輕攪拌1 次，防止受精卵沉底和結(jié)塊。從第6 小時(shí)開(kāi)始觀察受精卵孵化情況，每0.5小時(shí)計(jì)數(shù)1次，每次取50粒受精卵，記錄各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的孵化時(shí)間。

(2)不同水溫下幼體發(fā)育實(shí)驗(yàn)。設(shè)置4 個(gè)溫度梯度(24、27、30、33℃)，同時(shí)設(shè)置3個(gè)平行，共12 個(gè)實(shí)驗(yàn)組。整個(gè)實(shí)驗(yàn)都在控溫系統(tǒng)中進(jìn)行，溫度誤差在±0.5℃，鹽度均為28。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組放5 000 尾無(wú)節(jié)幼體于200 升聚乙烯桶內(nèi)，充氣培育。從糠蝦期開(kāi)始觀察記錄幼體的發(fā)育情況。

用水體比例法進(jìn)行計(jì)數(shù)：用500毫升的玻璃燒杯從水體充氣“鼓沸”處取樣，每個(gè)桶取兩次計(jì)數(shù)，取平均值。

3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

(1)數(shù)據(jù)處理。初孵時(shí)間(h0)為受精卵從胚胎發(fā)育開(kāi)始到無(wú)節(jié)幼體(N)破膜而出所需最短時(shí)間。幼體集中孵化時(shí)間(h)為受精卵孵化60%～90%的平均用時(shí)。幼體生長(zhǎng)時(shí)間為從N開(kāi)始到60%～90%的幼體達(dá)仔蝦(P)的時(shí)間。

幼體孵化率(%)＝N/總卵數(shù)×100

幼體存活率(%)＝P/N×100

(2)統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，借助SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，利用單因子方差分析(one-way ANOVA)比較不同處理間的差異，利用LSD 法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

二、結(jié)果

1.溫度對(duì)胚胎發(fā)育的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在實(shí)驗(yàn)溫度范圍內(nèi)溫度影響平均孵化率，不同溫度下平均孵化率呈峰值變化。24～33℃條件下，隨溫度的上升，平均孵化率先上升、后下降；30℃時(shí)平均孵化率明顯高于24℃(P＜0.05)；27、33℃時(shí)平均孵化率雖然比24℃高，但差別不明顯(P＞0.05)。刀額新對(duì)蝦平均孵化率隨溫度的升高而升高，在超出一定溫度后下降，在30℃時(shí)平均孵化率最高，為91.7%。刀額新對(duì)蝦受精卵的孵化時(shí)間，24℃和27℃時(shí)明顯長(zhǎng)于30、33℃(P＜0.05)；30℃與33℃時(shí)的孵化時(shí)間相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，隨溫度的升高所需孵化時(shí)間縮短，孵化率先升高、后降低。

2.溫度對(duì)刀額新對(duì)蝦幼體發(fā)育的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，24℃時(shí)與27、30、33℃時(shí)刀額新對(duì)蝦幼體發(fā)育時(shí)間相比顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)，存活率明顯降低(P＜0.05)。由此看出，24℃及以下溫度對(duì)刀額新對(duì)蝦幼體的發(fā)育有較大的影響，不適合幼體培育；27、30、33℃時(shí)刀額新對(duì)蝦幼體發(fā)育時(shí)間差別不明顯(P＞0.05)；幼體存活率在33℃時(shí)明顯低于27℃和30℃(P＜0.05)而高于24℃(P＜0.05)，雖然30℃時(shí)的存活率高于27℃，但差別不明顯(P＞0.05)。這表明實(shí)驗(yàn)中刀額新對(duì)蝦幼體適宜的培育溫度為27～30℃，而最適溫度應(yīng)為30℃，刀額新對(duì)蝦的平均存活率為81.0%，幼體平均發(fā)育時(shí)間為7.7天。

三、討論

1.刀額新對(duì)蝦胚胎的發(fā)育

溫度是影響刀額新對(duì)蝦胚胎和幼體發(fā)育的重要因素。刀額新對(duì)蝦受精卵在不同溫度下，所需的孵化時(shí)間不同，孵化率也不同。30℃時(shí)刀額新對(duì)蝦受精卵的孵化率明顯高于24℃時(shí)(P＜0.05)，而24℃時(shí)的孵化率雖然低于27、33℃，但卻沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)，這說(shuō)明在30℃左右，刀額新對(duì)蝦受精卵的孵化率達(dá)到了最高。溫度影響孵化率，在一定范圍內(nèi)升高溫度可以提高孵化率，這與薛素燕等(2012)的研究結(jié)果相似。但溫度過(guò)高，則會(huì)導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常，孵化率降低(林偉雄等，1991)。

刀額新對(duì)蝦受精卵的孵化時(shí)間在24℃和27℃時(shí)與30、33℃有顯著性差異(P＜0.05)，前兩者孵化時(shí)間顯著長(zhǎng)于后兩者；30℃和33℃之間孵化時(shí)間相當(dāng)，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。這說(shuō)明在一定溫度范圍內(nèi)，升高溫度會(huì)縮短胚胎發(fā)育時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明適當(dāng)提高孵化溫度，有利于受精卵的孵化。刀額新對(duì)蝦受精卵的初孵時(shí)間最短在30～33℃，結(jié)合溫度對(duì)刀額新對(duì)蝦孵化率和孵化時(shí)間的影響，可得出理想的孵化水溫是30℃左右，這應(yīng)該與相關(guān)胚胎發(fā)育酶的活力有關(guān)，適宜的溫度有助于提高相關(guān)胚胎發(fā)育酶的活力，而過(guò)高或者較低的溫度則會(huì)降低相關(guān)胚胎發(fā)育酶活力(楊世平等，2014)，導(dǎo)致孵化率降低，孵化時(shí)間變長(zhǎng)。在本次實(shí)驗(yàn)中，溫度為30℃時(shí)，刀額新對(duì)蝦受精卵的孵化率最高，孵化時(shí)間最短，而在33℃和27℃時(shí)，受精卵孵化率降低，孵化時(shí)間變長(zhǎng)，所以最適孵化溫度在30℃左右。

2.刀額新對(duì)蝦幼體的發(fā)育

不同溫度下刀額新對(duì)蝦幼體的發(fā)育情況不同，在24℃的條件下平均存活率為44.3%，平均生長(zhǎng)時(shí)間10.2 天，其存活率明顯低于27、30、33℃時(shí)(P＜0.05)，生長(zhǎng)時(shí)間顯著長(zhǎng)于27、30、33℃時(shí)(P＜0.05)。升高溫度會(huì)減少幼體發(fā)育時(shí)間，但過(guò)高的溫度也會(huì)導(dǎo)致幼體存活率下降。33℃時(shí)刀額新對(duì)蝦幼體存活率62.0%，明顯低于27℃時(shí)的75.3%和30℃時(shí)的81.0%(P＜0.05)，這可能是溫度超過(guò)一定范圍時(shí)，對(duì)蝦消化酶活力降低，攝食能力減弱，從而影響了幼體的健康和抗病力，導(dǎo)致其存活率下降。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，溫度過(guò)低或過(guò)高都不適合幼體的培育，27～30℃是刀額新對(duì)蝦幼體發(fā)育的適宜溫度范圍。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果中刀額新對(duì)蝦幼體的生長(zhǎng)時(shí)間和存活率，在溫度為30℃時(shí)，刀額新對(duì)蝦幼體的存活率為81.0%，生長(zhǎng)時(shí)間為7.7 天，優(yōu)于24、27、33℃時(shí)，可得出30℃左右是刀額新對(duì)蝦幼體發(fā)育的最適宜溫度。