李 忠，林 新，李欽艷，鐘瑩瑩，梁文慶，宋 斌

（1．梅州市農(nóng)林科學(xué)院，廣東 梅州 514071；2．梅州市農(nóng)林科學(xué)院微生物研究所，廣東 梅州 514071；3．梅州市華康生物有限公司，廣東 梅州 514071；4．廣東省微生物研究所，廣東 廣州 510070）

靈芝（Ganoderma lingzhi），在分類學(xué)上隸屬于真菌界（Fungi）擔(dān)子菌門（Basidiomycota）傘菌綱（Agaricomycetes）多孔菌目 （Polyporales）靈芝科（Ganodermataceae）靈芝屬 （Ganoderma）[1]，在我國(guó)的使用至今已有6 800多年[2]，被稱為神草、瑞草等。2019年11月25日被國(guó)家衛(wèi)生健康委和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管總局正式認(rèn)可靈芝既是食品又是中藥材[3]。科學(xué)研究表明，靈芝活性成分復(fù)雜，有多糖、三萜類化合物、核苷酸、生物堿、甾醇等[4-6]，具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、保護(hù)肝臟、抗衰老、鎮(zhèn)靜等多種功效[5-6]，臨床可應(yīng)用于預(yù)防和治療免疫性疾病，如高血壓、腫瘤、失眠、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、哮喘、厭食等[4，6-7]。

針對(duì)新冠肺炎疫情，廣東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)提出薄蓋靈芝為確診輕型新冠肺炎病例中醫(yī)藥辨證施治的重要方藥之一[8]，林志彬[7]提出靈芝可作為抗冠狀病毒的候選藥進(jìn)行研究。據(jù)中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)，2019年度靈芝產(chǎn)量為5.2萬(wàn)噸，同比增加10.61%[9]，靈芝產(chǎn)品的國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)銷售平穩(wěn)增長(zhǎng)，其開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景也越來(lái)越廣闊。

作為短平快的特色優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)室內(nèi)靈芝栽培，在縣域經(jīng)濟(jì)調(diào)整、梅州精準(zhǔn)扶貧[10]和鄉(xiāng)村振興中起著重要作用。2020年初對(duì)梅州未對(duì)接農(nóng)村科技特派員的238個(gè)精準(zhǔn)扶貧省定貧困村調(diào)查統(tǒng)計(jì)，共有36個(gè)村開(kāi)展靈芝栽培作為脫貧致富產(chǎn)業(yè)，占調(diào)查村的15%。

針對(duì)梅州精準(zhǔn)扶貧過(guò)程中存在的靈芝生產(chǎn)菌種、不同栽培處理和收粉季節(jié)選擇對(duì)孢子粉產(chǎn)量的影響進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)分析不同處理靈芝的生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)，探討栽培季節(jié)選擇與靈芝孢子粉產(chǎn)量的關(guān)系，以期為靈芝的產(chǎn)業(yè)振興和健康發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株來(lái)源

梅州本地種：梅州市農(nóng)林科學(xué)院微生物研究所分離的本地靈芝菌種（編號(hào)：MW-ML01.9908）。經(jīng)過(guò)栽培馴化，菌絲體繼代培養(yǎng)，每隔3個(gè)月轉(zhuǎn)管1次，4℃～6℃冰箱保藏。生物學(xué)特性為菌絲濃密、雪白，子實(shí)體紅褐色，菌蓋厚實(shí)且呈腎形，孢子粉產(chǎn)量多。

三明京大種：福建省三明真菌研究所購(gòu)買引進(jìn)，經(jīng)過(guò)馴化試驗(yàn)穩(wěn)定并已用于企業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)的菌種（編號(hào)：MW-SMJD.1012）。菌絲體繼代培養(yǎng)，每隔3個(gè)月轉(zhuǎn)管1次，4℃～6℃冰箱保藏。生物學(xué)特性為菌絲濃密、雪白，子實(shí)體紅褐色，菌蓋呈腎形，菌柄短，孢子粉產(chǎn)量多。

1.2 培養(yǎng)基配方與制作

母種培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯汁20%、葡萄糖2%、瓊脂2%，加水至1 000 mL。PDA培養(yǎng)基制作方法為取去皮馬鈴薯200 g，切碎成丁，加水1 000 mL煮沸20 min，紗布過(guò)濾，再加20 g瓊脂和20 g葡萄糖，充分溶解后補(bǔ)足水至1 000mL，分裝入21mm×200mm試管中，每試管約10 mL，121℃滅菌30min后取出，試管擺斜面至冷卻，在超凈工作臺(tái)內(nèi)定量接入平板尖端菌絲，室溫培養(yǎng)。

原種培養(yǎng)基：麥粒（玉米粒）99%、石膏1%。麥粒（玉米粒）配方制作方法為麥粒（玉米粒）除雜、除壞，清水浸泡24 h，撈起后沸水煮20 min～30 min，顆粒無(wú)白心時(shí)即可撈起，晾干至表面無(wú)水，加入石膏拌勻（實(shí)際生產(chǎn)中可加適量木屑），混合裝袋（瓶），每袋（瓶）高12 cm為宜，121℃滅菌 90 min，冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)定量接入平板尖端菌絲，室溫培養(yǎng)[11]。

栽培料配方：木屑88%、麥麩6%、玉米粉5%、石膏0.75%、滑石粉0.25%。在實(shí)際工廠化生產(chǎn)栽培靈芝過(guò)程中，保證靈芝質(zhì)量和產(chǎn)量的同時(shí)，原材料要來(lái)源方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，成本要可控，制作工藝要簡(jiǎn)易方便、可批量生產(chǎn)。其栽培方法為按栽培料配方準(zhǔn)備各培養(yǎng)料，提前0.5 d預(yù)濕木屑，按料水比1∶1.5加水拌勻，裝袋，每袋折合干料分別為260 g、340 g，100℃常壓滅菌15 h，自然冷卻后在接種室內(nèi)定量接入菌種，室溫培養(yǎng)。待菌絲定植八成左右后，按量運(yùn)送至舊寨村有機(jī)靈芝種植基地開(kāi)展室內(nèi)靈芝代料栽培[12-13]。3月中旬開(kāi)始分批次開(kāi)袋出菇，待芝蓋白色生長(zhǎng)圈基本消失呈鮮紅褐色時(shí)移入規(guī)格為200 cm×100 cm×195 cm的收粉架中，棉布密封，保證濕度，定期通風(fēng)，上架40 d后依次采收孢子粉和子實(shí)體。

1.3 代料栽培規(guī)格及數(shù)量

選用靈芝常用的3種處理方式，2019年在同一栽培場(chǎng)所進(jìn)行室內(nèi)靈芝代料栽培比較試驗(yàn)。

試驗(yàn)場(chǎng)地選擇在梅州市大埔縣三河鎮(zhèn)舊寨村（精準(zhǔn)扶貧省定貧困村）有機(jī)靈芝栽培基地，該基地占地面積有15 000m2，最大可栽培赤靈芝菌包10萬(wàn)袋。不同處理的栽培規(guī)格及數(shù)量見(jiàn)表1。

表1 不同處理Tab.1 Different treatments

1.4 試驗(yàn)方法及結(jié)果觀測(cè)

1.4.1 菌種母種、原種和菌包的主要農(nóng)藝性狀觀察與記錄

觀察并記錄靈芝母種、原種菌絲長(zhǎng)滿時(shí)間，觀察菌絲的長(zhǎng)勢(shì)、濃密度、顏色、氣生菌絲量、邊緣整齊度等主要農(nóng)藝性狀的實(shí)際情況。

1.4.2 不同模式下靈芝農(nóng)藝性狀觀察及相關(guān)參數(shù)統(tǒng)計(jì)

測(cè)量栽培袋物理性狀，觀察栽培袋定植時(shí)間，測(cè)量并記錄菌絲生長(zhǎng)速度、滿袋時(shí)間及菌絲的長(zhǎng)勢(shì)、整齊度等情況。觀察開(kāi)袋后原基形成時(shí)間、上架成熟時(shí)間、采收時(shí)間。

觀察子實(shí)體生物學(xué)性狀，包括菌蓋顏色、菌蓋面積、菌柄長(zhǎng)度，并記錄靈芝（孢子粉）產(chǎn)量，計(jì)算污染率、生物學(xué)效率、經(jīng)濟(jì)效益等數(shù)據(jù)。

觀測(cè)栽培場(chǎng)所溫度、濕度，記錄日常工作情況，包括出芝管理、上架管理、采收情況等，形成有機(jī)靈芝栽培基地工作記錄。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用Excel進(jìn)行處理和分析，差異顯著性采用LSD法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 靈芝生產(chǎn)菌種的比較

試驗(yàn)參照生產(chǎn)栽培企業(yè)實(shí)際情況，選擇在室溫下觀察2個(gè)靈芝菌株的母種和原種的生長(zhǎng)情況，詳見(jiàn)表2、表3。

表2 靈芝菌種在母種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況Tab.2 Mycelial growth of Ganoderma lingzhi strains on stock culturemedia

表3 靈芝菌種在原種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況Tab.3 Mycelial growth of Ganoderma lingzhi strains onmother spawnmedia

由表2、表3可以看出，梅州常用的2個(gè)靈芝菌種在母種、原種培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況差異不大。雖然在菌絲生長(zhǎng)速度方面三明京大種有一定的優(yōu)勢(shì)，但總體上2個(gè)菌種均生長(zhǎng)旺盛，菌絲長(zhǎng)勢(shì)良好、濃密、潔白、邊緣整齊。對(duì)于氣生菌絲而言，梅州本地種菌株在原種培養(yǎng)基上的數(shù)量多于母種培養(yǎng)基，而三明京大種母種培養(yǎng)基上的數(shù)量反而多于原種培養(yǎng)基上的數(shù)量。

2.2 不同處理下靈芝在栽培袋中的生長(zhǎng)狀況

3種處理的靈芝栽培袋菌絲滿袋情況見(jiàn)圖1。

圖1 長(zhǎng)滿菌絲的靈芝菌包Fig.1 The Ganoderma lingzhi bag overgrown withmyclium

如圖1所示，目前梅州靈芝（栽培袋）菌包生產(chǎn)企業(yè)大部分是訂單式生產(chǎn)，除自留栽培外，大部分菌包待菌絲長(zhǎng)滿后，銷售到各栽培基地（或村示范基地等）后進(jìn)行開(kāi)袋出菇栽培。按實(shí)際情況，栽培袋菌絲生長(zhǎng)情況在梅州市微生物研究所中車栽培示范基地觀測(cè)，開(kāi)袋出菇及后期對(duì)比試驗(yàn)則在舊寨村栽培基地觀測(cè)。

3種處理靈芝菌絲的生長(zhǎng)情況見(jiàn)表4。

表4 不同處理栽培袋中菌絲生長(zhǎng)情況Tab.4 Mycelial growth situation of cultivation bags in different treatments

由表4可知，不同處理靈芝菌包的定植能力都較強(qiáng)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)濃密、潔白、整齊。菌絲生長(zhǎng)速度有差異，但差異不顯著。

3種處理靈芝菌包的物理性狀及靈芝菌株生長(zhǎng)狀況見(jiàn)表5和圖2。

表5 不同處理栽培袋的物理性狀和生長(zhǎng)狀況參數(shù)Tab．5 Physical properties and growth parameters of cultivation bags in different treatments

圖2 不同處理靈芝在各階段所需要的時(shí)間Fig．2 Time required of Ganoderma lingzhi ateach stage in different treatments

由表5和圖2可知，從污染率來(lái)看，處理3污染率較高，達(dá)3．405%，但都在塑料袋制種正常污染率10%的范圍內(nèi)[14]。另外，由于菌包的規(guī)格差異較大，因此各處理物理性質(zhì)和滿袋天數(shù)差異較大，但不影響后期開(kāi)袋至子實(shí)體成熟各階段的所需時(shí)間，均在 （36．5±1）d。

2.3 不同處理靈芝子實(shí)體生物學(xué)性狀比較

3種處理靈芝子實(shí)體的農(nóng)藝性狀及相關(guān)參數(shù)分析見(jiàn)表6。

表6 不同處理子實(shí)體主要農(nóng)藝性狀及其統(tǒng)計(jì)參數(shù)Tab．6 Fruitbodymorphology characters and its statistical parameters in different treatments

從表6可知，不同處理靈芝子實(shí)體形態(tài)外觀均為紅褐色、叢生（分支數(shù)1個(gè)～2個(gè)），腎形，菌柄較短，菌蓋邊緣規(guī)整，出芝總體較整齊。但靈芝子實(shí)體外觀大小有差異，處理1的菌蓋最小，但菌蓋最厚，菌柄較長(zhǎng)，且子實(shí)體大小不一，處理2和處理3的菌蓋較大。處理2和處理3對(duì)比也有差異，處理2菌蓋較厚，而處理3出芝整齊度最好、大小均勻，菌蓋面積最大但相較而言稍薄，菌柄也最短。靈芝子實(shí)體形態(tài)特征總體良好度為：處理3>處理2>處理1。

2.4 不同處理赤靈芝的產(chǎn)量及生物學(xué)效率比較

對(duì)舊寨村栽培基地菌包實(shí)際上架數(shù)和靈芝產(chǎn)品的實(shí)際產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，3種處理靈芝的產(chǎn)量見(jiàn)表7。

由表7可知，無(wú)論是子實(shí)體還是孢子粉，顯然處理2都具有較明顯的優(yōu)勢(shì)，其干品產(chǎn)量分別為23．59 g、9．48 g；處理3產(chǎn)量相比于處理2稍少，但其差異不明顯；處理1的產(chǎn)量雖明顯低于處理2和處理3，但生物學(xué)效率最高，為21．21%。

表7 不同處理靈芝的產(chǎn)量Tab．7 The yield of Ganoderma lingzhi in different treatments

在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，每個(gè)彈粉架可容納的菌包數(shù)和菌包規(guī)格導(dǎo)致不同處理生產(chǎn)下成本略有差異，但根據(jù)舊寨村生產(chǎn)實(shí)踐，每個(gè)彈粉架的人工成本相差不多。不同處理的靈芝經(jīng)濟(jì)效益詳見(jiàn)表8。

表8 不同處理靈芝的經(jīng)濟(jì)效益Tab．8 Economic benefits of Ganoderma lingzhi in different treatments

由表8可知，對(duì)各處理進(jìn)行經(jīng)濟(jì)效益分析可知，處理2的凈利潤(rùn)最高，分別為3．48元/袋、1 393．85元/架；按每架成本相同計(jì)算，處理2、處理3相比于處理1可分別增收11．62%、8．87%。

2.5 不同處理收粉季節(jié)對(duì)孢子粉產(chǎn)量的影響

靈芝孢子是靈芝生長(zhǎng)成熟期從菌蓋的菌管中彈射出來(lái)的細(xì)小孢子，是靈芝的生殖細(xì)胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)[15]，凝聚了靈芝的全部精華[16-17]，靈芝孢子粉集中了靈芝的最有效成分[18]。梅州在實(shí)際生產(chǎn)栽培過(guò)程中主要收集第一潮孢子粉，其占整個(gè)靈芝產(chǎn)業(yè)效益的80%～90%[19]，此后采收子實(shí)體僅作為副產(chǎn)品。根據(jù)梅州氣候條件，靈芝孢子粉收粉季節(jié)主要集中在6月至7月初（總共約50 d）。按旬進(jìn)行靈芝孢子粉產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)，并通過(guò)Excel二次函數(shù)曲線建立靈芝孢子粉產(chǎn)量變化幅度趨勢(shì)圖，見(jiàn)表9和圖3。

表9 不同處理和季節(jié)靈芝孢子粉產(chǎn)量Tab．9 The yield of Ganoderma lingzhi spore in different treatments and seasons

圖3 靈芝孢子粉產(chǎn)量變化趨勢(shì)圖Fig．3 Trends chart on the yield of Ganoderma lingzhi spore in different seasons

由表9和圖3可知，各處理中6月中旬前后（約20 d）的孢子粉產(chǎn)量達(dá)到峰值，是收集孢子粉的最好季節(jié)。根據(jù)表9構(gòu)建靈芝孢子粉產(chǎn)量變化幅度趨勢(shì)圖，其中處理1孢子粉袋均產(chǎn)量（Y1，g）二次函數(shù)公式為：

處理2孢子粉袋均產(chǎn)量（Y2，g）二次函數(shù)公式為：

處理3孢子粉袋均產(chǎn)量（Y3，g）二次函數(shù)公式為：

根據(jù)趨勢(shì)圖多項(xiàng)式計(jì)算，處理1和處理2在6月上中旬的產(chǎn)量達(dá)到峰值，分別為11.4 g和13.2 g，而處理3的峰值在6月中下旬，為11.5 g。

孢子粉產(chǎn)量變化趨勢(shì)圖結(jié)合栽培溫度變化進(jìn)行分析，栽培基地的室內(nèi)溫度變化情況詳見(jiàn)圖4。

圖4 2019年靈芝栽培基地室內(nèi)溫度變化情況Fig.4 Indoor temperature changes of cultivation site of Ganoderma lingzhi in 2019

由圖4可知，4月底至6月栽培基地溫度穩(wěn)定在22℃～30℃，這也是靈芝出芝管理（含孢子粉收集期）的適合溫度范圍[20]。

3 討論與小結(jié)

通過(guò)對(duì)處理2和處理3的試驗(yàn)比較可以看出，在其他條件相同的情況下，2個(gè)菌株的母種、原種和栽培種的菌絲生長(zhǎng)差異均不明顯，但靈芝生長(zhǎng)各階段所需要的時(shí)間和子實(shí)體的主要農(nóng)藝性狀均有一定的差異；此外，在前期的拮抗試驗(yàn)中，兩者無(wú)明顯拮抗現(xiàn)象和菌絲倒退現(xiàn)象[21]。據(jù)此初步判斷這兩個(gè)菌株親緣關(guān)系較近，是否為異名同種菌株，需要做DNA指紋圖譜、同工酶圖譜等鑒別技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。

通過(guò)對(duì)處理1和處理2的對(duì)比試驗(yàn)可以看出，同一品種在不同規(guī)格的栽培袋中，其母種、原種、栽培種的菌絲主要農(nóng)藝性狀無(wú)顯著差異，且其生長(zhǎng)各階段所需要的時(shí)間也基本一致，但其產(chǎn)量、經(jīng)濟(jì)效益差異明顯；同時(shí)其生物學(xué)效率也存在較大差異，特別是從處理1和處理2的孢子粉產(chǎn)量變化幅度趨勢(shì)圖（呈近平行線），可推測(cè)這與兩者培養(yǎng)料的體積和重量存在直接關(guān)系，但培養(yǎng)料的體積和重量越大是否其經(jīng)濟(jì)效益也會(huì)隨之增大，則需要進(jìn)一步通過(guò)相關(guān)試驗(yàn)論證。

通過(guò)舊寨栽培基地室內(nèi)溫度觀測(cè)和靈芝產(chǎn)量多項(xiàng)式趨勢(shì)分析推測(cè)，梅州地區(qū)尤其是大埔縣6月中旬采收孢子粉能獲得更高的產(chǎn)量和收益。再按靈芝開(kāi)袋到子實(shí)體成熟約40 d、靈芝上架收集孢子時(shí)間40 d推算，則在季節(jié)選擇上梅州代料靈芝栽培技術(shù)選擇3月下旬菌包開(kāi)袋、5月上旬靈芝上架收集孢子粉可以獲得更高的產(chǎn)量和收益。需要特別注意的是每年3月下旬至4月中旬廣東會(huì)出現(xiàn)不同程度的倒春寒天氣，極易將開(kāi)袋后新出菇蕾凍死，切記應(yīng)在倒春寒期間給靈芝菌包做好保溫措施，否則會(huì)影響靈芝菌包產(chǎn)量和收益。

通過(guò)對(duì)梅州靈芝栽培常用3種處理的綜合分析可知，處理2的產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益最高，具有豐產(chǎn)性和高產(chǎn)值等優(yōu)勢(shì)，適合在梅州示范推廣應(yīng)用；處理3受高溫影響小，具有耐高溫的特點(diǎn)，在日均氣溫高于30℃但低于33℃的情況下，仍具有較高的穩(wěn)產(chǎn)性，若考慮延長(zhǎng)采收期至7月份的栽培戶可選用處理3進(jìn)行栽培；處理1則在生物學(xué)效率方面具有優(yōu)勢(shì)，可充分利用原材料。